1、1第一章 基因工程一、单选题1.在基因工程中，科学家所用的“剪刀”、“针线”和“载体”分别可以是指（ ） A. 大肠杆菌病毒、质粒、DNA 连接酶 B. DNA 连接酶、DNA 聚合酶、噬菌体C. 限制酶、DNA 聚合酶、质粒 D. 限制酶、DNA 连接酶、质粒2.下列物质或过程不影响磷酸二酯键数目变化的是（ ） A.RNA 聚合酶、逆转录酶、 Taq 酶B.DNA 聚合酶、DNA 连接酶、限制酶C.遗传信息的翻译、PCR 中 DNA 解链D.cDNA 文库的构建、染色体的结构变异3. 珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，采用具有四环素抗性基因的质粒作为运载体，能使大肠杆菌生产出人的 珠蛋白。
2、下列叙述正确的是 A. 可从人的成熟的红细胞中提取 DNA，直接分离目的基因B. 从造血干细胞提取 mRNA 反转录形成目的基因C. 用 CaCl2处理大肠杆菌，有利于重组质粒导入大肠杆菌D. 可根据受体细胞是否具有四环素抗性来检测目的基因是否表达4.下列有关基因工程的叙述，正确的是 A. DNA 连接酶只能将同一种限制性核酸内切酶切割形成的黏性末端连接起来B. 目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变C. 限制性内切酶识别序列越短，则该序列在 DNA 中出现的几率就越大D. 常使用的运载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等5.将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入到受体细胞后，发生了如图所示过程
3、。此过程中用到的原料和酶包括（ ）解旋酶 DNA 聚合酶 DNA 连接酶 限制酶 RNA 聚合酶四种核糖核苷酸 四种脱氧核苷酸 八种核苷酸 A.B.2C.D.6.下列应用不涉及基因工程技术的是（ ） A. 培育能产生乙肝疫苗的酵母菌 B. 培育能生产人类激素的绵羊C. 培育高产、优质的“太空椒” D. 培育分解石油的“超级细菌”7.科学家利用基因工程技术，将人胰岛素基因拼接到大肠杆菌的 DNA 分子中，通过大肠杆菌的繁殖，即可批量生产人胰岛素，这说明（ ） A. 胰岛素是蛋白质 B. 人和大肠杆菌有相同的遗传物质C. 人是由大肠杆菌进化而来 D. 人和大肠杆菌的翻译过程相同或相近8.基因工程产
4、物可能存在着一些安全性问题,但不必担心( ) A. 三倍体转基因鲤鱼与正常鲤鱼的杂交，进而导致自然种群被淘汰 B. 目的基因（如杀虫基因）本身编码的产物可能会对人体产生毒性C. 运载体的标记基因（如抗生素抗性基因）可能指导合成有利于抗性进化的产物 D. 目的基因通过花粉的散布转移到其他植物体内，从而可能打破生态平衡9.在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是( ) A. 用 mRNA 为模板逆转录合成 DNA B. 以 4 种脱氧核苷酸为原料人工合成C. 将供体 DNA 片段转入受体细胞中，再进一步筛选 D. 由蛋白质的氨基酸序列推测 mRNA10.如果用两种不同方法分别切断
5、同一碱基序列的脱氧核苷酸链，得到的两组片段是则比较两组片段的碱基序列，推断原脱氧核苷酸的全部碱基序列应该是 ( ) A. B. C. D. 11.下列关于基因工程技术的叙述，正确的是（ ） A.切割质粒的限制酶能特异性识别的序列均由 6 个核苷酸组成B.PCR 反应中两种引物的碱基间互补配对以保证与模板链的正常结合C.载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为标记基因D.目的基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制12.下列一般不作为基因工程中的标记基因的是（ ） A. 四环素抗性基因 B. 绿色荧光蛋白基因 C. 产物具有颜色反应的基因 D. 贮藏蛋白的基因13.下列关于质粒的叙述，正确
6、的是（ ） A. 质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器B. 质粒是细菌细胞质中能够自主复制的小型环状 DNA 分子C. 质粒只有在导入宿主细胞后才能在宿主细胞内复制D. 细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的二、填空题14.苏云金芽孢杆菌能产生具有杀虫能力的毒素蛋白如图是培育转毒素蛋白基因植物及转基因植物中两种生物大分子合成的部分过程示意图请据图回答问题：3（1）将图中处的 DNA 用 Hind、BamH l 完全酶切后，反应管中有_ 种 DNA 片段过程需要用到_ 酶（2）假设图中质粒原来 BamHl 的识别序列变为 BclI 的识别序列，现用 BclI 和 Hind切割质粒
7、，再经过程能否获得所需重组质粒_ ，理由是_ （3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒可被限制酶_ 切割（4）图中 链是_ 不同组织细胞的相同 DNA 进行过程时启用的起始点_（填“都相同”或“都不同”或“不完全相同”），原因是_ 15.如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线图中 tetR表示四环素抗性基因，amp R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、Sma I 直线所示为三种限制酶的酶切位点据图回答：（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用_ 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含_ 的培养基上进行能驱动人乳铁蛋白基
8、因在乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的_ 过程采用的操作方法通常是_ （2）过程代表的生物技术是_ 对早期胚胎进行切割，经过程可获得多个新个体目前最常见的是经分割产生的同卵_ 胎（3）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用_ 技术（4）对代孕牛的要求是_ 416.下面是将某细菌的基因 A 导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图请据图回答：（1）获得 A 有两条途径：一是以 A 的 mRNA 为模板，在_ 酶的催化下，合成互补的单链 DNA，然后在_ 作用下合成双链 DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的_ 序列，推测出相应的 mRNA 序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其 DNA
9、的_ 序列，再通过化学方法合成所需基因（2）利用 PCR 技术扩增 DNA 时，需要在反应体系中添加的有机物质有_ 、_ 、4 种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的 DNA 聚合酶，扩增过程可以在 PCR 扩增仪中完成（3）由 A 和载体 B 拼接形成的 C 通常称为_ （4）在基因工程中，常用 Ca2+处理 D，其目的是_ 三、解答题17.生长激素是一种由垂体分泌的蛋白质类激素，缺乏生长激素会导致侏儒症传统制药工业是从猪脑中提取这类激素，产量很低基因工程以细菌为受体细胞，将人生长激素基因导入其中，细菌增殖并表达产物示意图如图： （1）D 是_A 在基因工程中称为_获得 B 与 C 需要_酶，过程需要
10、_酶 （2）C 在基因工程中称为_ （3）过程通过细菌的分裂增殖获得大量的工程菌，产物的表达是通过_过程完成 四、综合题18.如图为基因工程中利用农杆菌转化法，培育出新性状植株的过程，请据图分析回答：5（1）将携带外源基因的 DNA 导入植物细胞中所用到的工具酶有_。 （2）农杆菌在自然状态下，能感染_植物和裸子植物，因为这些植物受到损伤时，伤口会分泌大量的_，吸引农杆菌移向这些细胞。利用农杆菌转化法时，作为基因工程中运载体的是_。 （3）目的基因导入植物细胞后，能够在受体细胞中维持稳定和表达的过程，称为_。检测目的基因是否转录出了 mRNA，常用的方法是_。 （4）导入目的基因的植物细胞一般
11、需要通过_的方法，才能培育成表现新性状的植株。利用基因工程进行育种，可以培育出具有新性状的植株，这种育种方式的优点是：_；_。 19.如图表示利用基因工程培育抗虫棉过程的示意图请据图回答下列有关问题： （1）科学家在进行图中（）操作时，要用_分别切割运载体和目的基因，运载体的黏性末端与目的基因 DNA 片段的黏性末端可通过碱基互补配对原则而结合，进而通过_而连接 （2）基因工程的理论基础之一是_法则，可用公式（图解）表示为_ （3）是导入目的基因的受体细胞，经培养、筛选获得一株有抗虫特性的转基因植株经分析，该植株细胞中染色体上含有一个携带目的基因的 DNA 片段，因此可以把它看作是杂合子理论上
12、，在该转基因自交产生 F1代中，仍具有抗虫特性的植株占总数的_将上述抗虫棉植株的后代种子种植下去后，后代往往有些植株不再具有抗虫特性，原因是发生_要想获得纯合子，常采用的方法是_ （4）下列是几种搭配的密码子，据此推断图中合成的多肽，其前三个搭配的种类（按前后顺序排列）_ 甲硫氨酸（AUG）、甘氨酸（GGA）、丝氨酸（UCU）、酪氨酸（UAC）、精氨酸（AGA）、丙氨酸（GCU） 6答案解析部分一、单选题1.【答案】D 【解析】【解答】解：（1）限制性核酸内切酶能特异性识别特定的核苷酸系列，并在特定的核苷酸序列处切割质粒和目的基因，称为基因的“剪刀”；（2）DNA 连接酶能够将两个 DNA 片
13、段连接起来，是“基因的针线”；（3）质粒是常用的运载体，是“分子运输车” 故选：D【分析】基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂（2）DNA 连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒2.【答案】C 【解析】【解答】DNA 和 RNA 分子中都含有磷酸二酯键，凡是涉及到 DNA 和 RNA 合成或分解的过程都会影响磷酸二酯键数目变化。DNA 聚合酶、Taq 酶、DNA 连接酶所催化形成的产物都是 DNA，RNA 聚合酶、逆转录酶所催化形成的
14、产物都是 RNA，因此它们都可以催化形成磷酸二酯键，而限制酶切割的是 DNA 分子中的磷酸二酯键，AB 不符合题意；遗传信息的翻译产物是蛋白质，PCR 中 DNA 解链是利用高温使连接两条 DNA链间的氢键断裂，C 符合题意；cDNA 文库的构建离不开逆转录酶、DNA 连接酶等的催化，染色体的结构变异过程涉及到 DNA 的断裂，可能会影响磷酸二酯键数目变化，D 不符合题意。故答案为：C【分析】与 DNA 相关的五种酶的比较：名称 作用部位 作用结果限制酶 磷酸二酯键 将 DNA 切成两个片段DNA 连接酶 磷酸二酯键 将两个 DNA 片段连接为一个 DNA 分子DNA 聚合酶 磷酸二酯键 将单
15、个脱氧核苷酸依次连接到单链末端DNA (水解)酶 磷酸二酯键 将 DNA 片段水解为单个脱氧核苷酸解旋酶 碱基对之间的氢键 将双链 DNA 分子局部解旋为单链，形成两条长链3.【答案】C 【解析】【分析】人体成熟的红细胞没有细胞核和各种细胞器，因此没有 DNA； 珠蛋白基因只在红细胞中表达形成 mRNA，所以造血干细胞中不含 珠蛋白的 mRNA；用 CaCl2处理大肠杆菌，可增大细胞壁的通透性，有利于重组质粒导入大肠杆菌；可根据受体细胞是否具有四环素抗性来检测目的基因是否导入受体细胞。故选 C4.【答案】C 【解析】【分析】DNA 连接酶能将具有相同黏性末端的 DNA 片段（不一定是由同一种限
16、制性核酸内切酶切割形成的）连接起来，故 A 错误；目的基因导入受体细胞后，与受体细胞 DNA 整合，发生基因重组，故B 错误；限制性内切酶识别序列越短，则该序列在 DNA 中出现的几率就越大，故 C 正确；常使用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等，大肠杆菌往往作为基因工程的受体细胞，故 D 错误。5.【答案】B 7【解析】【解答】通过 AU 配对可以识别出该过程为转录，转录是指以 DNA 分子的一条链为模板，按照碱基互补配对原则合成 RNA 分子的过程，该过程需要 RNA 聚合酶和四种核糖核苷酸，因此 B 符合题意。故答案为：B【分析】理清基因工程的工具：（1）限制酶：能够识别双链 DNA
17、分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂（2）DNA 连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒6.【答案】C 【解析】【解答】解：A、培育能产生乙肝疫苗的酵母菌需要采用基因工程技术产生“工程菌”，A 错误；B、培育能生产人类激素的绵羊需要采用基因工程技术将人类激素基因导入绵羊受精卵中，B 错误；C、培育高产、优质的“太空椒”采用了诱变育种法，并没有采用基因工程技术，C 正确；D、培育分解石油的“超级细菌”需要采用基因工程技术，D 错误故选：C【分析】植物基因工程的应用：（1）抗虫转基因植物；
18、（2）抗病转基因植物；（3）抗逆转基因植物；（4）转基因改良植物品质总之基因工程在农业上用于生产高产、稳产和具有优良品质的品种，能产生抗逆性品种动物基因工程的成果：（1）提高动物的生长速度：外源生长激素基因；（2）改善畜产品的品质；（3）转基因动物生产药物；（4）转基因动物作器官移植的供体；（5）基因工程药物，如人胰岛素、细胞因子、抗体、疫苗、生长激素、干扰素7.【答案】D 【解析】【分析】不同来源的 DNA 之所以能整合到一起，是由于它们在结构和组成上是一致的，人的胰岛素基因在大肠杆菌中表达，表明了遗传物质表达的统一性，即人和大肠杆菌的翻译过程相同或相近。故选 D【点评】本题意在考查考生的理
19、解能力，属于容易题。8.【答案】A 【解析】【解答】三倍体转基因鲤鱼不能通过减数分裂形成正常的配子，所以无法与正常鲤鱼的杂交，A符合题意；运载标记基因多为抗生素基因，可能指导合成有利于抗性进化的产物，B 不符合题意；目的基因如杀虫基因，本身编码的产物可能会对人体产生毒性，C 不符合题意；目的基因通过花粉的散布转移到其他植物体内，造成基因污染，D 不符合题意。故答案为：A【分析】奇数倍体高度不育，应用于生产可以避免其自然繁殖，因而不致造成环境威胁，且该育种方法不是基因工程育种；基因工程的安全性隐患包括毒性基因的表达产物可能对人畜有害，外源基因的导入可能导致生态危机。9.【答案】B 【解析】【解答
20、】解：获取目的基因的方法有：从基因文库中获取目的基因、利用 PCR 技术扩增目的基因、用化学方法直接人工合成。基因比较小，核苷酸序列已知的情况下常采用人工合成法。依据题干信息可知：获得该基因的最佳方法是用化学法直接人工合成，故 B 符合题意。故答案为：B8【分析】几种目的基因获取方法的比较：10.【答案】B 【解析】【分析】首先可根据图中 b 组片段中的第二段可判断，a 组片段中在的前面；接着可根据的 TAAG 可判断 b 组片段中第一段在第二段的前面，由此得出 a 组片段中在的前面；最后可根据中的 ACTTCCGTA 序列可推断 b 组片段中原脱氧核苷酸的全部碱基序列应该是第三段、第一段、第
21、二段，故a 组片段中原脱氧核苷酸的全部碱基序列应该是。11.【答案】C 【解析】【解答】切割质粒的限制酶能特异性识别的序列一般由 6 个核苷酸组成，A 不符合题意；PCR 反应中两种引物是一小段单链 DNA，它们之间没有什么关系，B 不符合题意；载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为标记基因，以检测目的基因是否导入受体细胞，C 符合题意；目的基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行转录，而复制需要的是复制原点，D 不符合题意。故答案为：C【分析】基因表达载体中启动子、终止子的来源如果目的基因是从自然界中已有的物种中分离出来的，目的基因中已含有启动子、终止子。在构建基9因表达载体时，不需要在
22、质粒上接上特定的启动子、终止子，如果目的基因是通过人工方法合成的，或通过 cDNA 文库获得的，则目的基因是不含启动子和终止子的。因此，在构建基因表达载体时，需要在与质粒结合之前，在目的基因的前后端接上特定的启动子、终止子。12.【答案】D 【解析】【解答】解：A、四环素基因是抗性基因，可作为基因工程的标记基因，筛选重组子，故 A 正确；B、绿色荧光蛋白基因也可以用作基因工程的标记基因，故 B 正确；C、产物具有颜色反应的基因可根据颜色反应与否筛选重组子，故 C 正确；D、贮藏蛋白的基因不能用于筛选重组子，故 D 错误故选：D【分析】基因工程的关键步骤是构建基因表达载体，基因表达载体主要由启动
23、子、目的基因、标记基因和终止子组成，其中标记基因用于筛选重组子，可以是四环素、氨苄青霉素等抗性基因，也可以是荧光蛋白基因或产物能显色的基因13.【答案】B 【解析】【解答】解：A、质粒是存在于细菌中一种环状 DNA 分子，不是细胞器，A 不符合题意；B、质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核 DNA 之外并具有自我复制能力的双链环状 DNA 分子，B 符合题意；C、在体外，若给予适宜的条件，复制也可能进行复制，C 不符合题意；D、有的质粒可以整合到宿主细胞的染色体 DNA 上，如大肠杆菌的 Ti 质粒的 TDNA，D 不符合题意故答案为：B【分析】1、常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动
24、植物病毒（质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核 DNA 之外并具有自我复制能力的双链环状 DNA 分子）2、作为运载体必须具备的条件：要具有限制酶的切割位点； 要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选能在宿主细胞中稳定存在并复制；是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来3、天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的二、填空题14.【答案】4 ；DNA 连接酶；能；切割后露出的粘性末端相同；HindIII；mRNA ；不完全相同；不同组织细胞中基因会进行选择性表达 【解析】【解答】解：（1）限制酶 Hind有 2 个切割位
25、点，处理 DNA 分子时可获得 3 种 DNA 片段、BamHl 有 1 个切割位点，再次处理 DNA，共获得 4 种 DNA 片段过程是基因表达载体的构建，需要用DNA 连接酶连接目的基因和质粒（2）如果质粒原来 BamHl 的识别序列变为 BclI 的识别序列，BclI 和 BamHl 识别的 DNA 序列是相同的，切割后露出相同的粘性末端，所以用 BclI 和 Hind切割质粒，再经过程能获得所需重组质粒（3）BclI 和 BamHl 识别的 DNA 序列是相同的，能切割后露出相同的粘性末端，重组质粒可被限制酶HindIII 切割（4）图中 链是以 DNA 的一条链为模板合成的 mRNA
26、不同组织细胞中基因会进行选择性表达，因此不同组织细胞的相同 DNA 进行过程时启用的起始点不完全相同10【分析】1、“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的（2）功能：能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性（3）结果：经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端2“分子缝合针”DNA 连接酶（1）根据酶的来源不同分为两类：EcoliDNA 连接酶、T 4DNA 连接酶这二者都能连接黏性末端，此外 T4DNA 连接酶还可以连接平末端，但连接平末端
27、时的效率比较低（2）DNA 连接酶连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键（3）DNA 连接酶和 DNA 聚合酶的区别：（需理解）DNA 连接酶是在两个 DNA 片段之间形成磷酸二酯键，而 DNA 聚合酶只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上，形成磷酸二酯键；DNA 连接酶是同时连接双链的切口，而 DNA 聚合酶只是在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来；DNA 连接酶不需要模板，而 DNA 聚合酶需要模板15.【答案】Hind和 BamH ；氨苄青霉素 ；启动子 ；显微注射；胚胎移植；双；抗原抗体杂交；有健康体质和正常繁殖能力 【解析】【解答】解：（1）外源 DNA 分子上含有限制酶 BamHI、
28、HindIII、SmaI 的切割位点，其中限制酶 SmaI 的切割位点位于目的基因上，所以获取目的 基因和构建基因表达载体时，应用限制酶 Hind和BamH用限制酶 Hind和 BamH切割质粒后，会破坏质粒上的四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行启动子是能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序 列过程是将重组质粒导入受体细胞，当受体细胞是动物细胞时，将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法（2）过程需要采用胚胎移植技术；目前最常见的是经胚胎分割产生的同卵双胎（3）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用抗原
29、抗体杂交技术（4）对代孕牛的要求是有健康体质和正常繁殖能力【分析】分析题图：图示是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，包括基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、早期胚胎培养、胚胎移植等步骤，其中过程是将重组质粒导入受体细胞；过程需采用胚胎移植技术16.【答案】逆转录酶 ；DNA 聚合酶 ；氨基酸；脱氧核苷酸；引物；模板（目的基因或 A 基因）；基因表达载体；使其成为感受态细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组 DNA 分子 【解析】【解答】（1）获得 A 有两条途径：一是以 A 的 mRNA 为模板，在逆转录酶的催化下，合成合成双链 DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的氨基酸
30、序 列，推测出相应的 mRNA 序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其 DNA 的脱氧核苷酸序列，再通过人工合成（化学）方法合成所需基因（2）利用 PCR 技术扩增 DNA 时所需的条件：引物、模板 DNA、原料（4 种脱氧核糖核苷酸）和耐热性的DNA 聚合酶等（3）由 A 和载体 B 拼接形成的 C 称为基因表达载体（4）将目的基因导入微生物细胞时，常用 Ca2+处理，使其成为感受态细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组DNA 分子，这样可以提高受体细胞的转化率11【分析】分析题图：图示是将某细菌的基因 A 导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图，其中 A 为目的基因，B 为运载体（质粒），C 为重
31、组质粒，D 为受体细胞三、解答题17.【答案】（1）重组质粒；运载体；相同的限制；DNA 连接（2）目的基因（3）转录和翻译 【解析】【解答】解：（1）根据题意和图示分析可知：A 是小型环状 DNA，为质粒；质粒和目的基因需要利用相同的限制酶切割，然后用 DNA 连接酶进行连接从而形成重组质粒，即图中 D 表示重组质粒质粒在基因工程中称为运载体（2）C 在基因工程中称为目的基因（3）过程通过细菌的分裂增殖获得大量的工程菌，产物的表达就是基因的表达，基因的表达包括转录和翻译两个步骤 【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用 PCR 技术扩增和人工合成（2
32、）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：检测转基因生物染色体的 DNA 是否插入目的基因DNA 分子杂交技术；检测目的基因是否转录出了 mRNA分子杂交技术；检测目的基因是否翻译成蛋白质抗原抗体杂交技术个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等四、综合题18.【答案
33、】（1）限制性核酸内切酶和 DNA 连接酶（2）双子叶；酚类化合物；Ti 质粒（3）转化；分子杂交技术（4）植物组织培养；能打破生物种属的界限；在分子水平上定向改变生物的遗传特性 【解析】【解答】解：（1）将携带外源基因的 DNA 导入植物细胞之前，首先要构建基因表达载体，该步骤需要限制酶和 DNA 连接酶。（2）农杆菌在自然状态下，能感染双子叶植物和裸子植物，因为这些植物受到损伤时，伤口会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞利用农杆菌转化法时，作为基因工程中运载体的是 Ti 质粒，Ti 质粒上的 T-DNA 可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的 DNA上。（3）目的基因导入植
34、物细胞后，能够在受体细胞中维持稳定和表达的过程，称为转化。检测目的基因是否转录出了 mRNA，常用分子杂交技术。（4）将转基因细胞培育成转基因植株需要采用植物组织培养技术；利用基因工程技术进行育种的优点：能打破生物种属的界限；在分子水平上定向改变生物的遗传特性。【分析】基因工程技术的基本步骤：目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用 PCR 技术扩增和人工合成。基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基
35、因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：检测转基因生物染色体的 DNA 是否插入目的基因-DNA 分子杂交技术；检测目的基因是否12转录出了 mRNA-分子杂交技术；检测目的基因是否翻译成蛋白质-抗原-抗体杂交技术个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。19.【答案】（1）同一种限制性内切酶；DNA 连接酶（2）中心；（3） ；性状分离；连续自交（4）甲硫氨酸、丙氨酸、丝氨酸 【解析】【解答】解：（1）表示基因表达载体的构建过程，该过程中首先需要用同一种限制酶切割含有目的基因的外源 DNA 分子和运
36、载体，其次需要 DNA 连接酶将目的基因和运载体连接形成重组 DNA 分子（2）基因工程的理论基础之一是中心法则，可表示为 （3）培育成功的该植株细胞中含有一个携带目的基因的 DNA 片段，因此可以把它看作是杂合子（Aa），根据基因分离定律，在该转基因自交产生 F1代中，仍具有抗虫特性的植株（A_）占总数的 上述抗虫棉植株的后代中有部分是杂合子，杂合子不能稳定遗传，其自交后代会出现性状分离现象，因此将上述抗虫棉植株的后代种子种植下去后，后代往往有部分植株不再具有抗虫特性要想获得纯合子，常采用连续自交的方法（4）氨基酸是由 mRNA 上相邻的三个碱基决定的，所以图中合成的多肽，其前三个氨基酸为甲硫氨酸（AUG）、丙氨酸（GCU）、丝氨酸（UCU） 【分析】分析题图：图示是利用基因工程培育抗虫棉的过程示意图，其中为基因表达载体的构建过程；是将目的基因导入受体细胞的过程；表示植物组织培养过程；表示多肽链；表示 tRNA，能识别密码子并转运相应的氨基酸
