1、ICS 67050B 50中华人民共和国国家标准农业部1077号公告一72008水产品中恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星残留的快速筛选测定胶体金免疫渗滤法Fast screening of enrofloxacin，norfloxacin and ciprofloxacin residues in fisheryproductsDot immunogold filtration assay20080811发布 20080811实施中华人民共和国农业部发布刖 吾农业部1077号公告72008本标准附录A为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部渔业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分
2、技术委员会归口。本标准起草单位：中国海洋大学。本标准主要起草人：林洪、曹立民、江洁、隋建新。农业部1077号公告一72008水产品中恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星残留的快速筛选测定 胶体金免疫渗滤法1范围本标准规定了水产品中恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星残留的胶体金免疫渗滤快速筛选检测方法。本标准适用于水产品中恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星三种喹诺酮类残留的快速筛选检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日
3、期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法SCT 3016水产品取样方法3原理以磷酸盐缓冲液(或者水)甲醇混合溶液提取样品中的喹诺酮类残留，利用胶体金免疫渗滤试剂盒进行快速筛选检测。当待测物的浓度高于检测限时，试剂盒的反应板表面会显现红色斑点，由此定性检测样品中恩诺沙星等三种喹诺酮类残留。4试剂所有试剂除另有规定外，均为分析纯。4 1水：符合GBT 6682一级水要求。42甲醇：色谱纯。4 3盐酸：取83mL浓盐酸，以水稀释至1 000mL。4 4磷酸盐缓冲液(001 too|L，pH74)：称取NaCl 80 g，KCl 02 g，Na2HP0412H
4、20 29 g，KH2P04 20 g，加水溶解混匀，定容至1 000mL，用盐酸(43)调节pH至7401。4 5鱼类样品的提取溶剂：取50 mL磷酸盐缓冲液(44)与50 mL甲醇混匀，现用现配。4 6其他水产品样品的提取溶剂：取50mL水与50mL甲醇混匀，现用现配。4 7洗涤液：取100“L吐温一20与100 mL磷酸盐缓冲液(44)混匀。4 8胶体金免疫渗滤试剂盒：包含渗滤反应板、胶体金标记喹诺酮抗体等，见附录A。5仪器51分析天平：感量0001 g。5 2旋涡混合器。53高速冷冻离心机：最大转速12 000 rrain。54高速匀浆机。5 5均质器。56旋转蒸发器。1农业部1 07
5、7号公告一720085 7具塞离心管：50mL。58鸡心瓶：50mL。5 9容量瓶：5mI。，1 000mL。5 10移液枪：10xL，50 pL，5 000 pL。6测定步骤6 1试样制备按照SCT 3016的规定执行。6 2提取称取样品(5o01 g)于50 mL具塞离心管中，加入5 mL样品提取溶剂，均质2 rain后，2 000 rmin4离心10 rain，上清液倒入另一50 mL具塞离心管中。残渣中加入5 mL样品提取液，按上述方法再提取一次，上清液合并于50mL离心管中。盛装上清液的离心管10 000 rmin离心10rain，将上清液转移至鸡心瓶，于45水浴减压旋转蒸发至原体积
6、的13，剩余液转移至5mL离心管中，2 000 rmin4离心6 rain，上清液转移至5 mL容量瓶中，用磷酸盐缓冲液定容至5 mL，用孔径为022”m的针头滤器过滤备用。63测定631取5“L试样提取液滴加到试剂盒小孔中央，室温下放置反应15 rain。63 2滴加5“L胶体金标记抗体，待其渗入后反应5 rain。6 33加入30“L洗涤液进行洗涤，共洗涤3次，然后在10 rain内观察结果。634空白对照：以磷酸盐缓冲液代替试样提取液作为空白对照组，按照631633进行同步测定，膜片表面应不呈现红色或者其他任何色泽，否则应更换试剂盒重新进行测定。7结果判断肉眼观察样品检测结果，并与空白组
7、的显色结果对比，当硝酸纤维素膜片表面出现红色斑点时，判定存在以下三种结果中的任何一种，或者其中两种以上结果同时存在：恩诺沙星残留量10“gkg；环丙沙星残留量10 t,gkg；诺氟沙星残留量20 pgkg。8本方法的灵敏度本方法的最低检出限：恩诺沙星和环丙沙星均为10”gkg，诺氟沙星为20“gkg。附录A(规范性附录)喹诺酮胶体金免疫渗滤试剂盒技术要求农业部1077号公告一72008喹诺酮胶体金免疫渗滤试剂盒，可用于水产品中恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星三种喹诺酮类药物残留的快速筛选检测。试剂盒应该保存在28的干燥避光环境中，并在有效期内使用。使用前应将试剂盒及其试剂恢复至室温。每个试剂盒包括：24渗滤反应板：24孔，包被有喹诺酮抗体。1胶体金标记喹诺酮抗体(1 mL)。
