1、 ICS 65.020.30 B 41 DB51 四川省 地 方 标 准 DB 51/T 2665 2019 种鸡场鸡白痢沙门氏菌净化技术规范 2019 - 12 - 30 发布 2020 - 02 - 01 实施 四川省市场监督管理局 发布 DB51/T 2665 2019 I 目 次 前言 . I 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 种鸡场鸡白痢沙门氏菌净化程序 . 1 5 种鸡场鸡白痢沙门氏菌抗体阴性鸡群的维持 . 2 6 种鸡场鸡白痢沙门氏菌的净化指标 . 2 附录 A （资料性附录） 鸡白痢沙门氏菌 PCR 检测流程 . 4 DB51/T 266
2、5 2019 II 前 言 本标准依据 GB/T 1.1 2009 给出的规定进行编写。 本标准由四川省农业农村厅提出并归口。 本标准由四川省市场监督管理局批准。 本标准起草单位：四川大学。 本标准起草人：王红宁、张安云、雷昌伟、唐艺芝、 杨鑫、孟延发。 DB51/T 2665 2019 1 种鸡场鸡白痢沙门氏菌净化技术规范 1 范围 本标准规定了种鸡场鸡白痢沙门氏菌净化程序、鸡白痢沙门氏菌阴性鸡群维持以及净化指标。 本标准适用于 四川省 行政范围内种鸡场鸡白痢沙门氏菌净化技术指导。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件
3、。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4789.4 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的测定 GB/T 5750.2 生 活饮用水标准检验方法 水样的采集与保存 NY 5027 无公害食品 畜禽饮用水水质 NY/T 2838 禽沙门氏菌病诊断技术 NY/T 536 鸡伤寒和鸡白痢诊断技术 DB 51/T 1286 规模化鸡场消毒技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 鸡白痢 是由鸡白痢沙门氏菌引起的以 2-3周龄雏鸡下痢和败血症为特征的传染病。初期病鸡仅表现食欲减 少，继而不食；腹泻，排白色稀浆样
4、粪便，有糊堵肛门现象；严重者因呼吸困难或急性败血症而死亡。 3.2 净化 为达到消灭和清除传染源的目的，在某一限定地区或 养殖场内采取的一系列措施。 4 种鸡场鸡白痢沙门氏菌 净化程序 4.1 总体原则 4.1.1 持续开展鸡白痢沙门氏菌病原学检测、抗体检测，淘汰带菌鸡或鸡群。 4.1.2 强化本场引种和投入品的检测，避免外来病原传入风险。 4.1.3 采取严格的生物安全措施，建立完善的防疫和生产管理等制度，对饮水、空气、饲料、粪便、 鼠、苍蝇等进行鸡白痢沙门氏菌检测，构建持续有效的生物安全防控体系。 DB51/T 2665 2019 2 4.2 转群、开产前鸡白痢沙门氏菌抗体检测 种鸡场从无
5、白痢鸡场引种后，在 90-120日龄，采用 NY/T 536全血平板凝集试验检测沙门氏菌抗体， 祖代鸡 100%进行检测 。父母代公鸡 100%全检，父母代母鸡的检测比例如下：养殖规模 30万只按 3 %比 例抽检， 10万只养殖规模 30万只，按 4 %比例抽检， 10万只及以下养殖规模，按 5 %比例进行抽检。 所有抗体阳性鸡或可疑阳性鸡用 NY/T 2838中微量 凝集法进行第二次抗体复检，两次均呈抗体阳性， 则 淘汰。 若抗体阳性率高于 5 %，则抽检比例升至 30 %，淘汰阳性鸡。若抗体阳性率高于 20%，则本群鸡不 具备开展鸡白痢沙门氏菌净化的条件。 4.3 14-21 日龄和 9
6、0-120 日龄鸡粪便中鸡白痢沙门氏菌 PCR 检测 对 14-21日龄和 90-120日龄 鸡 (单次检测不低于 200只 ) 采集肛拭子，按照附录 A对 鸡白痢沙门氏菌 进行 PCR检测，确定是否有鸡白痢沙门氏菌感染 （若同时出现 260 bp， 570 bp左右两条条带，则判断为 鸡白痢沙门氏菌阳性） 。对鸡白痢沙门氏菌阳性 鸡进行淘汰 。 5 种鸡场鸡白痢 沙门氏菌抗体阴性鸡群 的 维持 5.1 种鸡场消毒及鸡白痢沙门氏菌检测 种鸡场日常消毒按照 DB51/T 1286进行。 引进雏鸡前对鸡舍及周边环境进行系统消毒，消毒后采集 鸡舍内墙角、鸡笼、地面棉拭子样品 按照 GB 4789.4
7、对 鸡白痢沙门氏菌进行分离鉴定， 确保 无鸡白痢沙 门氏菌污染。采集鸡 舍外 鼠、苍蝇 等样品 按照 GB 4789.4对鸡白痢沙门氏菌进行分离鉴定 ， 确保 鸡舍周 边无鸡白痢沙门氏菌感染风险。 5.2 饮用水微生物指标检测 在 鸡群饮水 乳头处采集水样进行检测，每半个月检测一次。饮水取样方法按照 GB/T 5750.2进行， 对沙门氏菌的检测方法按照 GB 4789.4进行。 对不达标的饮水通过净化处理，可采用酸化剂 （ 酸性电解 水等 ） 进行饮水消毒 ， 使饮水达 到 NY 5027要求 。不同企业水的净化处理方案必要时根据实际情况，通 过实验确定。参照附录 A的方法对沙门氏菌病原进行
8、检测。 5.3 饲料中沙门氏菌检测 监测 每批 蛋白类饲 料原料和饲料成品 ，饲料中沙门氏菌检测按照 GB/T 13091进行。 检测不合格原料 和成品不能使用。 5.4 空气中细菌总数检测 对鸡舍空气中细菌总数进行检测，取样及检测方法按照 DB51/T 1286进行，空气中细菌数 不超过 25000 CFU/m3为合格。并 根据 鸡 场实际情况根据实验测定结果制定出个性化的消毒程序。 5.5 沙门氏菌抗体检测 在开产后每隔 3个月，采用全血平板凝集试验检测沙门氏菌抗体，按 0.5 %比例抽检。方法按照 NY/T 536进行初筛，阳性样本采用 NY/T 2838进行确诊。阳性率若高于 2 %，
9、则抽检比例升至 10 %，淘汰阳性 鸡。 6 种鸡场鸡白痢 沙门氏菌的净化指标 DB51/T 2665 2019 3 祖代种鸡场鸡白痢血清学阳性率低于 0.2%；父母代种鸡场鸡白痢血清学阳性率低于 1%；种公鸡的鸡 白痢血清学全部为阴性 ； 鸡白痢沙门氏菌 PCR检测全部 为阴性； 连续两年以上无临床病例，即认为达到 鸡白痢净化状态。 DB51/T 2665 2019 4 A A 附 录 A （ 资料 性附录） 鸡白痢沙门氏菌 PCR 检测流程 采集新鲜肛拭子样品 放入装有 3 mL 缓冲蛋白胨水 的无菌 EP管 中，于 36 ， 160 r/min培养 18 h。轻 轻摇动 培养物 ，移取
10、1mL接种于 10mL氯化镁孔雀绿增菌液 中， 42 培养 24 h。 取 1mL增菌 液 采用煮沸法制 备细菌 DNA模板， PCR特异性引物见表 1， PCR反应体系和反应条件见表 2。 取 2 L PCR产物用 1% 琼脂糖凝 胶于 0.5TAE缓冲液中进行电泳检测。 鸡白痢沙门氏菌可见 573、 260bp两条带，其余沙门氏菌仅见 260bp 一条带，非沙门氏菌无扩增条带（图 1）。 表 A.1 沙门氏菌及鸡白痢血清型特异性引物序列表 目标序列 引物 序列 扩增片段长度（ bp） 沙门氏菌属特异性序列 STN-F 5-CTTTGGTCGTAAAATAAGGCG-3 260 STN-R
11、5-TGCCCAAAGCAGAGAGATTC-3 鸡白痢 /鸡伤寒特异性序列 SEP-F 5-CACTGGAGACTCTGAGGACAA-3 573 SEP-R 5-GGATTGATGAGGCTAACAAGGA-3 表 A.2 沙门氏菌及鸡白痢血清型特异性 PCR 反应体系 和反应条件 试剂 添加量 反应 条件 引物 SEP-F、 SEP-R（ 10 mol） 各 0.5L 95 预变性 10 min； 94 变性 30 s 57 退火 30 s 72 延伸 30 s 72 终 延伸 10 min； 4 保存 。 引物 STN-F、 STN-R（ 10 mol） 各 0.5L 2Taq PCR MasterMix 10L 超纯水 6L 模板 DNA 2L 合计 20L 图 A.1 沙门氏菌 PCR 电泳结果 （ 1-2： 鸡白痢沙门氏菌 ； 3-10依次为 肠炎沙门氏菌 、 鼠伤寒沙门氏菌 、 德尔卑沙门氏菌 、 甲型副伤寒沙门 氏菌 、 海德堡沙门氏菌 、 都柏林沙门氏菌 、 纽波特沙门氏菌 、 印第安纳沙门氏菌 ； 11：奇异变形杆菌； 12：埃希氏大肠杆菌； 13：粪肠球菌； 14：金黄色葡萄球菌； 15：阴沟肠杆菌； 16：空肠弯曲杆菌； 17：普通变形杆菌； 18：唾液乳酸杆菌； 19：超纯水） _
