1、58901-2H mostaseologieBestimmung der Faktor VII-Gerinnungsaktivit t (FVII C)Teil 2: Referenzmeverfahren mit einem synthetischen PeptidsubstratDEUTSCHE NORM M rz 2000h DIN Deutsches Institut f r Normung e.V. Jede Art der Vervielf ltigung, auch auszugsweise,nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Instit
2、ut f r Normung e.V., Berlin, gestattet.Alleinverkauf der Normen durch Beuth Verlag GmbH, 10772 Berlinh No part of this standard may be reproduced without the prior permission of DIN Deutsches Institut f r Normung e.V., Berlin.Beuth Verlag GmbH, Berlin, has the exclusive right of sale for German Stan
3、dards (DIN-Normen).Ref. Nr. DIN 58901-2 : 2000-03Preisgr. 06 Vertr.-Nr. 0006Normenausschu Medizin (NAMed) im DIN Deutsches Institut f r Normung e.V.Ersatz f rAusgabe 1997-02SupersedesFebruary 1997 editionICS 11.100Haemostaseology Determination of factor VII coagulant activity (F VII C) Part 2: Refer
4、ence measurement procedure using a synthetic peptide substrateH mostasiologie Dosage de lactivit coagulante du facteur VII (F VII C) Partie 2: Mode op ratoire de mesure de r f rence laide dun substratpeptidique synth tiqueSeite 1DIN 58901-2 : 2000-03In case of doubt, the German-language version shou
5、ld beconsulted as the authoritative text.ForewordThis standard has been prepared by the TechnicalCommittee C 5 “H mostaseologie” of the Normenaus-schu Medizin (Medicine Standards Committee) of DINDeutsches Institut f r Normung e. V. in cooperation withthe Gesellschaft f r Thrombose- und H mostasefor
6、-schung e.V.DIN 58901 “Determination of factor VII coagulant activity(F VII C)” consists of: Part 1: Reference measurement procedure for the one-stage method Part 2: Reference measurement procedure for thedetermination using a synthetic peptide substrateAmendmentsThe following amendment has been mad
7、e to the Febru-ary 1997 edition: The standard has been editorially revised.Previous editionDIN 58901-2: 1997-021 ScopeThis standard is applicable to the determination of thefactor VII coagulant activity (F VII C) via the determina-tion of factor Xa with a chromogenic substrate in plasmaand factor co
8、ncentrates.The purpose of this standard is to achieve comparableresults for the factor VII C content in a given sample.Essential preconditions for achieving this objective area standardized procedure for calibration of the method, aswell as the use of reference plasmas or referenceconcentrates with
9、defined factor VII C which has beendetermined by calibration against the International Stand-ard of WHO for factor VII C which is valid at the time ofuse.VorwortDiese Norm wurde vom Arbeitsausschu C 5 H mo-staseologie des Normenausschusses Medizin (NAMed)im DIN Deutsches Institut f r Normung e.V. in
10、 Zusammen-arbeit mit der Gesellschaft f r Thrombose- und H mo-staseforschung e.V. erarbeitet.DIN 58901 Bestimmung der Faktor VII-Gerinnungsakti-vit t (F VII C)“ besteht aus: Teil 1: Referenzmeverfahren f r die Einstufenmethode Teil 2: Referenzmeverfahren mit einem synthetischenPeptidsubstratnderunge
11、nGegen ber der Ausgabe Februar 1997 wurde folgendenderung vorgenommen: Die Norm wurde redaktionell berarbeitet.Fr here AusgabenDIN 58901-2: 1997-021 AnwendungsbereichDiese Norm gilt f r die Bestimmung der Faktor VII-Ge-rinnungsaktivit t (F VII C) ber die Bestimmung vonFaktor Xa mit einem chromogenen
12、 Substrat in Plasmaund Faktorenkonzentraten.Zweck dieser Norm ist die Ermittlung vergleichbarerErgebnisse des Faktor VII-Gehalts in einer Probe. Dabeiist ein einheitliches Vorgehen bei der Kalibrierung derMethode sowie die Verwendung von Referenzplasmenbzw. -konzentraten mit definiertem Faktor VII C
13、, der durchKalibrierung am jeweils g ltigen Internationalen Standardder WHO f r Faktor VII C ermittelt wurde, unerl licheVoraussetzung.Fortsetzung Seite 2 bis 4 Continued on pages 2 to 4B55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CC9B7EF8DD9NormCD - Stand 2007-03 2 Normative VerweisungenDiese Norm enth lt du
14、rch datierte oder undatierte Ver-weisungen Festlegungen aus anderen Publikationen.Diese normativen Verweisungen sind an den jeweiligenStellen im Text zitiert, und die Publikationen sind nachste-hend aufgef hrt. Bei datierten Verweisungen geh rensp tere nderungen oder berarbeitungen dieser Publi-kati
15、onen nur zu dieser Norm, falls sie durch nderung oderberarbeitung eingearbeitet sind. Bei undatierten Verwei-sungen gilt die letzte Ausgabe der in Bezug genommenenPublikation.DIN 58905-1H mostaseologie Blutentnahme Teil 1: Gewin-nung von ven sem Citratplasma f r h mostaseolo-gische AnalysenDIN 58910
16、-1H mostaseologie Thromboplastinzeitbestimmung Teil 1: Referenzmeverfahren f r die Bestimmung inven sem CitratplasmaDIN 58911-2H mostaseologie Kalibrierung von Meverfahren Teil 2: Photometrische MeverfahrenDIN 58939-1H mostaseologie Referenzplasma Teil 1: Anfor-derungen, HerstellungDIN 58963-3K vett
17、en f r photometrische Messungen Einmal-Rechteckk vetten aus Kunststoffen Mae, Anforde-rungen3 BegriffeF r die Anwendung dieser Norm gelten die folgendenBegriffe:3.1 Faktor VII CFaktor VII-Gerinnungsaktivit t3.2 Faktor VII C-Bestimmung mitchromogenem PeptidsubstratDie Bestimmung mit einem chromogenen
18、 Faktor Xa-Pep-tidsubstrat durch Umwandlung von Faktor X in Faktor Xa,die enzymatisch durch den Komplex Faktor VIIa-TissueFactor-Phospholipid-Ca2+initiiert wird.ANMERKUNG: Die Menge an gebildetem Faktor Xa istproportional der in der Probe vorhandenen Faktor VII-Aktivit t.3.3 Chromogenes Peptidsubstr
19、atf r Faktor XaEin synthetisches Oligopeptid, das am C-terminalen Endeeine chromophore Gruppe tr gt, die durch Faktor Xaabgespalten wird.3.4 Faktor XaEin proteolytisches Enzym (EC 3.4.21.6)1), das durchProteolyse aus dem Proenzym Faktor X entsteht.3.5 ThromboplastineGewebethromboplastine nach DIN 58
20、910-1 und andereThromboplastine, die vergleichbare Ergebnisse liefern.3.6 Faktor VII C-Normalaktivit tFaktor VII C in einem frischen gepoolten Normalplasmanach DIN 58911-2.1)Bezeichnung nach IUPAC (International Union of Pureand Applied Chemistry)2 Normative referencesThis standard incorporates by d
21、ated or undated referenceprovisions from other publications. These normative refer-ences are cited at the appropriate places in the text and thepublications are listed hereafter. For dated references,subsequent amendments to or revisions of any of thesepublications apply to this standard only when i
22、ncorporatedin it by amendment or revision. For undated references thelatest edition of the publication referred to applies.DIN 58905-1Haemostaseology Blood collection Part 1: Pre-paration of plasma from citrated venous blood forcoagulation testingDIN 58910-1Haemostaseology Reference measurement proc
23、e-dure for the determination of thromboplastin (pro-thrombin) time Part 1: Determination in plasma fromcitrated venous bloodDIN 58911-2Haemostaseology Calibration of measurement pro-cedures Part 2: Photometric measurement proce-duresDIN 58939-1Haemostaseology Reference plasma Part 1:Requirements, pr
24、eparationDIN 58963-3Optical cells for photometric measurements Dis-posable rectangular spectrophotometric cells Dimensions, requirements3 Terms and definitionsFor the purposes of this standard, the following terms anddefinitions apply:3.1 Factor VII CFactor VII coagulant activity3.2 Determination of
25、 factor VII C usinga chromogenic peptide substrateThe determination using a chromogenic factor Xa peptidesubstrate based on the transformation of factor X tofactor Xa, initiated enzymatically by a factor VIIa/tissuefactor/phospholipid/Ca2+complex.NOTE: The amount of factor Xa being produced is pro-p
26、ortional to the factor VII activity of the sample.3.3 Chromogenic peptide substratefor factor XaA synthetic oligopeptide with a factor Xa-degradablechromophore group at the C-terminal.3.4 Factor XaA proteolytic enzyme (EC 3.4.21.6)1)which is producedfrom the proenzyme factor X by proteolysis.3.5 Thr
27、omboplastinsTissue thromboplastins as defined in DIN 58910-1 andother thromboplastins that lead to comparable results.3.6 Factor VII C normal activityFactor VII C in a fresh pooled normal plasma as specifiedin DIN 58911-2.1)Designation as specified by IUPAC (International Unionof Pure and Applied Ch
28、emistry)Seite 2DIN 58901-2 : 2000-03B55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CC9B7EF8DD9NormCD - Stand 2007-03 ANMERKUNG: Die Faktor VII C-Normalaktivit t betr gtdefinitionsgem 100 % oder 1 Internationale Einheit jeml Plasma 1.3.7 Faktor VII C-ReferenzplasmaGepooltes Normalplasma, z. B. nach DIN 58939-1,
29、das bei709C tiefgefroren bzw. lyophilisiert gelagert und dessenFaktor VII C durch Kalibrierung am jeweils g ltigen Inter-nationalen Standard der WHO f r Faktor VII C festgelegtwird.ANMERKUNG: Faktor VII C-Referenzplasma dient zurKalibrierung und kann zur Erstellung einer Bezugs-kurve verwendet werde
30、n.3.8 Faktor VII C-ReferenzkonzentratEin lyophilisiertes Faktor VII-Konzentrat, dessen Fak-tor VII C an dem jeweils g ltigen Internationalen Standardder WHO f r Faktor VII C kalibriert wird.ANMERKUNG: Faktor VII C-Referenzkonzentrat dientzur Kalibrierung und kann zur Erstellung einer Bezugs-kurve ve
31、rwendet werden.3.9 Faktor VII C-KalibrierplasmaEin frisches, tiefgefrorenes oder lyophilisiertes gepooltesPlasma von mindestens zehn gesunden Spendern, das aneinem Faktor VII C-Referenzplasma kalibriert ist.ANMERKUNG: Das Faktor VII C-Kalibrierplasma dientzur Erstellung der Bezugskurve nach DIN 5891
32、1-2.4 BezeichnungBezeichnung der Bestimmung von Faktor VII C mit einemchromogenen Peptidsubstrat:Bestimmung DIN 58901 F7 chromogen5 Entnahme und Aufbereitung des BlutesDie Entnahme und Aufbereitung des Blutes erfolgen nachDIN 58905-1.Die Plasmaprobe darf bis zu 4 h nach der Blutentnahmebei einer Tem
33、peratur im Bereich von 189C bis 229Caufbewahrt werden. Sofern die Bestimmung innerhalbdieser Zeitspanne nicht m glich ist, darf die Plasmaprobenach DIN 58905-1 eingefroren werden.6 Durchf hrung6.1 Vorbereitung der Proben und ReagenzienDie Probe wird nach den Angaben des Reagenzienher-stellers mit al
34、buminhaltigem Puffer mit einem pH-Wert vonetwa 7,4 vorverd nnt. Die vorverd nnten Proben d rfenvor der Bestimmung nicht l nger als 1 h bei Raum-temperatur 189C bis 259C aufbewahrt werden.Faktor VII-Konzentrate sind vor dieser Vorverd nnung miteinem Puffer, der mindestens 1% Humanalbumin enth lt,auf
35、etwa 1 I.E./ml einzustellen.Die Reagenzien zur Faktor VII C-Bestimmung enthaltenFaktor X und Thromboplastine. Faktor X und Thrombo-plastine d rfen keine Verunreinigungen enthalten, die dieAktivierung von Faktor VII beeinflussen.Die durch den Hersteller vorgegebenen Reaktionsbe-dingungen m ssen eine
36、vollst ndige Aktivierung vonFaktor VII C sicherstellen.Faktor VII wird durch Thromboplastin aktiviert und bildetmit Phospholipiden und Calciumionen einen Komplex, derFaktor X zu Faktor Xa spaltet. Die enzymatische Spaltungdes Faktors X mu ber die Inkubationsdauer linearverlaufen. Die gebildete Fakto
37、r Xa-Aktivit t wird mittelsNOTE: The factor VII C normal activity is defined as 100 %or 1 International Unit per ml of plasma 1.3.7 Factor VII C reference plasmaPooled normal plasma, e.g. as specified in DIN 58939-1,which is stored deep-frozen at 709C or lyophilized andthe factor VII C of which is c
38、alibrated against the Inter-national Standard of WHO for factor VII C which is valid atthe time of use.NOTE: Factor VII C reference plasma serves for calibra-tion and can be used for establishing a referencecurve.3.8 Factor VII C reference concentrateA lyophilized factor VII concentrate, the factor
39、VII Cofwhich is calibrated against the International Standard ofWHO for factor VII C which is valid at the time of use.NOTE: The factor VII C reference concentrate serves forcalibration and can be used for establishing a referencecurve.3.9 Factor VII C calibration plasmaA fresh, deep-frozen, or lyop
40、hilized pooled plasmaobtained from at least ten healthy donors which iscalibrated against a factor VII C reference plasma.NOTE: The factor VII C calibration plasma is usedfor establishing a reference curve as specified inDIN 58911-2.4 DesignationDesignation of the determination of factor VII C using
41、a chromogenic peptide substrate:Determination DIN 58901 F7 chromogenic5 Collection and processing of bloodThe collection and processing of the blood shall be carriedout as described in DIN 58905-1.The plasma sample may be stored up to 4 h after bloodcollection at a temperature in the range from 189C
42、to229C.Unless the determination can be performed within thisperiod of time, the plasma sample may be frozen asdescribed in DIN 58905-1.6 Procedure6.1 Preparation of samples and reagentsAccording to the instructions of the reagents manufacturer,the sample is prediluted with albumin-containing buffer(
43、pH R 7,4) and may be stored for no longer than 1 h priorto the determination at a room temperature of 189Cto259C.Factor VII concentrates are adjusted to about 1 IU/ml witha buffer containing at least 1% human albumin prior to thepredilution.The reagents used for the determination of factor VII Ccont
44、ain factor X and thromboplastin. The reagent contain-ing factor X and the thromboplastin shall not contain anycontamination which affects the activation of factor VII.The reaction conditions specified by the manufacturer shallensure a complete activation of factor VII C.Factor VII is activated by th
45、romboplastin; it forms a com-plex with phospholipids and calcium ions which cleavesfactor X to factor Xa. The enzymatic degradation of fac-tor X shall be linear over the period of incubation. Theresulting factor Xa activity is determined using a specificchromogenic substrate. The substrate shall hav
46、e a finalSeite 3DIN 58901-2 : 2000-03B55EB1B3E14C22109E918E8EA43EDB30F09CC9B7EF8DD9NormCD - Stand 2007-03 eines spezifischen chromogenen Substrates bestimmt.Das Substrat mu in einer Endkonzentration von minde-stens 1 KM2)vorliegen. Gleichzeitig mit der Substratzu-gabe sollte eine weitere Faktor Xa-B
47、ildung unterbundenwerden, z. B. durch EDTA-Zugabe. Die Extinktions-nderung mit der Zeit mu mindestens 90 s linear ver-laufen.ANMERKUNG: Die Reaktionsbedingungen d rfen modifi-ziert werden, sofern vergleichbare Ergebnisse erhaltenwerden.6.2 Photometrische MessungDie Messung wird bei der vom Herstelle
48、r des Substratesangegebenen Wellenl nge durchgef hrt. Es sind Einmal-Rechteckk vetten nach DIN 58963-3 zu verwenden.6.3 ReaktionsansatzDie Reaktion wird in zwei Schritten durchgef hrt. Im erstenSchritt wird die Probe mit den Aktivatorreagenzien Throm-boplastin, Faktor X und Calciumionen inkubiert. Im zweitenSchritt wird die gebildete
