1、ICS 65.120 B 46 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 3824.2 2019 青贮饲料质量检测与评价技术规范 第 2 部分：青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定 Technical specification for silage quality testing and evaluation Part2： Determination of absorbable starch in whole plant corn silage 2019 - 12 - 24 发布 2020 - 01 - 24 实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 3824.2 2019 I 前
2、言 DB37/T 3824 2019青贮饲料质量检测与评价技术规范分为 4个部分： 第 1部分：全株玉米制作青贮饲料机械揉搓质量评价技术规范； 第 2部分：青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定； 第 3部分：多功能饲草粉碎机作业质量技术规范； 第 4部分：青贮饲料霉菌毒素检测技术规程。 本部分为 DB37/T 3824 2019的第 2部分。 本部分按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本部分由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本部分由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本部分起草单位：山东省畜牧总站、山东五征高北农牧机械有限公司、德州农慧农牧专业合作联合 社、东营市畜牧兽医工作站、山东
3、芳华农业机械有限公司。 本部分起草人：翟桂玉、刘栋、姜慧新 、王兆凤、张文娟、仲崇岳、曹阳、纪中良、王志坚、郭爱 华、刘刚、张磊、王玉霞。 DB37/T 3824.2 2019 1 青贮饲料质量检测与评价技术规范 第 2 部分：青贮玉米中可吸收 淀粉含量的测定 1 范围 本标准规定了青贮玉米中可吸收淀粉含量的测定方法。 本标准适用于所有青贮玉米可吸收淀粉含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 728 禾本科牧草干草质量分级 NY/
4、T 2129 饲草产品抽样技术 规程 3 术语与定义 下列术语与定义适用于本文件。 3.1 可吸收淀粉 absorbable starch 健康动物胃肠中能够吸收的淀粉及其降解产物的总称。 4 原理 样品经前处理后，先在沸水浴中经耐高温 -淀粉酶水解，使可消化淀粉转化成葡萄糖，离心，得 上清液，用葡萄糖试剂盒测定葡萄糖含量（ FS），沉淀加入一定浓度的氢氧化钾使之溶解，经葡萄糖淀 粉酶作用将其转化成葡萄糖，用葡萄糖试剂盒测定葡萄糖含量 (SS)，将获得的两个葡萄糖含量（ FS+SS） 相加，再乘以 0.9即换算成可吸收淀粉含量。 5 仪器设备 5.1 离心机。 5.2 电热恒温水浴锅。 5.3
5、 酸度计。 5.4 分光光度计。 5.5 电子分析天平（感量 0.000 1 g）。 5.6 容量瓶（ 100 mL、 1 000 mL）。 DB37/T 3824.2 2019 2 6 试剂与溶液 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 6.1 乙醚。 6.2 耐高温 -淀粉酶（ 120 000 U/mL）。 6.3 2 mol/L 氢氧化钾溶液。 6.4 磷酸盐缓冲液（ pH5.8），分别称取磷酸二氢钾 8.34 g 与磷酸氢二钾 0.87 g，加适量水使其溶解， 定容至 1 000 mL。 6.5 醋酸盐缓冲液 (pH4.4)，分别量取 0.2 mol/L 醋酸溶液 30.5 m
6、L 及 0.2 mol/L 醋酸钠溶液 19.5 mL 混匀。 6.6 葡萄糖淀粉酶（ 100 000 U/mL）。 6.7 2 mol/L 盐酸溶液。 6.8 葡萄糖试剂盒。 7 检测方法 7.1 样品前处理 7.1.1 样品的干燥 抽取青贮玉米样品，并进行烘干处理，烘干样品过 40目筛磨碎备用。 7.1.2 样品脱脂 称取烘干磨碎样品 2 g 5 g（精确到 0.001 g），置于放有慢速滤纸的漏斗中，用 30 mL乙醚分三次 洗去样品中脂肪，弃去乙醚。 7.2 可吸收淀粉含量测定 7.2.1 可吸收淀粉提取及转化 7.2.1.1 上清液部分 取 0.5 g试样放入 50 mL离心管，加入
7、 10 mL(pH5.8)磷酸盐缓冲溶液和 1 mL耐高温 -淀粉酶，沸水 浴 30 min，冷 却至室温，离心 (5 000 r/min， 20 min)获得上清液；加入 10 mL蒸馏水，洗涤沉淀，离心 获得上清液 (该步骤至少重复一次 )。 7.2.1.2 洗涤沉淀物部分 将 7.2.1.1获得的洗涤离心沉淀物，加入 6 mL 2 mol/L氢氧化钾溶解沉淀，室温下振荡 30 min，促 进沉淀溶解，以 2 mol/L盐酸调 pH至中性，加入 5 mL醋酸盐缓冲液 (pH4.4)和 1 mL葡萄糖淀粉酶。 60 水浴 45 min。离心 (5 000 r/min， 20 min)，收集上
8、清液，再用 10 mL蒸馏水洗涤沉淀 (该步骤重复两次 )， 离心 (5 000 r/min， 20 min)，获得上清液。 7.2.2 上清液的处理 7.2.2.1 分别将 7.2.1.1 和 7.2.1.2 所收集的上清液，定容至 100 mL 容量瓶中。 DB37/T 3824.2 2019 3 7.2.2.2 葡萄糖含量的测定。根据葡萄糖试剂盒以及使用说明书，用分光光度计测定样品中葡萄糖的 含量，以蒸馏水为空白管，以试剂盒自带标准液为标准管，把试剂与工作液按一定比例混合，置 37 水浴 15 min，以空白管调零，在 505 nm 波长下读取各管吸光度值。 8 测定结果计算 8.1 计
9、算公式 8.1.1 葡萄糖（ X）含量计算公式： 1 12 180 AXCA . (1) 式中： X 葡萄糖含量， mg/L； A1 样品管吸光度； A2 标准管吸光度； C1 标准管中葡萄糖的浓度， mmol/L。 8.1.2 可吸收淀粉（ DS）含量计算公式： 23 0 . 9 100%C C VDS W . (2) 式中： DS 可吸收淀粉含量， %； C2 第一次处理上清液（ FS）样品中葡萄糖的浓度， mg/L； C3 第二次处理上清液（ SS）样品中葡萄糖的浓度， mg/L； V 溶液终体积， L； W 样品 重量， mg。 8.2 结果计算 同一试样取两个平行样测定，以其算术平均值作为测定结果，结果保留 3位有效数字。 8.3 允许差 三个平行样的测定结果最大允许相对标准偏差为 5 %。 _
