1、B23承德市地方标准D.B1308/T007-1agQ马铃芬茎尖脱毒技术规程1999-07-1C发布199-07-15实施承德市技术监督局发布细笼3扭耘翻时布飞翩冷前言本标准由围场满族蒙古族自治县技术监督局提出。本标准由围场满族蒙古族自治县农业局负责起草。本标准附录A为本标准附录。本标准主要起草人：丁明亚、谭宗久隋友、陈福祥本标准自1999年7月，15日实施。承德市地方标准马铃规程戊专支3WT007.19901 + r本标准规定了马铃薯茎尖脱毒种薯生产中茎尖剥离、脱毒苗挤养、繁殖等技术要求。本标准适用于马铃警栽培种及其各种野生资祥的脱毒。2培钾筑刹作21母液配制*MS M方，将大爹元素加大1。
2、倍徽耸元索、有机成份、生长调节Ai铁盆加大20倍，用容梦瓶精确配例定容，分*1编号为俘液1 1.母液2,母液V毋液4,母液5放入冰箱。4保存备用。22培养荃液配制根据涪养基配方分别取母液按营加入定容，每升加入20g蔗糖 ,搅拌均匀，PH值调为68，每升培养垂旅中加入79琼脂，加热。2玲养荃分装将制备好的培养基液趁热分装在洗刷干净、高温(200-220t )灭菌后的三角瓶中每瓶20m 1.试管口以消毒棉塞或封口膜封紧。2.41压灭菌将分装好挤养羞的三角瓶装于灭菌锅中。以i丨kg/ cm2的从力进行高压灭苗20分钾，降压后取出平放于无菌室。形成固体培养参备用：承德市权术监督局飞的9-07-10批准
3、1997-07-15实施AD BI公仅3/T04?铂19993徽尖组织倒离3飞茎尖组织剥离取材，在田间选带有该品种典型特征植株结的块茎经热处理进行钝化催芽。芽长到长3-scm时剪下做组织i1!离材料。3.2无菌室灭菌：无菌室应用前应用70 %酒精镶试地板及44净工作台。齐用5-7/的来苏水对天花板墙壁喷雾。紫外线灯照射24小时（初次用照射48小时。33剥离材料消毒将芽剥去外面几层叶片放于烧杯中，用沙布封口放于自来水下冲洗30分钟。然后在无菌室内，用95%酒精漫泡一下，放入5%漂白粉或次叙映钠溶液中浸泡石分钟，再用无菌水冲洗3-5次。34茎尖组织剥离在无菌室中，超净工作台土，将消毒好的材料在40
4、倍双筒解剖镜下进行剥离，剥去幼叶。切取带卜2个叶原垂的茎尖组织，0.2。二左右移置到放有培养垂的三角瓶或试管中的培养垂上。每瓶只放一个茎尖组织。36培养将放有茎尖组织的器皿放千日温2。2苏。夜温不低于，几光照2000-3000勒克斯条件下的组培室宁培界。茎尖组织变绿（成活）后转移培养成组涪苗。苗长A 0个叶片左右切段扩繁株系。4切阴门翩明猫陈系待检4. 1无曹室灭菌：同32皿1308/功07-199942组堆苗株系扩繁将组培苗编号。按号进行株系扩繁。扩繁在无菌室超净工作台上进行每株苗切成4，5段，每象一水茎节带一片叶一木腋芽，里三角瓶培葬葵上培养。经2O6娜暇Ull石1按株杀取样，取；-2个整
5、株进行病毒检A I采用DAS-ID,ISA法检a ,#Pvx.户r i对滚V。采用往返电泳技术检侧只打v，石2皿复检侧2-3次。去，3根据检侧结果，样品中仍带有PVXI%pvy1W l%月滚v和珍脚* .0的为不合格效将其对应编号的组培苗淘汰，或作变通处再处理见附录A）。而脚x、 1L r y1巧康V和到叭少vj都足零的为脱毒合格。其对应编弓的组培苗Y称为脱毒核心苗，特琳续扩繁。a脚呻脚0苗切段扩萦：6.1无菌室灭菌：同3。2。62切段扩繁。同4.204不用编号），63培养：同35，但因数盆增大要加强管理。切段后首先将瓶放在响徽射光挥，并响日光灯朴充光Ell的培养架上培养3天左右见根、叶服处旅芽萌生，再移到阳光照射的培养架上。为便见光均匀，要经常上下移动或转动方向。培养20,*左右长6个左右叶片进行再次切段扩繁。64扩繁到预计数釜。做为葵础苗供原原种生产和微型种薯生产使用：附录A变Al、如果剥离苗经病毒检测仍带有病毒，又没有更好的原剥离的材料时，可采取变温处理再脱毒。A2、把脱毒未合格的剥离苗，继续培养，苗长到4-5cm时进行变温处理。A3、把装有剥离苗的试管放在培养箱中，温度调到35C培养4小时后，再把温度调到31C培养4小时，这样循环变温处理，经4周时间，取顶尖茎段再次剥离。A4、剥离和检测方法与正文相同。
