1、ICS 67050B 50中华人民共和国国家标准农业部1077号公告一22008水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定高效液相色谱法Determination of nitrofuran metabolites residues in fishery productsby high performance liquid chromatography20080811发布 20080811实施中华人民共和国农业部发布所。月日 置农业部1077号公告22008本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部渔业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。本标准起草单位：农
2、业部水产品质量监督检验测试中心(上海)、中国水产科学研究院东海水产研究本标准主要起草人：蔡友琼、王嫒、贾东芬、于慧娟、黄冬梅、钱蓓蕾、史志霞、徐捷。农业部t077号公告一22008水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了水产品中呋喃唑酮代谢物3一氨基一2一唑烷基酮(AOZ)、呋喃它酮代谢物5一甲基吗啉一3一氨基2唑烷基酮(AMOZ)、呋喃西林代谢物氨基脲(SEM)和呋哺妥因代谢物1一氨基2一内酰脲(AHD)残留量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于水产品中呋哺唑酮代谢物、呋喃它酮代谢物、呋哺西林代谢物和呋哺妥因代谢物残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过
3、本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法SCT 3016水产品抽样方法3原理试样中残留的硝基呋喃类代谢物用三氯乙酸甲醇溶液提取，经衍生、乙酸乙酯萃取、固相萃取柱净化后，用紫外检测器进行检测，外标法定量。4试剂和材料4 1本标准所用试剂应无干扰峰。除另有特别说明外，所用试剂均为分析纯。试验用水应符合GBT6682一级水的要求。4 2乙腈：色谱纯。4 3乙腈溶液：
4、30mL乙腈与70mL水混合溶解。44甲醇：色谱纯。4 5 5甲醇溶液：5 mL甲醇与95 mL水混合溶解。46乙酸乙酯：色谱纯。4 7异丙醇：色谱纯。4 8庚烷磺酸钠：色谱级。4 9异辛烷：色谱纯。4 10冰乙酸：色谱纯。411酸性氧化铝：100目200目。4 12硅胶C18键合材料：100目200目。4 13吸附型离子交换树脂：100目200日。4 14提取剂1：酸性氧化铝、硅胶C18键合材料和吸附型离子交换树脂按30：40：30比例混合。农业部1077号公告22008415三氯乙酸：优级纯。4 16提取剂2：三氯乙酸一甲醇溶液，称取554 g三氯乙酸溶于500mI。水中，加入500mL甲
5、醇混合。4 17邻氯苯甲醛：色谱纯。4 18衍生化试剂：吸取100”L邻氯苯甲醛，溶解于5mL冰乙酸和20mL甲醇混合液中。4 19氢氧化钠。4 20 10 molL氢氧化钠：称取固体氢氧化钠40 g，加水溶解冷却后，定容到100 mL。4 21 1 molL氢氧化钠：称取固体氢氧化钠4 g，加水溶解冷却后，定容到100 mL。4 22净化柱：C18一CN混合柱，200mg，3mL；或性能相当者。423 005庚烷磺酸钠溶液：称取0500 g庚烷磺酸钠，加1 000 mL水溶解。4 24标准品：氨基脲(SEM)、3氨基一2一唑烷基酮(AOZ)、5一甲基吗啉一3一氨基一2一唑烷基酮(AMOZ)、
6、卜氨基一2一内酰脲(AHD)，纯度99。425标准贮备溶液：准确称量AMOZ、AHD、AOZ、sEM各10 mg，用甲醇分别定容于100 mL容量瓶中，配制成100“gmL的标准贮备液。一18冰箱中保存，有效期6个月。4 26混合标准工作溶液：使用前取425标准贮备溶液，用甲醇稀释成所需浓度。5仪器51高效液相色谱仪：配紫外检测器。52天平：感量001 g。53分析天平：感量0000 01 g。5 4离心机：6 000 rrain。5 5旋转蒸发仪。5 6可水浴加热超声波清洗机或恒温水浴摇床。57氮吹仪。5 8旋涡混合器。59固相萃取仪。5 10匀浆机。6色谱条件6 1色谱柱：SBCN柱，25
7、0mmX46mm(id)，粒度5肛m；或性能相当者。62流动相：乙腈+异丙醇+乙酸乙酯+冰乙酸+o05庚烷磺酸钠溶液(510+5+o1+80)。6 3流速：10mLrain。6 4柱温：30。65检测波长：280 nrn。66进样量：50“L。7测定步骤71样品处理7 11试样制备按照SCT 3016规定执行。7 12提取9农业部1077号公告22008准确称取已捣碎的样品10 g(o05 g)，置于50 mI，离心管中，加入7 g提取剂1(414)及lo mL提取剂2(416)，漩涡混合后于40摇床振摇或超声30 min，于6 000 rmin离心10 min，取出上清液于另一50mI离心管
8、中；再加入10mL提取剂2(416)，重复提取一遍，合并提取液。7 1 3衍生化于712提取液中，加入衍生化试剂(418)05mL混匀后，于40。C摇床振摇或超声60min，取出冷至室温。71 4萃取将冷却后的上清液用10 molL和1 molL的氢氧化钠调pH到70(士01)，加入15 mL乙酸乙酯萃取，4 000 rmin离心10min后，取出乙酸乙酯层于梨形瓶中，再加入lOmL乙酸乙酯，重复上述操作两次，合并乙酸乙酯层，于35。C水浴中减压旋转蒸发至干，加入5的甲醇溶液(45)5 mL溶解残渣。7 1 5净化将净化柱(422)依次用5 mL甲醇、5 mL水活化后，加入714最终溶液以1
9、mLmin2 mLmin速度过柱，待样液全部过完后加5 mL水淋洗，抽干，弃去流出液，用2mL甲醇以1 mLmin2 mLmin速度洗脱，接收全部洗脱液，40。C氮气吹干。残留物用10 rnL乙腈溶液(43)及2 mL异辛烷溶解，振荡混匀，6 000 rmin离心10 min，取下层乙腈水层过022”m有机相微孔滤膜，供高效液相仪器测定。72工作曲线移取适量AMOZ、AHD、AOZ、SEM混合标准溶液，添加到10mL提取剂2(416)中，使其浓度分别为05 ngmL、10 ngmL、50 ngmL、100 ngmI和500 ngmL，按713715测定步骤处理用高效液相色谱仪测定，绘制标准工作
10、曲线。或采用与待测物相近浓度的标样进行单点测定。7 3色谱测定标准工作溶液和样液中的AMOZ、AHD、AOZ、SEM响应值均应在线性范围之内。在上述条件下，空白试样、标准溶液和加标样品的色谱图参见附录A。8计算样品中AMOZ、AHD、AOZ、SEM的含量按公式(1)计算。计算结果需扣除空白值，结果保留三位有效数字。rAXC,Vu A。7l式中：c样品中被测物含量，单位为微克每干克(pgkg)；e上机测定时的标准溶液中被测物的含量，单位为纳克每毫升(ngmL)A被测样品的峰面积；A标准的峰面积；V样品最终定容体积，单位为毫升(mL)；m样品质量，单位为克(g)。9方法灵敏度、准确度和精密度9 1
11、灵敏度本方法AMOZ、AHD、AOZ、SEM的检出限为05 pgkg，最低定量限均为1o pgkg。9 2准确度农业部1077号公告一22008本方法在05 ngmL50 ngmL范围内，AMOZ、AHD、AOZ、SEM的回收率均为70110。93精密度本方法批内和批间相对标准偏差15。附录A(资料性附录)液相色谱图A 1 硝基呋喃类代谢物混合标准溶液色谱图100 ngmL硝基呋哺类代谢物混合标准溶液色谱图见图A1。农业部1077号公告一220080 5 10 15 20图A1 100 ngn也硝基呋喃类代谢物混合标准溶液色谱图A2空白虾样品色谱图空白虾样品色谱图见图A2。mAU432l0图A 2空白虾样酷色谱翻栅。”：”。舢农业部1077号公告一2-2008A 3空白虾样品添加10 pr,kg硝基呋喃类代谢物色谱图空白虾样品添加10“gkg硝基呋喃类代谢物色谱图见图A3。mAu32l0123-4O 10 20图A 3空白虾样品添加10斗gkg硝基呋喃类代谢物色谱图
