1、ICS 67050B 50中华人民共和国国家标准农业部1077号公告一32008水产品中链霉素残留量的测定_JL- Ej同 效液相色谱法Determination of streptomycin residues in fish and fishery productsby high performance liquid chromatography20080811发布 20080811实施中华人民共和国农业部发布刖 罱农业部1077号公告一32008本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。本标准起草单位：中国海洋
2、大学。本标准主要起草人：林洪、江洁、王立、徐杰、王静雪。农业部1077号公告32008水产品中链霉素残留量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了水产品中链霉素残留量的高效液相色谱荧光测定方法。本标准适用于水产品中链霉素残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法SCT 3016水产品抽样方法3原理以三氯乙酸提取样品
3、中的链霉素，经过C。固相萃取柱净化，在碱性条件下柱后衍生，高效液相色谱荧光检测器测定，外标法定量。4试剂所有试剂在给定的色谱条件下应无干扰峰，除标明纯度外，均为分析纯。4 1试验用水应符合GBT 6682一级水的要求。4 2链霉素标准品：硫酸链霉素，纯度98。4 3甲醇：色谱纯。44叔丁基甲醚：色谱纯。4 5正己烷：色谱纯。46庚烷磺酸钠：色谱纯。4 7萘醌磺酸钠：1，2萘醌4磺酸钠，色谱纯。48乙腈：色谱纯。4 9三氯乙酸：分析纯。410氢氧化钠：优级纯。41 1 10三氯乙酸溶液：称敷三氯乙酸277 g，用250 mL水溶解。4 12 05 toolL庚烷磺酸钠溶液：准确称取505 g庚烷
4、磺酸钠，用水溶解，定容至50 mL。4 13叔丁基甲醚正己烷溶液：叔丁基甲醚+正己烷(4+1)。4 14 02 toolL氢氧化钠溶液：称取800 g NaOH，用1 000 mL水溶解，使用前过045“m微孔滤膜过滤并脱气。415乙腈溶液：乙腈+水(3十7)。4 16庚烷磺酸钠一萘醌磺酸钠溶液：准确称取110 g庚烷磺酸钠、0052 g萘醌磺酸钠，用乙腈溶液(415)溶解，定容至500 mL，用乙酸调节至pH33(01)，避光。农业部1 077号公告一320084 17 oOl moL庚烷磺酸钠溶液：准确称取110 g庚烷磺酸钠，用乙腈溶液(415)溶解，定容至500 mI。，用乙酸调节至p
5、H33(01)。4 18链霉素标准储备液：准确称取链霉素标准品0100 g，用水溶解定容至100 mL，配制成1 ragmL的储备液，一4密封避光存放，存放时间不超过15天。419链霉素标准工作液：使用前将链霉素标准储备液用庚烷磺酸钠溶液(417)稀释成一系列标准工作液，现用现配。5仪器51高效液相色谱仪：配荧光检测器。5 2柱后衍生仪：PCXS200，Pickering；或性能相当者。5 3固相萃取仪。54分析天平：感量00001 g。5 5天平：感量001 g。5 6离心机：最大转速5 000 rmin。5 7均质机。5 8旋转蒸发器。59容量瓶：5mL，25mL。510鸡心瓶：50mL。
6、5 11离心管：50mL。5 12 C。固相萃取柱：500mg，3mL，AccuBONDC。s，Agilent；或性能相当者。注：提及公司的信息及标识，除非做了说明，并不意味推荐使用该公司的产品。6色谱条件61色谱柱：Hypersil C，8柱，150 minX46 mm，5 tLm，或性能相当者。6 2色谱柱温度：45。C。63流动相：庚烷磺酸钠一萘A2磺酸钠溶液(416)。64流动相流速：08 mLrain。6 5进样量：50L。6 6检测波长：激发波长263 nm，发射波长438 nrn。6 7衍生试剂：02 toolL NaOH(414)。68反应温度：50。C。69衍生试剂流速：03
7、 mLmin。610反应管：10mX28mm。7操作方法7 1试样制备按照SCT 3016的要求制备试样。7 2提取称取试样(5士o02 g)于50mL离心管中，加入10mL三氯乙酸溶液，10 000 rmin均质1rain，振荡5min，4 500 rrain离心15rain，上清液转移至烧杯中，残渣用10mL三氯乙酸溶液同上述方法再提取一2农业部1077号公告一32008次，所得上清液合并过滤，收集到25mL容量瓶中，加入2mI，庚烷磺酸钠溶液(412)，用水定容至25 mL，摇匀。7 3固相萃取净化依次用5mL甲醇和10mL水预洗C18固相萃取柱。将72步骤的提取液以约15mI。rain
8、流速通过固相萃取柱。依次用10mL水和4mL叔丁基甲醚一正己烷溶液洗柱，弃去洗出液。用5mL甲醇以约15mLrain流速进行洗脱，收集洗脱液于鸡心瓶中，加入2mL水，45。C减压浓缩至液体剩余1mL2mL，转移至5mL容量瓶，用2mL庚烷磺酸钠溶液(417)洗瓶，合并于容量瓶，用庚烷磺酸钠溶液(417)定容至5mL，经045“m微孔滤膜过滤，待上机分析。注：周相萃取柱的预处理和净化过程保持柱子湿润。74标准工作曲线的制作准确取标准储备液(418)，用庚烷磺酸钠溶液(417)稀释成浓度为01,gmL、05 ugmL、10,gmL、25“gmL、5O vgmL系列标准工作液，供高效液相色谱仪分析。
9、7 5色谱分析分别注入50“L标准工作液和试样提取液于高效液相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。在6规定的条件下，链霉素保留时间约为64 min。根据标准品的保留时间定性，外标法定量。色谱图参见附录A。76空白试验除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。8计算试样中链霉素的含量按公式(1)计算。计算结果需扣除空白值，结果保留三位有效数字。x一丛警黑型(1)式中：x试样中链霉素含量，单位为微克每千克(pgkg)；G标准溶液中链霉素含量，单位为微克每毫升(pgmL)；A试样液中链霉素的峰面积；y试样提取液最终定容体积，单位为毫升(mL)；A，标
10、准溶液中链霉素的峰面积；m试样质量，单位为克(g)。9方法灵敏度、准确度和精密度9 1灵敏度本方法最低定量限lOO pgkg，最低检出限20 pgkg。9 2准确度本方法加标浓度为100g妇5 ooo,gkg时，回收率为70120。9 3精密度本方法批内和批间相对标准偏差15。农业部1 077号公告一3-2008附录A【资料性附录)链霉素液相色谱图A1 链霉素标准品液相色谱图10tgmL链霉素标准品液相色谱图见图A1。Er=263，E-m=438 -图A 1 1 0 p喀n,L链霉素标准品液相色谱图A2空白鲫鱼试样液相色谱图空白鲫鱼试样液相色谱图见图A2。图A 2空白鲫鱼试样液相色谱图m帅moA3链霉素加标鲫鱼试样液相色谱图链霉素加标鲫鱼试样液相色谱图见图A3。E,=263，E,=438农业部1077号公告一3-2008图A 3 5 0斗gkg链霉素加标鲫鱼试样液相色谱图瑚狮捌瑚脚mo
