1、 ICS 65.020.01 B 05 DB41 河南省 地方标准 DB41/T 1926 2019 高油酸花生四级种子质量标准 2019 - 11 - 21发布 2020 - 02 - 21实施 河南省 市场 监督 管理 局 发布 DB41/T 1926 2019 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的 规则 起草。 本标准由河南省农业农村厅提出并归口。 本标准起草单位：河南省农业科学院 经济作物 研究所。 本标准主要起草人： 郝西、臧秀旺、刘娟、张俊、郑峥、郭秀 璞 、汤丰收 、 高伟、徐静、张忠信、 孙子淇、苗利娟、杜红、 张香萍、王桂芳、 崔亚男、张曼。 DB41/T
2、 1926 2019 1 高油酸花生四级种子 质量标准 1 范围 本标准规定了高油酸花生四级种子质量的术语和定义、质量要求、检验方法与检验规则。 本标准适用于河南省高油酸花生 四级 种子 质量的评价 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅 注日期的版本适用于本文 件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3543.2 农作物种子检验规程 扦样 GB/T 3543.3 农作物种子检验规程 净度分析 GB/T 3543.4 农作物种子检验规程 发芽试验 GB/T 3543.5 农作物种子检验规程 真实性和品
3、种纯度鉴定 GB/T 3543.6 农作物种子检验规程 水分测定 GB 5009.168 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定 GB 20464 农作物种子标签通则 NY/T 2237 植物新品种特 异性、一致性和稳定性测试指南 花生 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件 。 3.1 高油酸花生 种子 脂肪中油酸含量 75%的花生 。 3.2 种子纯度 品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率表示 。 3.3 种子 净度 在一定量的种子中，正常种子的重量占总重量（包含正常种子之外的杂质）的百分比 。 3.4 四级种子 在种子生产中，以育种家种子为
4、种源，运用重复繁殖技术路线，按世代顺序繁殖的育种家种子、原 原种、原种和大田用种的种子 。 3.5 育种家种子 育种家育成的最初种子 。 具有该品种特异性、一致性和遗 传稳定性。用白色标签作标记 。 DB41/T 1926 2019 2 3.6 原原种 由育种家种子直接繁殖 的种子。 具有该品种特异性、一致性和遗传稳定性。用白色标签作标记 。 3.7 原种 由原原种直接繁殖 的种子。 具有该品种特异性、一致性和遗传稳定性。用紫色标签作标记 。 3.8 大田用种 由原种繁殖用于大田生产的种子 。 具有该品种特异性、一致性和遗传稳定性。用蓝色标签作标记 。 4 质量要求 高油酸 花生种子质量指标应
5、符合表 1的要求 。 表 1 高油酸花生种子质量指标 项目 育种家种子 原原种 原种 大田用种 油酸 /% 75.0 75.0 75.0 75.0 纯度 /% 100 100 99.6 99.4 净度 /% 99.5 99.5 99.5 99.3 杂质 /% 0.5 0.5 0.5 0.7 其他作物种子 /% 0 0 0 0 杂草种子 /（ 粒 /kg） 0 0 0 1 有毒 (害 )杂草种子 /（ 粒 /kg） 0 0 0 0 发芽率 /% 80.0 80.0 80.0 80.0 水分 /% 10.0 10.0 10.0 10.0 5 检测方法 5.1 真实性和品种纯度 5.1.1 表型鉴定
6、 5.1.1.1 田间鉴定 按品种地上部性状的典型性和荚果性状的典型性进行鉴定。鉴定方法按 NY/T 2237的规定 执行 。 5.1.1.2 油酸含量测定 按 GB 5009.168的规定执行； 油酸含量指标应符合该品种本质特征 。 5.1.2 分子标记 采用固定数目的 单核苷酸多态性（ Single Nucleotide Polymorphism， SNP） 引物，通过与标准样 品比较或与 SNP指纹数据比对平台比对的方式，对品种真实性进行验证或身份鉴定。 检测方法按附录 A 执行 。 DB41/T 1926 2019 3 5.2 净度和杂质 按 GB/T 3543.3的规定执行 。 5.
7、3 发芽试验 按 GB/T 3543.4的规定执行 。 5.4 水分 按 GB/T 3543.6的规定执行 。 5.5 其他作物、杂草种子和有毒（害）杂草种子数目 按 GB/T 3543.3的规定执行 。 6 检验规则 6.1 扦样 按 GB/T 3543.2的规定执行 。 6.2 质量判定 按 GB 20464的 规定执行 。 DB41/T 1926 2019 4 A A 附 录 A （规范性附录） 花生品种真实性分子标记鉴定方法 A.1 引物合成 利用已遴选的 14个核心 SNP引物和 36个扩展 SNP引物作为品种真实性验证和身份鉴定的检测引物， 构建已知品种的 SNP指纹数据比对平台。
8、 根据真实性验证或身份鉴定的要求，采用序贯式方法，选定 SNP引物。 SNP引物采用 ULTRPAGE的方式进行纯化，将 Primer_Allele FAM（ 36 umol/ L）、 Primer_Allele HEX （ 36 umol/ L）、 Primer_Common（ 90 umol/ L） 三种引物 溶解后 按体积比 1:1:1混匀为 KASP引物 Mix。 A.2 脱氧核糖核酸 （ Deoxyribonucleic Acid， DNA） 提取 在种子生产基地随机取样，供检样品为叶片或种子，采用混合样品检测（至少含有 30个个体 的材 料 ），先单独提取 DNA，再取等量 DNA
9、混合。 DNA提取方法应保证提取的 DNA数量和质量符合 PCR扩增的要求， DNA无降解，溶液的紫外光吸光 度 OD260与 OD280的比值宜介于 1.8 2.0。 DNA提取可选 CTAB法或试剂盒法。 A.3 PCR扩增 SNP反应可以在 96等不同 规格 孔板进行，体系的总体积可相应采用 10 L或 5 L，在板上设无 模板对照。 A.4 SNP基因分型 将 PCR扩增产物用能检测荧光信号的检测平台（如可以检测 FAM和 HEX波长荧光的酶标仪 FLUOstar Omega及实时定量 PCR仪）进行读板，并根据荧光量比值进行 SNP分型。 A.5 结果计算与表示 统计位点差异记录的结果，计算差异位点数，核实差异位点的引物编号。 检测结果用供检样品和标准样品比较的位点差异数表示，检测结果的容许差距不大于 2个位点。对 于在容许差距范围内且提出有异议的样品，可以按照 GB/T 3543.5的规定进行田间小区种植鉴定。 _
