1、DB43/T 8912014湖南省地方标准DB43湖南省质量技术监督局 发 布ICS 65.12046B饲料中喹乙醇、氰乙基-（2-亚甲基肼喹噁啉基）-N,N-二氧化物（喹赛多）、卡巴氧的测定液相色谱-串联质谱法Determination of olaquindox、cyanoethyl - (2- methylene hydrazine quinoxalinyl) -N, N- dioxide（cyadox）、carbadox in feedsLiquid chromatography-tandem mass spectrometric method2014-08-10 实施2014-06-
2、10 发布DB43/T 8912014 I 目 次 前言 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 方法原理 1 4 试剂与材料 1 5 仪器与设备 2 6 采样与试样制备 2 7 分析测定 2 8 准确度与精密度 4 附录A（资料性附录） 喹乙醇（OLA）、喹赛多（CYX）、卡巴氧（CBX）多反应监测色谱图 5 DB43/T 8912014 II 前 言 本标准按GB/T 1.1-2009的规则编制。 本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。 本标准起草单位：长沙市畜禽水产品质量检测中心。 本标准主要起草人：卢艳芬、王辉、徐丽君、杨辉、丑亚琴、漆亮、郑姣妹、周展波、尹雯婕。 DB43/T 891
3、2014 1 饲料中喹乙醇、氰乙基-（2-亚甲基肼喹噁啉基）-N,N-二氧化物 （喹赛多）、卡巴氧的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了饲料中喹乙醇（Olaquindox)、氰乙基-（2-亚甲基肼喹噁啉基）-N,N-二氧化物（喹赛多,Cyadox）、卡巴氧（Carbadox)的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中喹乙醇、喹赛多、卡巴氧的测定，其定量限分别为50 g/kg、 100 g/kg、25 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件
4、，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 方法原理 试样中的喹乙醇、喹赛多、卡巴氧经提取液提取，C18固相萃取小柱净化，用带有电喷雾离子源的液相色谱串联质谱仪测定，外标法定量。 4 试剂与材料 本方法所用试剂除另有说明外，均为分析纯；实验用水应符合GB/T 6682规定的一级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 0.1 mol/L磷酸二氢钾溶液：称取6.80 g无水磷酸二氢钾，加水溶解，定容至500 mL。 4.4 提取液：乙腈+
5、甲醇+水=35+35+30（V+V+V）。 4.5 0.1%甲酸溶液：取甲酸1.0 mL，加水稀释至1000 mL。 4.6 溶解液：0.1%甲酸溶液+甲醇=90+10 （V+V)。 4.7 对照品: 喹乙醇、喹赛多、卡巴氧纯度均应大于98.0%。 4.8 标准储备液（200 g/mL）:分别准确称取适量的对照品，用甲醇分别配制成浓度为200 g/mL的标准储备液，4避光保存。保存期不应超过1个月。 4.9 混合标准中间溶液：分别准确吸取0.50 mL喹乙醇、1.00 mL喹赛多、0.25 mL卡巴氧标准储备液，于10 mL棕色容量瓶中，甲醇定容，4避光保存。 4.10 混合标准工作溶液：准确
6、吸取适量的混合标准中间溶液，用溶解液稀释成系列混合标准工作溶液，喹乙醇、喹赛多、卡巴氧的浓度分别为（2.0 ng/mL、4.0 ng/mL、1.0 ng/mL）、（ 5.0 ng/mL、10 ng/mL、 DB43/T 8912014 2 2.5 ng/mL）、（ 10 ng/mL、20 ng/mL、 5.0 ng/mL）、（ 50 ng/mL、100 ng/mL、25 ng/mL）、（ 100 ng/mL、200 ng/mL、50 ng/mL）。使用前配制。 4.11 有机过滤膜：0.22 m。 5 仪器与设备 5.1 分析天平：感量0.01 g和0.01 mg。 5.2 离心管：50 mL
7、。 5.3 水浴超声波清洗器。 5.4 高速离心机：转速8000 r/min。 5.5 氮吹仪。 5.6 涡旋混合器。 5.7 电热恒温水平振荡水槽。 5.8 固相萃取装置。 5.9 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.10 固相萃取小柱：C18，60 mg/3 mL,使用前活化。 6 采样与试样制备 6.1 采样按GB/T 14699.1 的规定执行。 6.2 试样制备按GB/T 20195 的规定执行。 7 分析测定 7.1 提取 称取试样（配合饲料2 g、浓缩饲料2 g、添加剂预混合饲料0.5 g），精确到0.01 g，置于50 mL离心管中。加入提取液10.0 mL，涡旋30
8、 s，超声提取20 min，8000 r/min离心10 min，移取上清液1.00 mL于玻璃试管中，40 氮气吹至近干，3 mL 0.1 mol/L磷酸二氢钾溶液溶解，备用。 7.2 净化 依次用3 mL甲醇，3 mL水活化固相萃取小柱，备用液上柱。2 mL 0.1 mol/L磷酸二氢钾溶液淋洗，抽干，3 mL甲醇洗脱，收集洗脱液，40 氮气吹干。用1.00mL溶解液溶解，涡旋后过有机过滤膜，待测。 7.3 液相色谱-串联质谱测定 7.3.1 液相色谱条件 色谱柱：C18 （502.1 mm,粒径1.7 m)，或等效柱。 流动相: A相：甲醇；B相：0.1甲酸水溶液（V/V）。流动相梯度洗
9、脱程序参见表1。 流速：0.2 mL/min。 柱温：35 。 进样量：4 L。 DB43/T 8912014 3 表1 流动相梯度洗脱程序 时间（min） A (%) B (%) 0 10 90 1.5 10 90 1.6 30 70 5.5 30 70 5.6 10 90 6.0 10 90 7.3.2 质谱条件 离子源：电喷雾离子源。 扫描方式：正离子扫描。 监测方式：多反应监测（MRM）。 电离电压：3.0 kV。 离子源温度：120 。 雾化温度：350 。 喹乙醇、喹赛多、卡巴氧保留时间、定性定量离子对参见表2。 表2 喹乙醇、喹赛多、卡巴氧保留时间、定性定量离子对 化合物 保留时
10、间 （min） 定性离子对 (m/z) 定量离子对 (m/z) 喹乙醇 1.93 264.2177.1 264.2212.1 264.2212.1 喹赛多 3.00 272.2188.1 272.2143.3 272.2188.1 卡巴氧 3.56 263.2231.1 263.290.1 263.2231.1 7.3.3 测定 取适量标准工作溶液及试样溶液注入液相色谱-串联质谱联用仪，各化合物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。 7.3.3.1 定性 试样中待测化合物色谱峰的保留时间与相应浓度对照品溶液色谱峰的保留时间偏差2.5%。在相同实验条件下，试样中待测化合物定性离子对的相对丰度与浓度
11、接近的对照品溶液中对应定性离子对的相对丰度比较，相对离子丰度的最大允许偏差参见表3。 DB43/T 8912014 4 表3 相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度（K） K50% 20%K50% 10%K20% K10% 允许的相对偏差 20% 25% 30% 50% 7.3.3.2 定量 以各化合物色谱峰峰面积积分值，按外标法进行单点或多点校准。喹乙醇（OLA）、喹赛多（CYX）卡巴氧（CBX）反应监测色谱图参见附录A；喹乙醇（OLA）、喹赛多（CYX）、卡巴氧（CBX）对照品多反应监测色谱图参见附录A图A.1；空白添加剂预混合饲料添加喹乙醇（OLA）50 g/kg、喹赛多（CYX）10
12、0 g/kg、卡巴氧（CBX ）25 g/kg多反应监测色谱图参见附录A图A.2；空白配合饲料添加喹乙醇（OLA）50 g/kg、喹赛多（CYX）100 g/kg、卡巴氧（CBX）25 g/kg多反应监测色谱图参见附录A图A.3; 空白浓缩饲料添加喹乙醇（OLA）50 g/kg、喹赛多（CYX）100 g/kg、卡巴氧（CBX）25 g/kg多反应监测色谱图参见附录A图A.4。 7.3.4 空白试验 取空白试样，采用完全相同的分析测定步骤进行测定。 7.4 结果计算 试样中待测化合物的含量按下式计算： m= 231sSAVAVVCX X试样中待测化合物的含量，单位为微克每千克（g/kg）； A
13、试样中待测化合物的峰面积； As标准工作溶液中待测化合物的峰面积； Cs标准工作溶液中待测化合物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； V1提取试样所用提取液的总体积，单位为毫升（mL）； V2提取时分取溶液的体积，单位为毫升（mL）； V3过柱后定容体积，单位为毫升（mL）； m 试样的质量，单位为克（g）。 结果扣除空白值后，用算术平均值表示，保留3位有效数字。 8 准确度与精密度 8.1 准确度 添加浓度为喹乙醇（50 500） g/kg、喹赛多（1001000 ）g/kg、卡巴氧（25 250 ）g/kg时，其回收率为（70120）%。 8.2 精密度 批内相对标准偏差15%，批间相
14、对标准偏差20%。 DB43/T 8912014 5 附录A （资料性附录） 喹乙醇（OLA）、喹赛多（CYX）、卡巴氧（CBX）多反应监测色谱图 图A.1 喹乙醇（OLA）、喹赛多（CYX）、卡巴氧（CBX）对照品多反应监测色谱图 DB43/T 8912014 6 图A.2 空白添加剂预混合饲料添加喹乙醇（OLA）50 g/kg、喹赛多（CYX）100 g/kg、 卡巴氧（CBX）25 g/kg多反应监测色谱图 DB43/T 8912014 7 图A.3 空白配合饲料添加喹乙醇（OLA）50 g/kg、喹赛多（CYX）100 g/kg、 卡巴氧（CBX）25 g/kg多反应监测色谱图 DB43/T 8912014 8 图A.4 空白浓缩饲料添加喹乙醇（OLA）50 g/kg、喹赛多（CYX）100 g/kg、 卡巴氧（CBX）25 g/kg多反应监测色谱图
