1、ICS 65.120 B 46 GB 中华人民共和国国家标准G/T 18872-2002 饲料中维生素K3的测定高效液相色谱法Determination of vitamin K3 in feeds High-performance Iiquid chromatography 2002 -10 -31发布2003由04-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局中华人民共和国国家标准饲料中维生素K3的测定高效液相色谱法GB/T 18872-2002 司k中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂
2、印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售晤开本880X12301/16 印张1/2字数9千字2003年3月第一版2003年3月第一次印刷印数1-2000 铃书号:155066.1-19187 定价8.00元网址版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 18872-2002 前本标准在查阅国内外文献的基础上，参考美国全国饲料协会(NFIA)分析方法概要发表的方法高效液相色谱法(HPLC)测定全价饲料、预混料和维生素浓缩制剂中的维生素K3而制定。本标准在技术内容上参考国外方法，其方法原理、基本操作步骤相同;对范围、称样量、试样提取条件、高效液相色谱测定条件进行了改进，并做了明
3、确规定。本标准的附录A为资料性附录。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位:国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人:陈必芳、赵晓阳。1 范围饲料中维生素K3的测定高效液相色谱法本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中维生素K3含量的方法。GB/T 18872-2002 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混合饲料和维生素预混合饲料中维生素K3(亚硫酸氢铀甲荼醋)的测定。测量范围为每千克样品中含维生素K3在2.0mg以上。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均
4、不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699. 1 饲料采样方法3 原理用三氯甲皖氨溶液提取维生素K3并转化成游离甲荼酿，蒸发三氯甲皖，残渣榕解于甲醇中。用高效液相色谱测定，维生素K3(甲荼酿)经反相C18柱得到分离，紫外检测器检测，外标法计算。若以亚硫酸氢铀甲荼酿计需乘以校正系数。4 试剂和材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。4.1 水，GB/T6682一级用水或相当纯度的超纯水。4.2 三氯甲炕。4.3 甲醇，色谱纯。4.4 氢氧化氨2
5、5%。4.5 硅藻土(寅式盐)和无水硫酸铀棍合物:3+20(按质量)棍合。4.6 甲荼酶，纯度99.9%(作校准用)。4. 7 标准榕掖:a) 标准贮备液:称取约50mg甲荼酿纯品(4.6)准确至土0.1mg，榕于50mL甲醇(4.3)中，其贮备液浓度为每毫升含甲荼醋1mg，贮于棕色容量瓶中，在运4C冰箱中保存一周是稳定的。b) 标准工作液:精确吸取甲荼酿标准贮备液4.7a汀，用甲醇稀释200倍，使该标准工作液浓度为每毫升含甲荼醋5月。标准工作液当日配制。4.8 氮气，99.9%。5 仪器设备5.1 实验室常用仪器设备。5.2 超纯水装置(Millipore或全磨口玻璃蒸馆器)。1 G/ T
6、18872- 2002 5. 3 旋转振蔼器，200r/ mino 5. 4 旋转蒸发器。5. 5 离心机，3000 r/min。5.6 高效液相色谱仪，带紫外检测器、积分仪、记录仪。6 试样制备按GB/T14699采样，选取有代表性的饲料样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，全部通过0.28 mm孔径筛，混匀，装入密闭容器中，避光，低温保存备用。7 分析步骤7. 1 总则10 min)。附录A)，吸超过40C，小置入小容量升含甲荼酿17. 3 测定7. 3. 2 定量测定按高效液相色谱仪说明8 结果计算8. 1 计算公式:饲料中维生素忆的含量，按式(1)计算。piXVXnXi X V
7、叫xfJj = T) P X m X V i 式中:t一一每千克试样中维生素凡的含量，单位为毫克Cmg); m 试样质量，单位为克Cg); 2 、溶液有异臭，所以全部操作均后溶液浓度为每毫. C 1 ) V-一提取液的总体积，单位为毫升(mL);n一一提取液稀释倍数;P广一一维生素K3(甲荼醋)标准溶液浓度，单位为微克每毫升(g/mL); Vst一一维生素K3(甲荼目昆)标准溶液进样体积，单位为微升(L);Vj一一从试样榕液(7.2.2)中分取的进样体积，单位为微升(L);PS一一与标准溶液进样体积(Vs，)相应的峰面积响应值;P，一一与从试样溶液(7.2.2)中分取的进样体积(V.)相应的峰
8、面积响应值;G/T 18872-2002 f一一-校正系数，结果按甲荼眼计时，系数为1;以亚硫酸氢铀甲荼酿计时系数为1.9182。8.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留小数后一位。9 重复性同一操作者对同一试样同时两次平行测定所得结果相对偏差。每千克试样中维生素K3含量/mg1 000 相对偏差/(%)运士20运士15运士10NOON-Nh GB/T 18872-2002 附录(资料性附录)饲料样晶标示量、称样量及甲荼酿提取预稀释度示倒A 同阁。饲料样晶标示量、称样量及甲荼醒提取班稀释度维生素K3三氯甲烧体积提取液中甲提取液稀释注入HPLC饲料类别标示量样品量(m)/g(V)/mL 茶酿浓度/倍数(n预计浓度/(mg/kg) (g/mL) (g/mL) 20 ,000 0.25 50.0 100. 0 20 5 维生素预混合饲料2,000 0.5 50.0 20.0 4 5 1 000 1. 0 50.0 20. 0 4 5 复合预混合饲料100 1. 0 50.0 2.0 1 2 浓缩饲料20 5.0 50.0 2.0 0.5 2 10 5.0 50.0 1. 0 o. 5 2 配合饲料2 10.0 75 0.27 0.2 1. 35 L一一-一-一表A.1侵权必究山一元。d-1i-nHU L-nu nMU户hunu-W气E号一价书一定峰版权专有
