1、1专题 17 生物技术实践考点概述本专题的主干知识主要集中在微生物的培养与利用、传统发酵技术的应用即果酒和果醋的制作、酶技术、DNA 的 粗提取及鉴定和 植物组织培养，植物成分的提取和血红蛋白的提取与分离。这几个内容都比较贴近生活生产实际，不但可以与必修部分的内容相联系，也为培养学生的生物科学素养起到了一定的作用，因此高考的力度逐年加大，高考的立意重在对生物技术过程的研究和理解，更高的要求是根据有关内容进行实验设计和分析。 从命题角度看主要是以微生物的应用为考察对象，进行实验设计或者其他考察，考察的内容多种多样，考查方式和方向是更加密切的联系人们的生活生产实际。微生物的利用在生物技术实践中占有
2、比较重要的地位，包括微生物的分离和培养技术、特定微生物的数量测定等。本专题易考查培养基、消毒灭菌等有关微生物培养的基础知识，培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术，并运用相关技术解决生产生活中有关微生物计数、微生物分离与培养等实际问题。选修只以简单题或填空题形式出现。酶的应用考点和必修内容联系紧密，主要考查果胶酶在果汁生产中的应用和加酶洗衣粉洗涤效果的探究等知识点，以简答或实验设计形式出现。传统发酵技术在食品加工中的应用与生活实践密切相关，考查上注重基础知识，主要考查实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并将这些实验涉及的方法和技能进行综合应用。考查形式上，这部分内
3、容出现在选做题中，以非选择题形式出现。 DNA 和血红蛋白的提取和分离与生活实践密切相关，考查上注重 DNA 和血红蛋白的提取和分离的基础知识，主要考查实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能。考查形式上，这部分内容出现在选做题中，以非选择题形式出现。此部分考题难度不大，试题往往从生产生活实际入手，进行综合考查。复习每个小专题时建议“抓大放小” ，也就是掌握大的方法和思路，力求从宏观上去整体把握。对于一些细节问题没有必要花费太大的精力，因为本专题主要是一些生物技术操作中的技术手段和方法，比如植物组织培养，主要要掌握组织培养的核心过程即脱分化和再分化，影响因素、条件。一要从实验角度剖析
4、每项技术，把握其原理、材料、操作流程、注意事项等；二要用比较的方法区分一些重要概念和方法；三要用联系的观点看待不同的技术，要联系必修教材中的相关实验，注意将不同实验相关联的知识进行整合；四是有条件的最好能动手做实验。考点精讲2【要点梳理】1培养基（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。（2）营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。（3）种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。2无菌技术（1）含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。（2）关键：防止外来杂菌的入侵。（3）不
5、同对象的无菌操作方法 3大肠杆菌的纯化培养（1）制备固体培养基：计算称量溶化灭菌倒平板。（2）纯化大肠杆菌平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。4菌种的保存方法对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。5土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（1）分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。 3（3）将点好样的滤纸
6、卷成圆筒状，卷纸时不能将滤纸两边相互接触，以避免由于毛细管现象导致溶剂沿滤纸两边的移动加快，溶剂前沿不齐，影响结果。（4）层析液没及样品原点，色素溶解于层析液中，造成实验失败。层析液不可没及样品原点，以免色素溶解于层析液中，使鉴定失败。（5）没有设置标准样品作对照。层析液中是否提取到胡萝卜素，可通过与标准样品中的胡萝卜素作对比予以确认。考点精练1 （四川省成都市石室中学 2019 届高三上学期入学考试生物试题）在玫瑰精油和橘皮精油提取过程中，正确的是（ ）A玫瑰精油和橘皮精油都可用蒸馏、压榨和萃取的方法提取B分离的玫瑰精油油层还含有一定水分可用无水 Na2SO4吸水C新 鲜的橘皮中含有大量的果
7、蜡、果胶等，为了提高出油率，需用 CaCO3 水溶液浸泡D玫瑰精油和橘皮精油都有很强的挥发性，易溶于有机溶剂，都不可能是萜类化合物【答案】B2 （北京市朝阳区 2017-2018 学年度高三第一学期期末练习生物试题）豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影响豆豉发酵效果的因素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的 A、B 两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件下进行发酵，并定期取样观测发酵效果。以下推测不合理的是（ ）A该实验的自变量是菌种，温度属于无关变量B大豆发酵过程中部分蛋白质转变为多肽，形成豆豉的独特风味C若容器内上层大豆发酵效果优于底层，则发酵菌为厌氧菌D煮熟大豆使蛋白质
8、变性，有利于菌体分泌酶作用于蛋白质【答案】C【解析】根据题干信息分析，该实验的自变量是菌种的种类（甲乙两种菌种） ，而温度属于无关变量，A 正确；大豆发酵过程中部分蛋白质转变为多肽，形成豆豉的独特风味，B4正确；若容器内上层大豆发酵效果优于底层，说明发酵菌为需氧型，C 错误；煮熟大豆使蛋白质变性，有利于菌体分泌酶作用于蛋白质，D 正确。3 （四川省广安第二中学校 2019 届高三上学期第一次月考生物试题）关于豆腐乳的制作，不正确的说法是（ ）A毛霉是参与腐乳制作的主要微生物B传统工艺生产豆腐乳一般在夏天进行C现代食品企业是在无菌条件下接种毛霉生产豆腐乳D盐的浓度过低，可能导致豆腐乳腐败变质【答
9、案】B【解析】参与豆腐发酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多种，其中起主要作用的是毛霉，A 正确；豆腐上生长毛霉的适宜温度为 1518，因此传统工艺生产豆腐乳应在春天或秋天，B 错误；现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种直接接种到豆腐上，这样可避免其他菌种的污染，保证产品的质量，C 正确；加盐和加酒都能抑制微生物的生长，避免豆腐腐败变质，D 正确。4 （四川省成都市第七中学 2019 届高中毕业班零诊模拟考试生物试题）无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中正确的是（ ）A紫外线照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果B高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，
10、开启锅盖C为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D在微生物接种的实验中，用 95%酒精对实验者的双手和超净工作台进行消毒【答案】A【解析】用紫外线照射 30min，可以杀死物体表面或空气中的微生物，在照射前，适量喷洒石碳酸等消毒液，可以加强消毒效果，A 正确；高压灭菌加热结束时，待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，B 错误；为 了防止污染，接种环经火焰灭菌、冷却后才可以快速挑取菌落，C 错误；在微生物接种的实验中，一般用 75%酒精对实验者的双手进行消毒，用紫外线照射 30min 对超净工作台进行灭菌，D 错误。 （5）含有抗生素的牛奶不能发酵成酸
11、奶，其理由是_。【答案】 （1）稀释涂布平板法（2）灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 （3）生成的乳酸与 CaCO3反应生成乳酸钙，周围形成透明圈 透明圈 5（4）pH 过低抑制了乳酸菌的生长 （5）抗生素能够杀死或抑制乳酸菌的生长 【解析】 （1）微生物常见的接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法法，鉴别培养基中，一般需要加入琼脂作为凝固剂制成固体培养基，然后观察所获单菌落的特征。（2）微生物培养的关键是无菌操作，将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具都需要进行灭菌。操作时，接种环通过灼烧灭菌。平板划线法分离水样中的乳酸菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。
12、这样做的目的是通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。（3）某同学在配制平板时加入 CaCO3，从而成功筛选出高效产生乳酸的菌株，其筛选依据的原理是乳酸会与 CaCO3反应形成透明圈，透明圈直径越大，产生乳酸能力越强。（4）发酵到后期时，酸奶含量继续增加，当达到 1.2%以上时，发酵速度逐渐变缓甚至停止，主要原因是 pH 过低，乳酸杆菌生存环境过于恶劣，乳酸杆菌与环境斗争处于劣势而导致其生命活动（发酵）受到抑制。（5）抗生素能够杀死或抑制乳酸菌的生长，因此含有抗生素的牛奶不能发酵成酸奶。12 （福建省厦门市厦门外国语学校 2019 届高三 1 月月考生物试题）苹果
13、醋是以苹果汁为原料经发酵而成的，回答下列问题：（1）酵母菌的呼吸代谢途径如左图所示。左图中过程和是苹果醋生产的第一阶段，在酵母菌细胞的_中进行，其产物乙醇与_试剂反应呈现为灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验；过程在酵母菌细胞的_中进行。（2）第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，根据醋酸杆菌的呼吸作用类型，该过程需要在_条件下才能完成，右图装置中通过_控制此条件。（3）在生产过程中，第一阶段和第二阶段的发酵温度不同，第一阶段的温度_（填“低于”或“高于” ）第二阶段。（4）左图中，能释放能量并生成 ATP 的过程是_（填序号） 。右图中的排气口长而弯曲，目的是_。【答
14、案】 （1）细胞质基质 重铬酸钾 线粒体 6（2）有氧 充气口充气（3）低于 （4） 防止空气中微生物的污染 【解析】 （1）酵母菌无氧呼吸的产物是酒精和二氧化碳，无氧呼吸在细胞质基质中进行，检测酒精用酸性重铬酸钾溶液，反应呈灰绿色，为有氧呼吸第二、三阶段，在线粒体中进 行。（2）果醋制作的第二阶段是乙醇转变为醋酸的过程，醋酸菌是严格的好氧菌，故需要在有氧条件下进行醋酸发酵。右图装置中通过向充气口充气来控制有氧条件。（3） 第一阶段是果酒发酵，其适宜温度是 1825，第二阶段是果醋发酵，其适宜温度是 3035，因此在生产过程中，第一阶段的温度低于第二阶段。 （4）有氧呼吸三个阶段均能产生 AT
15、P，而无氧呼吸只在第一阶段产生 ATP，左图中为有氧呼吸过程，为无氧呼吸过程，其中为无氧呼吸的第二阶段，不产生 ATP，故左图中，能释放能量并生成 ATP 的过程是。右图中的排气口长而弯曲，目的是防止空气中微生物的污染。13 （吉林省长春外国语学校 2019 届高三上学期期中考试生物试题）回答下列有关提取植物有效成分的问题：（1）薄荷油具有易挥发、难溶于水等性质，因此适合选用_法来提取。收集到的液体冷却后加入氯化钠的目的是_，然后加入无水硫酸钠除去残留的水分。（2）从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是_。对胡萝卜进行粉碎、干燥时，要特别注意干燥的_和时间，以防止胡萝卜焦糊。提取过程中宜采用_方式
16、加热，以保障安全。（3）为了提高胡萝卜汁的澄清度，需要加入果胶酶，该酶往往从某些微生物中提取。一般来讲，筛选微生物时常用的接种方法有_、_，该过程用到的培养基从功能上讲，属于_培养基。【答案】 （1）水蒸气蒸馏 促进油水分层（2）萃取法 温度 水浴（3）平板划线法 稀释涂布平板法 选择 714 （江苏省海安高级中学 2019 届高三上学期第二次月考生物试题）鲜牛奶容易被金黄色葡萄球菌污染，该菌高度耐盐，可引起人类肺炎等疾病。在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为检测鲜牛奶是否被金黄色葡萄球菌污染的操作流程，请据图回答：（1）鲜牛奶经乳酸杆菌发酵可制成
17、酸奶，在酸奶发酵过程中需控制的气体条件是_。（2）用 7.5% NaCl 肉汤培养基培养的主要目的是_。经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现_的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌。从功能上分类，血平板属于_培养基。（3）在 3 个血平板上各接种稀释倍数为 103的菌液样品 0.1mL，培养一段时间后平板上的菌落数分别为 38、46、54，则每升原菌液样品中细菌数为_。这一数值与实际值相比可能_。（4）分离纯化微生物时，除了图中接种方法，还常用平板划线法。若要在五个区域划线，共需灼烧接种环_次，最后一次灼烧灭菌的目的是_。【答案】 （1）无氧（隔绝空气） （2）筛选出金黄色葡萄球菌（增
18、加金黄色葡萄球菌的数量，同时抑制其它微生物生长） 周围存在透明圈（无色、红色消褪） 鉴别（3）4.610 8 小8（4）6 防止污染环境和感染操作者【解析】 （1）乳酸杆菌为厌氧菌，鲜牛奶经乳酸杆菌发酵可制成酸奶，在酸奶发酵过程中需控制的气体条件是无氧（隔绝空气） 。（2）用 7.5% NaCl 肉汤培养基培养的主要目的是筛选出金黄色葡萄球菌（增加金黄色葡萄球菌的数量，同时抑制其它微生物生长） 。经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现周围存在透明圈的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌。从功能上分类，血平板属于鉴别培养基。（3）在 3 个血平板上各接种稀释倍数为 103的菌液样品 0.1
19、mL，培养一段时间后平板上的菌落数分别为 38、46、54，则每升原菌液样品中细菌数为（38+46+54）310310310=4.6108个。（4）分离纯化微生物时，除了图中接种方法，还常用平板划线法。若要在五个区域划线，共需灼烧接种环 6 次，最后一次灼烧灭菌的目的是防止污染环境和感染操作者。15 （四川外国语大学附属外国语学校 2019 届高三 10 月月考理综生物试题）请回答关于果酒、果醋、腐乳和泡菜制作的问题。（1）葡萄酒是最受欢迎的果酒之一，葡萄酒发酵过程中，需将温度控制在_。发酵过程中，在_条件下，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物受抑制。若要让发酵装置由产葡萄酒转变成产葡萄醋，则需要改变的条件_。（2）腐乳的制作是利用毛霉产生的_将豆腐中的蛋白质和脂肪分解。加盐腌制的主要目的是析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬；同时还能_，避免豆腐块腐败变质。（3）泡菜是川渝地区家喻户晓的开胃小菜，泡菜发酵的原理是_；一般地说，泡菜腌制 14 天后，亚硝酸盐含量低，适合食用，实验室用_法检测其含量。【答案】 （1）18-25 无氧、酸性 加入醋酸菌，充入无菌空气，提高发酵温度（2）蛋白酶和脂肪酶 抑制微生物的生长繁殖（3）无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸 比色1
