1、1克隆技术1.某研究者用抗原(A)分别免疫 3只同种小鼠(X、Y 和 Z),每只小鼠免疫 5次,每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数),结果如图所示。若要制备杂交瘤细胞,需取免疫后小鼠的 B淋巴细胞(染色体数目 40条),并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目 60条)按一定比例加入试管中,再加入聚乙二醇诱导细胞融合,经筛选培养及抗体检测,得到不断分泌抗 A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题:(1)制备融合所需的 B淋巴细胞时,所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到 16 000以上,则小鼠最少需要经过 次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的 X、Y、
2、Z 这 3只免疫小鼠中,最适合用于制备 B淋巴细胞的是 小鼠,理由是 。 (2)细胞融合实验完成后,融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外,可能还有 ,体系中出现多种类型细胞的原因是 。 (3)杂交瘤细胞中有 个细胞核,染色体数目最多是 条。 (4)未融合的 B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活,原因是 。 答案 (1)4 Y Y 小鼠的血清抗体效价最高 (2)B 淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 细胞融合是随机的,且融合率达不到 100% (3)1 100 (4)不能无限增殖解析 (1)分析题图可知,经 4次免疫后,小鼠 Y的血清抗体效价就可达到 16 000以上
3、。由于 4次免疫后的 Y小鼠的血清抗体效价最高,故最适合用于制备 B淋巴细胞。(2)细胞融合实验中,由于细胞融合是随机的,而且诱导融合率不可能达到 100%,所以会有未融合的 B淋巴细胞和骨髓瘤细胞、融合的具有同种核的细胞和杂交瘤细胞三种类型。(3)杂交瘤细胞同时具有 B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的核物质,但细胞核只有一个。由于杂交瘤细胞在分裂过程2中染色体会丢失,故细胞核中染色体数目最多是 40+60=100(条)。(4)B 淋巴细胞已经分化,没有无限增殖的潜能。2.(2015安徽理综,31,9 分)科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊,以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子 IX医用蛋白
4、,其技术路线如图。(1)由过程获得的 A为 。 (2)在核移植之前,必须先去掉受体卵母细胞的核,目的是 。受体应选用 期卵母细胞。 (3)进行胚胎移植时,代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生 ,这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。 (4)采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆,理论上可获得无限个转基因绵羊,这是因为 。 答案 (1)含目的基因的(基因)表达载体(重组 DNA分子)(2)保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞 M中(3)免疫排斥反应 (4)整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养解析 (1)在基因工程中,构建基因表达载体后才能将目的基因导入受体细胞。(2)核移植技术
5、选用的成熟卵母细胞处于减数第二次分裂中期(M中期),需去掉细胞核以保证得到的克隆动物的核遗传物质来自于含目的基因的成纤维细胞。(3)胚胎移植时受体动物对移入的胚胎基本不发生免疫排斥反应,这为胚胎的存活提供了可能。(4)由于整合有目的基因的胎儿成纤维细胞具有增殖能力,可进行传代培养,所以理论上可利用动物细胞培养技术和核移植技术,获得无限个转基因绵羊。3.下列关于动物细胞培养的叙述,正确的是( )A.连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型B.某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞C.由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆D.未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状答案 B 连续细胞系是发生转化了的细胞
6、系,大多数具有异倍体核型,A 错误;癌细胞在合适条件下可以发生不定向的基因突变而逆转为正常细胞,B 正确;由一个单细胞培养形成的细胞群为一个克隆,C 错误;未经克隆化培养的细胞系具有异质性,D 错误。34.在 25 的实验条件下可顺利完成的是( )A.光合色素的提取与分离B.用斐林(本尼迪特)试剂鉴定还原糖C.大鼠神经细胞的培养D.制备用于植物组织培养的固体培养基答案 A 用斐林(本尼迪特)试剂鉴定还原糖时需热水浴加热,B 错误;大鼠神经细胞的培养,需要保持在大鼠的正常体温 37 39 ,C 错误;制备用于植物组织培养的固体培养基需高温灭菌,D 错误;光合色素的提取与分离在室温下即可完成,A 正确。
