1、ICS 67050X 04 g雷中华人民共和国国家标准GBT 22952-2008河豚鱼和鳗鱼中阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、双氯西林残留量的测定液相色谱一串联质谱法Determination of amoxicillin，ampicillin，piperacillin，penicillin G，penicillin V，oxacillin，cloxacillin，nafcillin，dicloxacillin residues infugu and eelLCMSMS method2008-12-31发布 2009-05-01实施丰瞀徽鬻瓣警
2、雠瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会厦仲刖 吾本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本标准主要起草人：李学民、母健、刘晓茂、曹彦忠、刘亚新、庞国芳。GBT 22952-2008t范围河豚鱼和鳗鱼中阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、双氯西林残留量的测定液相色谱一串联质谱法GBT 22952-2008本标准规定了河豚鱼和鳗鱼中阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、双氯西林九种青霉素类药物残留量的液相色谱一串联质谱测定方
3、法。本标准适用于河豚鱼和鳗鱼中阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、双氯西林九种青霉素类药物残留量的测定。本标准方法的检出限：萘夫西林、青霉素G、哌拉西林、青霉素V、苯唑西林为10#gkg；阿莫西林、氨苄西林、氯唑西林、双氯西林为20 ygkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注F1期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 63791 测量方法与结果的准确
4、度(正确度与精密度) 第1部分：总则与定义(GBT 63791-2004，ISO 57251：1 994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第z部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 63792 2004，IsO 57252：1994，IDT)GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD)3原理试样中青霉素类药物残留用乙腈提取，旋转蒸发除去乙腈，用水定容，液相色谱一串联质谱仪测定外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯。41水：GBT 6682，一级水。42甲醇：色
5、谱纯。43乙腈：色谱纯。44正己烷。45乙腈饱和的正己烷：取100 mL正己烷(44)和50 mL乙腈(43)于250 mL分液漏斗中，振摇1 rain，静置分层后，弃掉乙腈。46氨水。47乙腈提取液：将100mL乙腈与06mL氨水(46)，充分混合。48标准物质：阿莫西林(CAS：2678778一o)穗E苄西林(cAs：69534)、哌拉西林(cAs：59703843)、1GBT 22952-2008青霉素G(CAS：69578)、青霉素V(CAS：132989)、苯唑西林(cAs：7240382)、氯唑西林(CAS：642784)、萘夫西林(CAS：7177506)、双氯西林(cAs：13
6、412641)，纯度99。49 10 mgmL九种青霉素类药物标准储备溶液：准确称取适量的每种标准物质(48)，分别用水配制成浓度为L 0 mgmL的标准储备溶液。储备液贮存在一18冰柜中。410九种青霉素类药物标准工作溶液：根据需要吸取适量的每种青霉素类药物标准储备溶液(49)，用水稀释成适当浓度的混合标准工作溶液。411滤膜：02 pm。5仪器51液相色谱一串联四极杆质谱仪：配有电喷雾离子源。52分析天平：感量01 mg，001 g。53 微量注射器：25 pL，100 pL。54刻度样品管：5 mL，精度为01 mL。55均质器。56高速冷冻离心机：带有50 mL具塞离心管，转速达到10
7、 000 rmin以上。6试样制备与保存61试样的制备从全部样品中取出有代表性样品约1 kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封后作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。62试样的保存将试样于一18保存。7测定步骤71试样溶液的制备称取5 g试样(精确到001 g)置于50 mL离心管中，加入20 mL乙腈提取液(47)，使用均质器(5。5)均质1 rain，提取液使用高速冷冻离心机(56)在10，10 000 rrain离心10 rain，把上层提取液移至另一离心管中。用15 mL乙腈提取液重复提取一次，合并两次的提取液，并加
8、入10 mL乙腈饱和的正己烷(4，5)，振荡1 rain，弃掉正己烷。把提取液移至i00 mL鸡心瓶中，在40旋转蒸发除去乙腈。加入2 mL水溶解残渣，混匀，样液过02”m滤膜(411)，供液相色谱一串联质谱仪测定。72 空白样品添加标准混合工作溶液的制备分别准确移取适量九种青霉素类药物标准混合工作溶液(410)，添加到50 g样品中，按照71步骤操作，配制萘夫西林、青霉素G、哌拉西林、青霉素V、苯唑西林浓度为10 pgkg、20 pgkg、40 pgkg、lO pgkg；阿莫西林、氨苄西林、氯唑西林、双氯西林浓度为20 pgkg、40gkg、80 pgkg、20 pgkg四个样品添加标准混合
9、工作溶液，供液相色谱一串联质谱仪测定。73测定条件731液相色谱参考条件a) 色谱柱：ZORBAX SB-C1835 pm，150 mm21 ram(内径)或相当者；b) 流动相组成、流速及梯度程序见表1；c)柱温：30；d)进样量：20 pL。2表1流动相梯度程序及流速GBT 22952-2008时间rain 流速(yLmin) 水(含01乙酸) 乙腈000 200 950 50300 200 950 50301 200 500 5001300 200 500 500130l 200 250 7501800 200 250 7501801 200 950 502500 200 95O 507
10、32质谱参考条件a)离子源：电喷雾离子源；b)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式；多反应监测；d)电喷雾电压：5 500 V；e)雾化气压力：0055 MPa；f)气帘气压力：0079 MPa；g)辅助气流速：6 Lrain；h)离子源温度：400；i)定性离子对、定量离子对和去簇电压(DP)、碰撞气能量(cE)见表2。表2九种青霉素类药物的定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气能量定性离子对 定量离子对化合物中文名称 化合物英文名称 碰撞气能量v 去簇电压v0-=) (mz)366114 30阿莫西林amoxicillin 366208 21366208 19350192 23氨苄西林am
11、picillin 350160 20350160 20518160 35 27哌拉西林piperacillin 518143618143 35 25335160 20青霉素G penicillin G 335160 23335176 20351160 ZO青霉素vpenicillin V 351160 40351192 15402160 20苯唑西林oxacillin 402160 23402243 20436160 21氯唑西林cloxacillin 436160 20436277 22415199 23萘夫西林nafcillin 416199 23416171 52470160 20双氯西
12、林 dicloxacillin 470160 20470311 223GBT 22952-200874液相色谱一串联质谱测定741定性测定选择每种待测物质的1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在2，5之内；样品谱图中各定性离子相对丰度与浓度接近的基质标准溶液的谱图中离子相对丰度相比，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以表示相对离子丰度K K50 Z0K50 10K20 K10允许的最大偏差 士20 土25 士30 士50742定量测定用72制备的空白样品
13、添加标准混合工作溶液分别进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中九种青霉素类药物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，九种青霉素类药物标准物质的多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图A1。本方法的添加回收率数据参见附录B中的表B1。75平行试验按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。76空白试验除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。8结果计算试样中青霉素类药物残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算。xc筹揣式中：x试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(vgkg)；c从标准工作曲线得到的试样溶液中被测
14、组分的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)y试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；m最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792规定确定的，其重复性和再现性的值是以95的可信度来计算。92重复性在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，试样中九种青霉素类药物添加浓度范围及重复性方程见表4。GBT 22952-2008表4 九种青霉素类药物添加浓度范围及重复性和再现性方程单位为微克每千克化合物名称 添加浓度范围 重复性限r 再现性限R萘夫西林 1olo lg r=0
15、831 5 lgm一1054 1 lgR=0971 2 lgm一0684 3青霉素G 1010 lg r：0837 3Igm一1065 7 lgR=0。976 3 lgm一0690 7哌拉西林 1010 lg r=O828 2lgm 1058 0 lgR=0973 8lgm一0688 7苯唑西林 1010 lg r-0820 2lgm 1064 0 lgR=0977 2lgm一0691 5青霉素V 1010 lg0 848 1 lg，n一1038 8 lgR一0969 7 19m一0669 7阿奠西林 2020 lg r一0830 3 lg m一1007 2 lgR一0977 8 lgm一06
16、84 6氨苄西林 2020 Ig r-0830 5 lgm 1005 5 lgR一0932 2 lgm0657 7氯唑西林 2020 Ig r一0 819 4lgm一1001 7 IgR-O974 3Igm一0680 0双氯西林 2020 lg r-0838 4lgm 10151 lgRO973 1 lgm0678 9注：m为两次测定结果的算术平均值。如果两次测定值的差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9，3再现性在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，试样中九种青霉素类药物添加浓度范围及再现性方程见表4。GBT 22952-20086
17、附录A(资料性附录)标准物质的多反应监测(MRM)色谱图九种青霉素类药物标准物质的多反应监测(MRM)色谱图见图A1。I ?i_卜一 ：!卜一 ? i?图A1 九种青霉素类药物标准物质的多反应监测(MRM)色谱图*导趔翅蛋鲁掣诅署乎掣趟菩s导掣氆督u掣越罂旨掣目督掣趔督争罩邋蛋导培遥蛋附录B(资料性附录)回收率九种青霉素类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B1。GBT 22952-2008表B1 九种青霉素类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称 添加浓度(pgkg) 平均回收率1_O 89Z20 896萘夫西林40 908100 94810 90220 970青霉索G4o 897100 96410 8762o 915哌拉西林40 940100 8991，0 92320 918苯唑西林40 92110 o 9351o 86220 1026青霉素v4o 869100 92420 82340 841阿莫西林80 887200 8532o 8614o 882氨苄西林8o 833200 87220 8714o 896氯唑西林80 956200 95720 8624o 923双氯西林8o 901200 912
