1、 1 印行年月 94 年 10 月 本標準非經本局同意不得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 類號 ICS 59.08.01 L103114946經濟部標準檢驗局印行 公布日期 修訂公布日期 94 年 9 月 12 日 年月日 (共 6 頁 )醫用抗菌紡織品性能評估 Assessment of antibacterial textiles for medical use 1. 適用範圍：本標準規定醫用紡織相關製品抗菌性能評估及試驗方法。 備考 1. 申請者必須檢附抗菌劑之皮膚刺激性 (PII 值 (1) 2)或過敏性 (無過敏反應 )之動物實驗報告和產品中添加物之經口急 性毒性報告 小鼠 1
2、000 mg/kg無死亡和異 常現象之認證實驗室報告正本，或是原料廠商所提供之第三者檢驗報告副本及保證書。 註 (1)初期刺激指數 (primary irritation index)。 2. 本標準中內之單位與數值僅供參考。 2. 用語釋義 2.1 減菌率 (percent reduction of bacteria)：係指試驗細菌在紡織品上所減少細菌數目之百分比。 2.2 耐用性及其類型 類：耐水洗 100 次。 類：耐水洗 50 次。 類：無需水洗 (一次使用拋棄式 )。 3. 試驗準備 3.1 試驗時所使用之菌種：試驗時必須使用細菌種類如下，就其細菌進行實驗。 3.1.1 耐新青黴素金
3、黃色葡萄球菌 Methicillin resistant Staphylococcus aureus (BCRC 15211， ATCC 33591)(2)。 3.1.2 綠膿桿菌 Pseudomonas aeruginosa (BCRC 10944， ATCC 10145) 註 (2) BCRC (Bioresource Collection and Research Center)：財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心。 ATCC (American Type Culture Collection)：美國菌種中心。 3.2 試藥及器材 (1) 乙醇： 95%試藥 CNS 152
4、8乙醇 (95%)（試藥）。 (2) 洋菜 (agar)：微生物試驗用。 (3) 肉精 (beef extract)：微生物試驗用。 (4) 蛋白腖 (peptone)：微生物試驗用。 (5) 氯化鈉：試藥特級。 (6) 濕潤劑：磺基琥珀酸二辛酯鈉 (sodium dioctyl sulfosuccinate)或其他濕潤劑。 (7) 蒸餾水。 (8)中性緩衝溶液：磷酸鹽緩衝溶液 0.2 M。 2 CNS 14946, L 1031 (9) 純棉無加工織物：必須先行確認無減菌效果且細菌可在織物上正常生長。 (10) 洗劑：聚氧乙烯基烷基醚 (polyoxyethylene alkyl ether
5、)。 參考：JAFET 標準洗劑，日本 （社團法人） 纖維評價技術協議會( Japan textile evaluation technology council)。 (11) 培養皿：內徑約為 9 cm，深度 1.5 1.8 cm，底皿之內外應平坦，無氣泡刮傷或其他缺點。 (12) 高壓滅菌釜：可在溫度 121及壓力 103 kPa 1.05 kgf/cm2下連續 15 分鐘以上。 (13) 分光光度計：可在 660 nm 波長測量。 (14) 接種環：前端之環圈約 4 mm 白金耳或拋棄式接種環。 (15) 培養箱：可保持溫度 (372)。 (16) 可調式恒溫震盪槽：溫度精度 2，震盪數
6、 11010 rpm，振幅 2 3 cm。 (17) 三角錐瓶：耐高溫高壓 (溫度 121及壓力 103 kPa 1.05 kgf/cm2 )。 (18) 玻璃試管：耐高溫高壓 (溫度 121及壓力 103 kPa 1.05 kgf/cm2 )。 (19) 無菌箱：生物學用級之生物學安全操作台。 (20) 試管震盪器：轉速可調式，轉速 1800 2500 rpm。 (21) 烘箱：具可調式溫度精度 2，溫度控制範圍室溫至 100 或以上者。 (22) 計數器：可計數至 4 位數。 (23) 洗濯試驗機。 備考：參考 AATCC 61-2003。 3.3 培養基配製 (3) (1) 例 1：營養
7、瓊脂培養基 (nutrient agar， NA)配製法：蛋白腖 5 g、肉精 3 g、洋菜 15 g、加蒸餾水至 1000 mL。加熱使其溶解，以 0.1 N 氫氧化鈉 (NaOH)水溶液調整 pH 值至 6.80.2。放入高壓滅菌釜滅菌備用，滅菌後之培養基應該置於恆溫水槽待冷卻至 45 50 ，方可使用。若無法完全使用完，應置於 5 10環境中保存，最多放置 1 個月。 (2) 例 2：營養培養液培養基 (nutrient broth， NB)配製法：蛋白腖 5 g 、肉精 3 g、加蒸餾水至 1000 mL。加熱使其溶解，以 0.1 N 氫氧化鈉 (NaOH)水溶液調整pH 值至 6.8
8、0.2。放入高溫高壓滅菌釜滅菌備用。若無法完全使用完，應置於 5 10環境中保存，最多放置 1 個月。 註 (3)若菌種需 要可用胰化酪大豆 (trypticase soy)或腦心浸出液 (brain-heart infusion)培養基。 3.4 樣本製備：直徑 4.80.1 cm 圓形樣品備置多片備用。 3.5 操作前滅菌：測試樣本、三角錐瓶、試管、吸管 (4)、培養皿、培養基、蒸餾水以高壓滅菌釜滅菌備用。 註 (4) 應預先以水清洗乾淨，乾燥後加上栓塞。 3.6 試驗前菌種前培養與菌濃度測定。 (1) 菌種活化：採購菌株依其指示將菌種活化，活化後之菌種移植至 NA 或適當 3 CNS 1
9、4946, L 1031 之固體培養基， (372)培養 24 48 小時。再將其移植至 NB 或適當之液體培養基， (372)培養 24 小時。 (2) 以火焰滅菌或直接使用拋棄式接種環，採取經前 (1)節活化之菌種於 NA 或適當之固體培養基進行劃線培養，於 (372)培養箱培養 24 48 小時，於(5 10）環境中保存 (保存期限不得超過 1 週以上 )，在此之菌種後述稱為前培養 a。 (3) 取 20 mLNB 或適當之液體培養基，放入 100 mL 容量之三角錐瓶，以滅過菌之白金耳或拋棄式接種環刮取前培養 a 之菌種放入三角錐瓶中震盪培養 18 24 小時 溫度 (372)。震盪數
10、 11010 rpm，振幅為 2 3cm，在此之菌種後述稱為前培養 b。 (4) 利用分光光度計或計數器測定前培養 b 之細菌濃度，以無菌之 NB 或適當之液體培養基調整濃度到 (1 2)108CFU/mL(colony-forming unit)。 (5) 取 20 mLNB 或適當之液體培養基，放入 100 mL 容量之三角錐瓶，加入前培養 b 之 0.4 mL 菌液於溫度 (372)，震盪數 11010 rpm 培養 31 小時，此時菌濃度應為 107CFU/mL，在此之菌種後述稱為前培養 c。 3.7 平板稀釋 3.7.1 菌落計數：菌液以無菌吸管吸取 1 mL，放入裝有 9 mL 中
11、性緩衝溶液或生理食鹽水之無菌試管中，充分 混合攪拌，在自此試管以新的無菌吸管吸取1 mL，放入新的裝有 9 mL 中性緩衝溶液或生理食鹽水之無菌試管中，充分混合攪拌。重複進行此操作，作成 10 倍稀釋之稀釋列，並自稀釋列各試管中以 2 個新的無菌吸管各吸取 1 mL，放入 2 個無菌培養皿中，培養皿內加入適溫 (45 50)的 NA 培養基 14 20 mL 輕輕搖晃混合均勻，靜置待冷卻到室溫後移入培養箱 (372)。培養 24 48 小時後，計算採用培養皿上菌落數應為 30 300 個。 生菌數 (CFU/g 或 CFU/mL)2B)2BbBa(A)2AbAa( +A、 B：稀釋倍數。 Aa
12、、 Ab： A 稀釋倍數各培養皿內之生菌菌落數。 Ba、 Bb： B 稀釋倍數各培養皿內之生菌菌落數。 3.7.2 擴散菌落：擴散菌落可分為 3 種型式： (1) 鏈狀菌落，不能明顯分離，似乎由一堆細菌分裂生長而成。 (2) 細菌生長介於培養基及培養皿底部間之一層水氣中。 (3) 細菌生長於培養基邊緣或表面上之一層水氣上。 3.7.2.1 培養皿內產生擴散菌落時應以下述之方法計數。擴散菌落所覆蓋面積(包括被擴散菌落造成之抑制生長範圍 )超過整個培養基面積之 1/2 時或者被擴散菌落造成之抑製生長範圍超過 1/4 時，應不予計數，而記錄為“擴散菌落”。 3.7.2.2 擴散菌落形成鏈狀時，若僅一
13、條則應視為一個菌落，有 2條以上存在 4 CNS 14946, L 1031 時，應視其鏈源處之不同，分別計數之。若為彼此分開而形成大菌落時，亦應予以計數。 3.8 吸光度確認菌濃度：培養之菌液以 NB 適當之液體培養基稀釋建立檢量線，將各稀釋菌液再以平板稀釋之方法計算濃度。重複操作數次可得到較精確的檢量線，因設備間的差異，實驗室應自行建立檢量線。 4. 試驗法 4.1 抗菌性測試 4.1.1 植菌數：將 NB 或適當之液體培養基稀釋 20 倍後，以此稀釋之 NB 或適當之液體培養基調整前培養 c 之菌濃度為 (10.3)105 CFU/mL。以此作為試驗菌液，在冰冷處貯藏 4小時以內使用。
14、4.1.2 植菌：調整後的試驗菌液取 1 mL 置於 3 個測試樣上以及 3 個空白對照樣或純棉無加工處理的織物上。若 測試樣具撥水性，不易吸收菌液時，可於稀釋 20 倍後的試驗菌液加入適當比例的濕潤劑 (5)。 註 (5)添加濕潤劑來濕潤疏水性纖維製品，所使用之濕潤劑不可引起菌數減少 (使用前必須將預計使用濃度進行預測試確認是否影響菌數 )，測試實驗室必須於測試報告上標明濕潤劑名稱及濃度。 4.1.3 立即沖刷： 3 個對照樣立即分別以 100 mL 中性緩衝溶液或生理食鹽水沖刷，用試管震盪器將其充分混合，依第 3.7 節稀釋後，吸取 1 mL 之各稀釋後之菌液至 9 cm 平板培養皿中，加
15、入 14 20 mL NA 充分混和冷卻後置於（ 372）培養箱培養 18 24 小時後取出計算生存菌數 (A) (每組樣本取 3個檢體 )。 4.1.4 培養後：將植入菌液分別加入 空白對照樣本及測試樣本置於（ 372）培養箱培養 18 24 小時後取出，以 100mL 中性緩衝溶液沖刷，應用試管震盪器將其充分混合，依第 3.7 節稀釋後，吸取 1mL 之各稀釋後之菌液至 9 cm平板培養皿中，加入約 14 20mL NA 或適當之固體培養基，充分混和冷卻後置於（ 372）培養箱培養 18 24 小時後取出分別計算空白對照樣本生存菌數 (B)及測試樣本生存菌數 (C) (每組樣本取 3 個檢
16、體 )。 4.2 耐水洗性測試 4.2.1 水洗條件：依表 1 規定，且每一組樣本需分別置放洗滌鋼瓶內，不可將不同樣本放在同一鋼瓶內水洗以避免相互影響。 表 1 水洗條件 樣本大小 長寬 (cm) 溫度 ( ) 總液量 (mL) 洗劑 體積百分比 (%)鋼珠數 (顆 ) 水洗時間(分鐘 ) 155 842 150 0.15 100 45 參考： AATCC 61-2003，鋼瓶容量 1200mL。 5 CNS 14946, L 1031 4.2.2 將上述經水洗條件之樣本取出 ，持續沖洗乾淨後，再以手擰乾或用脫水機將多餘的水分去除，然後將樣本置於烘箱內烘乾，溫度不得高於 71。 4.2.3 依
17、第 4.2.1 節及第 4.2.2 節等步驟循環操作至所需之水洗次數。 4.3 結果：減菌率 (R)計算公式如下 (1) 減菌率 (R)% (A-C)/A100 A： 接種試驗菌液的純棉無加工處理織物對照樣品，無培養立即洗出回收之菌數。 C：接種試驗菌液的測試樣品，經 18 24 小時培養後洗出回收之菌數。 (2) 菌活性： logB logA 1.5 ，表示實驗成立。 A： 接種試驗菌液的純棉無加工處理織物對照樣品，無培養立即洗出回收之菌數。 B：接種試驗菌液的純棉無加工處理織物對照樣品，經 18 24 小時培養後洗出回收之菌數。 引用標準： CNS 1528 乙醇 (95%)（試藥） 參考
18、標準： CNS 13907 纖維製品抗菌性試驗法 JIS L19022002 Testing method for antibacterial of textile. 相關標準： AATCC 1001999 Antibacterial finishes on textile materials. AATCC 612003 Colorfastness to laundering, home and commercial accelerated. 6 CNS 14946, L 1031 附錄 （參考用） 參考表：醫用抗菌紡織品之分類 類型 耐水洗 減菌率 (%) A 減菌率 99.9 類 水洗 100次 B 99減菌率 99.9 A 減菌率 99.9 類 水洗 50次 B 99減菌率 99.9 A 減菌率 99.9 類 無需水洗 (一次使用拋棄型 ) B 99減菌率 99.9
