1、ICS 13.300;13.020.40 A 80 道昌中华人民共和国国家标准GB/T 21811-2008 化学晶鸟类繁殖试验Chemicals-A vian reproduction test 2008-05-12发布2008-09-01实施数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局也士中国国家标准化管理委员会保叩G/T 21811-2008 前言本标准等同采用经济合作与发展组织(OECD)化学品测试导则No.206 (1984年)(鸟类繁殖试验(英文版)。本标准做了下列编辑性修改z增加了范围部分;一一将计量单位改为我国法定计量单位F将原文的术语和定义部分提前，放入第2部分术语和定义;
2、删除原文的本标准不适用于高挥发性或不稳定的物质，因该内容己在第1章中有描述。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。本标准负责起草单位z中国检验检疫科学研究院。本标准参加起草单位z辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人z周新、陈会明、王军兵、于文莲、周川、刘海波、刘卫东、郝楠、孙鑫、王睁。I GB/T 21811-2008 化学品鸟类繁殖试验1 范围本标准规定了化学品鸟类繁殖试验的范围、术语和定义、受试物信息、试验方法、数据与报告。本标准适用于测定化学品对鸟类繁殖的影响，本标准不适用于高挥发性或不稳定的物质。2 术语和定义2. 1 2.2 下列术语和定义适用
3、于本标准。未觉察反应浓度NOEC Cnon-observed effects concentration) 在试验中未观察到影响的最大浓度。基本食物basal diet 未经处理的，不加入任何稀释剂、助溶剂、受试物，并适合和满足繁殖试验成鸟营养要求的食物量，或幼鸟的初始食物量。2.3 入孵蛋eggs set 用于孵化的蛋，即产蛋总量减去破裂蛋和用于测量蛋壳厚度的蛋。3 受试物信息3. 1 必备资料水溶解度;蒸气压;鸟类日粮LCso值。3.2 指导性信息结构式;一一-受试物纯度;一一正辛醇/水分配系数CPow); 一一句在食物中的定量分析方法;一一在水中、光中和食物中的化学稳定性z一一快速生物降
4、解试验结果。3.3 限制声明一一受试物应能均匀混合在食物中。为保证混合均匀，可使用对鸟低毒的载体。3.4 标准文件见参考文献1J和2J。4 试验方法4. 1 试验简介、目的、范围、意义和限度4. 1. 1 参比物本标准元推荐参比物。1 GB/T 21811-2008 4. 1. 2 试验原理在不少于20周的时间内，用含不同浓度受试物的食物投喂受试鸟。通过光照期的调控，诱导鸟下蛋。收集10周内产的蛋，置于人工孵化器，孵出幼鸟后，饲养14d。测定成鸟的死亡率、产蛋量、破裂蛋、蛋壳厚度、存活力、孵化力以及对幼鸟的影响等，并与对照组进行比较。4. 1.3 试验有效的条件一一试验结束时，对照组鸟的死亡率
5、不超过10%。一一对照组每笼孵出的14日龄幼鸟的平均数，分别不少于z绿头鸭(mallardduck) 14只，鹊鸦(bobwhite quail) 12只，日本鹊鸦(Japanese quail) 24只。一一对照组蛋亮的平均厚度分别不小于z绿头鸭(mallardduck) 0.34 mm，鹊鸦(bobwhitequail) 0.19 mm，日本鹊鸦(Japanesequail) 0.19 mmo 一一如果在使用所推荐的浓度范围未观察到受试物对繁殖的影响，试验结果可报告NOEC大于最高试验浓度。投喂含受试物的食物期间，应保证食物中受试物的浓度可满足试验要求，受试物的含量不能低于规定含量的80%
6、。4.2 试验程序4.2. 1 准备应有必要的饲养装置，特别是室内的装置及设施，包括良好的通风设施，合适的温度，相对湿度以及光照条件。人工光照应与当地的自然光照大体一致，且可自动控制。在黎明和黄昏时，应有15 min30 min的光照过渡期。将受试鸟随机分配到对照组和处理组中，并进行饲养装置、设施和基本食物的环境适应。环境驯养时间不短于两周。在驯养第一周内，对难以相处的鸟可再次进行随机分配。在驯养期间，如果任一性别的鸟的死亡率超过3%，或受试鸟变得衰弱，则不能采用该群鸟。4.2.2 装置下列装置是必备的z适用于鸟类繁殖和饲养幼鸟的鸟舍，清洁干净、空间合适。具温度控制装置的幼鸟育雏器。控温、控湿
7、、能够反转鸟蛋的孵化器。恒温、恒湿的鸟蛋贮存装置。4.2.3 试验动物4.2.3. 1 鸟种选择本方法可以使用一种或两种以上的鸟类，其选择应根据所进行的试验的要求而定。推荐的种类是绿头鸭mallardduck(Anaslatyrhynchos)丁、鹊鸦bobwhitequail (Colinus virginiatus) 和日本鹊鸦Japanese quail(Coturnix coturnix japonica)。如果使用了推荐以外的其他鸟种，则应在结果报告中说明其合理性。受试鸟可以从种禽场购买，或在实验室中饲养。只能从那些繁殖历史已知的种系来源获取受试鸟。这个历史应包括z饲养期的光照、疾病
8、记录、药品及药物使用情况以及准确的鸟龄。可能的情况下，还应同时获取受试鸟的饲养实践操作经验，使其能满足本实验室的需要。受试鸟应经过检查，没有任何疾病和伤害。处理组和对照组的鸟应来自亲代已知的同一种群。受试的绿头鸭(mallardduck)在外观上应与其他的野生种群相似。4.2.3.2 驯养和饲养条件成鸟应在温度22C:l:5C，相对湿度50%70%，通风良好，环境清洁的环境下饲养。表1给出了不同种类的附加特殊条件。2 GB/T 21811-2008 表1推荐的成鸟试验条件鸟种试验开始时的鸟龄试验中鸟龄的变异范围每对鸟的最小笼底面积绿头鸭Cmallardduck) 9月-2月士2周1 m2 稠鸦
9、(bobwhitequail) 20周-24周土1周0.25 m2 日本鸭鸦(Japanesequail) b 土1/2周0.15 m2 a如果使用较大的鸟群，则应按比例增加鸟笼的底面积。b建议在使用之前证明日本稠鸦(Japanese quail)是种鸟(见表3)，以减少变异。驯养期间，除基本食物不含受试物外，其他环境条件应与试验条件相同。应避免使用其他的受试剂和药品，如果使用，则应在结果报告中注明。应防止干扰，以避免鸟类行为的改变。入孵蛋和幼鸟的环境条件见表2。表2推荐的入孵蛋和幼鸟环境条件鸟种温度/C相对湿度/%绿头鸭(mallardduck) 贮存14-16 60-85 孵化37.5 6
10、0-75 出雏37.5 75-85 幼鸟，第1周32-35 60-85 幼鸟，第2周28-32 60-85 章骂鸦(bobwhitequail) 贮存15-16 55-75 孵化37.5 50-65 出雏37.5 70-75 幼鸟，第1周35-38 50-75 幼鸟，第2周30-32 50-75 日本鹊鸦Oapanesequail) 贮存15-16 55-75 孵化37.5 50-65 出雏37.5 70-75 幼鸟，第1周35-38 50-75 幼鸟，第2周30-32 50-75 是否翻蛋可选择是否可选择是否可选择是否表2中所列出的温度和湿度是对强制通风的孵化器和育雏器而言;对于无对流，依靠
11、重力换气的孵化器和育雏器，温度应高1.5t2t，相对湿度增加10%左右。在海拔较高的地方也应该增加相对湿度。应在距笼底2.5 cm4 cm处测量孵化器中的温度。4.2.4 试验条件4.2.4. 1 供试食物按试验设计配制试验中受试物的浓度，一般至少采用3个处理浓度，浓度设计以限定日食物LCso值试验结果为依据。最高浓度大约为LCso的50%，较低浓度设置按最高浓度的几何级数递减设置(如1/6和1/36)。推荐的最高浓度是1g/Lo 3 GB/T 21811-2008 受试物在基本食物中的混合均匀是选择混合方法的依据。应选用对鸟类低毒的载体以确保混合均匀，载体的量不应超过食物重量的2%。如果使用
12、了载体，应在对照组的食物中加入同样的载体。可以采用水、玉米油，以及其他已有充分证据表明不会干扰受试物毒性的载体。对于证据不充分的载体，需要用实验进行判断。幼鸟的食物中不应加入受试物和载体。4.2.5 试验操作以一对或一雄两雌(鹊鸦(bobwhitequail)和日本鹊鸦Oapanesequail)或三雌(绿头鸭(mallardduck)为一组，置于鸟舍(笼)中饲养。也可采用其他合理分组安排。处理组和对照组应在相同的条件下饲养。对于以一对鸟作为受试单位的，每个处理组和对照组应该至少重复12次，对于以一组为受试单位的，每一处理组和对照组，绿头鸭(mallardduck)至少为8笼，鹊鸦(bobwh
13、itequail)或日本鹊辑(Japanese quail)至少为12笼。试验开始，即对受试鸟投喂含受试物的食物，在整个试验过程中，都应对成鸟投喂含受试物的食物，对于在试验过程中产生的幼鸟，不投喂含受试物的食物。应提供清洁干净的饮用水。如果试验在室内人工环境条件下进行，试验开始后受试鸟应在短日照条件下(每天7h8 h光照)连续喂养8周。在此期间的黑暗期，应不受任何光的干扰或中断。然后调整光照周期，增加光照时间至每天16h18 h.以便诱使鸟进入繁殖状态。一般在2周4周后，鸟开始产蛋。如果试验是在室外自然条件下进行的，则试验的时间应与该鸟种在当地的自然繁殖季节相一致。在正常产蛋之前，受试鸟应至少
14、用含受试物的食物投喂10周。不管在哪一种条件下，在开始产蛋后，试验应至少继续进行8周，最好进行10周。试验开始的第一周内，受试物加入食物中后，应立即测定其最高浓度和最低浓度.4h内再对新混合的食物进行一次分析，直至食物中受试物的浓度稳定为止。若全部测定结果表明，食物中受试物的浓度在设计浓度的80%以上，则无需再进行分析。应经常更换经处理的食物，以保证受试物的浓度稳定。若测试结果表明，食物中受试物的浓度低于设计浓度的80%.则必须调整配置的起始浓度，或者增加更换食物的频率，以达到试验要求的实际浓度。在试验的第2周内，应对调整起始浓度或者增加更换频率的食物进行测定，以保证调整后的浓度已达到设计浓度
15、的80%以上。无论食物中受试物的稳定性如何，应至少每周更换一次食物。若受试物的稳定性只能靠每天更换食物来维持，则该试验无效。开始产蛋后，则应每天收集并贮存鸟蛋，并将鸟笼编号用铅笔标记在蛋的钝端。每周或每两周进行孵化(孵化条件见表2)。在孵化之前，取出贮存的鸟蛋，置于照明灯光下检查蛋壳有无破裂，如有破裂则不能进行孵化。6d7d之后应对所孵化鸟蛋再次进行检查，观察其是否存活。按照标记，应从每个鸟舍中取出至少2只蛋(如第3只蛋和第10只蛋，或第5天、第20天、第35天所收集的所有的蛋).以测定蛋亮的厚度。破裂的蛋不能用于测定蛋壳厚度。但其数目应计算在内。测定蛋壳厚度，应在最大直径处打开，冲洗内含物，
16、在自然条件下干燥后，沿直径最大横断面选34点进行测量。在绿头鸭(mallardduck)23 d，鹊鸦(bobwhitequail)21 d和日本鹊骋Oapanesequail) 16 d时应转换孵蛋条件为出雏条件。绿头鸭(mallardduck)在25d27 d.鹊鸦(bobwhitequaiD在23d24 d ，日本鹊辑(Japanese quail)在17d18 d内，应该全部完成孵化。孵出的雏鸟应按照原先标记的笼号分组饲养，或者对每一个体标记后群养。雏鸟应投喂适当的食物(不含受试物)至14d。适合幼鸟的温度和湿度见表2。每天光照14h.黑暗10h.光照和黑暗时有15 min30 min
17、的过渡期E其他的光周期也是可行的。4.2.6 观察试验中应进行下列观察z一一死亡率和中毒症状z每天。4 一一成鸟的体重:在试验的暴露期开始、产蛋开始以及研究的结束时。一一幼鸟的体重:14d时。一一成鸟的饲料消耗量z计算试验期间每间隔一周或两周的平均食物消耗量。一一幼鸟的饲料消耗量:在孵化后的第1周和第2周进行。一二十病理检查z所有死亡成鸟的。对1gPow3.0的受试物可进行特定组织的残留分析。5 数据与报告5. 1 敢据处理GB/T 21811-2008 按照研究计划中涉及的统计学程序将试验中各处理组分别与对照组进行比较。可采用任何通常可接受的统计方法，如方差法，或参考文献8J中给出的其他方法
18、。统计参数见表3。此外，在可能的情况下，还应统计产蛋率、成鸟体重和14日龄幼鸟的体重。表3繁殖过程中的正常参数参数绿头鸭(mallardduck) 事毒鸦(bobwhitequaiD 日本鹊鸦Oapanesequail) 产蛋数(每笼(舍)中10周)28-38 28-38 40-65 破裂蛋的百分数/%0.6-6 0.6-2 胚胎成活率(人孵蛋胚胎的发育百分率)/%85-98 75-90 80-92 孵化率(入孵蛋的出雏百分数)/%50-90 50-90 65-80 14日龄幼鸟的存活率/%94-99 75-90 93 每笼孵出雏鸟到14日龄时的存活数/%16-30 14-25 28-38 蛋
19、壳厚度/mm0.35-0.39 0.19-0.24 0.19-0.23 注2这些参数为一般值，但如果对照组与这些参数不相符合或相去甚远，则应检查试验程序和条件，以及发现潜在的问题。5.2 试验报告5.2. 1 试验报告应包括以下信息a) 受试物z化学鉴定数据。b) 受试鸟z学名及品系、来源，试验开始时的鸟龄(以周计或者月计)，所有的预处理等。c) 试验条件z一引|养条件z鸟笼的材料、大小和类型，鸟舍的温度、湿度，光照周期和光照强度，通风条件，以及试验过程中的变化;基本食物z来源、组成、营养成分分析(蛋白质、糖、脂肪、钙、磷等)，以及所使用的添加剂和载体等F-一供试食物z制备方法，处理浓度，食物
20、中受试物的设计和实测浓度，测定方法，混合和更换食物的频率，所使用的载体，贮存条件，投喂方法等z一一在驯养中，将鸟随机分配到各处理浓度和对照组，以及对于难于相处的鸟进行再次分配的程序和方法z每一试验鸟舍(笼中鸟的数量，每一处理组和对照组的重复次数;鸟和鸟蛋的标记方法z鸟蛋贮存、孵化出雏的条件，包括温度、湿度和翻转频率等;如果使用毒物作为参比物，其名称和浓度配制方法。5 GB/T 21811-2008 6 d) 结果z一一中毒症状、频率、持续时间，影响程度，受影响的个体数量等;一一成鸟和幼鸟的食物消耗量和体重;-一病理检查描述z一一鸟组织和蛋中受试物的残留分析;一一产蛋量、人孵蛋、胚胎发育率、孵化
21、率(包括正常孵化、蛋壳厚度表以各浓度每周每鸟舍为单位)、14日龄幼鸟的存活率P一一统计分析方法和结果分析;一-NOEC值及其他具显著统计学意义的效应值F一一试验中的异常或其他可能影响试验结果的相关信息。GB/T 21811-2008 参考文献lJ U. S. EPA: Registration of Pesticides in the United States Proposed Guidelines, Federal Register 43 , No.132 (July 10 ,1978). 2J Toxic Substances Control Act, Section 4: Reprod
22、uction Test Standards for Mallard and Bobwhite. Office of Toxic Substances, U. S. EPA, Washington,D. C. 3J National Research Council Laboratory Animal Management: Wild Birds. U. S. National A cademy of Sciences , Washington D. C. (1977). 4J National Research Council: Coturnix. Standards and Guidelin
23、es for the Breeding, Care, and Management of Laboratory Animal. U. S. National Academy of Sciences, Washington,D. C. (1969). 5J R. G. Heath, J. W. Spann and J. F. Kreitzer, Nature 224 , 47-48 (1969). 6J R. G. Heath and J. W. Spann, in Pesticides and the Environment: A Continuing Controver sy, pp. 42
24、1-435 ,Symposia Specialists,North Miami,Florida (1973). 7J G. Heinz,BuU. Env. Cont. Toxic. 11 ,386-392 (1974). 8J D. J. Finney, Statistical Methods in Biological Assay, 3rd ed. ,Griffin, Weycombe, U. K. or Macmillan,New York (1978). OONi-FNH筒。国华人民共和国家标准化学晶鸟类繁殖试验GB/T 21811-2008 中* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销 印张O.75 字数13千字2008年7月第一次印刷开本880X12301/16 2008年7月第一版* 书号:155066 1-32218 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 21811-2008
