1、 ICS 65.160 B 35 DB52 贵州省地方标准 DB52/T 13072018 烟草及烟草制品 烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明、假木贼碱、 二烯烟碱、2,3-联吡啶、可替宁的测定 气相色谱-氮化学发光检测法 Tobacco and tobacco productsDetermination of nicotine,nornicot ine, anatabine,myosmine,anabasine,nicotyrine,2,3-dipyridyl,cotinineGas chromatography-nitrogen chemiluminescence detector 2018 -
2、 08 - 13 发布 2019 - 02 - 13 实施 贵州省质量技术监督局 发布 DB52/T 13072018 I 目 次 前 言 . . II 1 范围 . . 1 2 规范性引用文件 . . 1 3 原理 . . 1 4 试剂 . . 1 5 仪器及材料 . . 2 6 样品制备 . . 2 7 分析步骤 . . 3 8 精密度和回收率 . . 4 9 检测报告 . . 5 附录 A（资料 性附录） 色谱图. . 6 DB52/T 13072018 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。 请注意：本文件的某些内容
3、可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中国烟草总公司贵州省公司提出并归口。 本标准起草单位：贵州省烟草科学研究院。 本标准主要起草人：耿召良、向章敏、郭庆华、蔡凯、张婕、杨慧、蔡斌、夏范讲、刘文霖、丁根 胜、赵瑞娟、巴金莎、王小庭、张继胜。 DB52/T 13072018 1 烟草及烟草制品 烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明、假木贼碱、二烯 烟碱、2，3-联吡啶、可替宁的测 定 气相色谱-氮化学发光检测法 1 范围 本标准规定了烟草和烟草制品中烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明、假木贼碱、二烯烟碱、2，3- 联吡啶、可替宁的测定方法。 本标准适用于烟草和烟草制品。 2 规范性
4、引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 YC/T 31-1996 烟草及烟草制品 试样的制备和水分测定 烘箱法 3 原理 本标准采用5%氢氧化钠碱溶液提取烟草或烟草制品中的生物碱，提取液经过二氯甲烷与甲醇混合溶 剂进行萃取，然后直接采用气相色谱-氮化学发光检测器进行检测，以喹啉为内标采用内标标准曲线法 进行定量分析。 4 试剂 4.1 基本要求 除特殊要求外，均应使用分析纯试剂。 4.2 试剂种类 4.2
5、.1 烟碱（尼古丁），含量98%（质量分数）。 4.2.2 降烟碱，含量98%（质量分数）。 4.2.3 麦斯明，含量98%（质量分数）。 4.2.4 假木贼碱，含量98%（质量分数）。 4.2.5 新烟草碱，含量98%（质量分数）。 4.2.6 二烯烟碱，含量98%（质量分数）。 4.2.7 2，3 -联吡啶，含量98%（质量分数）。 4.2.8 可替宁，含量98%（质量分数）。 4.2.9 喹啉，含量98%（质量分数）。 4.2.10 甲醇，色谱纯。 DB52/T 13072018 2 4.2.11 二氯甲烷，色谱纯。 4.2.12 氢氧化钠，分析纯。 4.2.13 提取溶液：5%氢氧化钠
6、（W/W）。 4.2.14 萃取溶液：二氯甲烷：甲醇=3：1（V/V）。 4.2.15 尼龙针式滤头（0.22 m）。 4.2.16 实验室用水参照 GB/T 6682-2008 规定。 4.2.17 标准溶液 4.2.17.1 生物碱标准储备液 分别称取尼古丁（4.2.1）约50 mg、降烟碱（4.2.2）约50 mg、麦斯明（4.2.3）约50 mg、假木贼 碱（4.2.4）约50 mg、新烟草碱（4.2.5）约50 mg、二烯烟碱（4.2.6）约50 mg、2，3 -联吡啶（4.2.7） 约50 mg、可替宁（4.2.8）约50 mg于50 mL烧杯中，用20 mL甲醇（4.2.10）完
7、全溶解，再分别转移至50 mL 容量瓶中用甲醇（4.2.10）定容至刻度。然后分尼古丁、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、新烟草碱、二烯 烟碱、2，3-联吡啶、可替宁各5 mL于50 mL容量瓶中，用甲醇（4.2.10）定容至刻度，作为八种生物碱 的一级混合标准溶液。冷藏于4 保存，有效期3个月。取用时，放置于常温下，达到常温后方可使用。 4.2.17.2 内标标准储备液 准确称取内标喹啉 （4.2.9） 约50 mg于10 mL烧杯中， 用5 mL甲醇 （4.2.10） 完全溶解， 用甲醇 （4.2.10） 定容至刻度，作为内标储备液。冷藏于4 保存，有效期3个月。取用时，放置于常温下，达到常温后
8、方可使用。 4.2.17.3 生物碱标准系列溶液 取八种生物碱的一级混合标准溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇（4.2.10）定容至刻度，作为生 物碱的二级混合标准溶液。分别取二级混合标准溶液0.3 mL、0.5 mL、1.0 mL和一级混合标准溶液0.2 mL、 0.4 mL、0.6 mL于6个10 mL容量瓶中，分别加入0.05 mL内标标准储备液（4.2.17.2），用二氯甲烷：甲 醇=3：1（V/V）（4.2.14）溶液定容至刻度，得到各级生物碱系列标准溶液。 5 仪器及材料 5.1 旋风式样品磨，40 目筛。 5.2 分析天平，感量为 0.1 mg。 5.3 回旋式振荡器。
9、 5.4 离心机。 5.5 气相色谱仪，配置氮化学发光检测器。 6 样品制备 按照YC/T 31-1996制备试样并测定水分含量。 DB52/T 13072018 3 7 分析步骤 7.1 样品处理 准确称取过40目筛的200 mg样品置于50 mL离心管中， 准确加入0.05 mL内标标准储备液 （4.2.17.2） 和0.8 mL提取溶液（4.2.13）混合均匀，再加入5 mL萃取溶液（4.2.14），并置于回旋式振荡器中振荡 提取30 min，然后用4000 rpm/min离心5 min，取下层清夜过滤后，用0.22 m微孔滤膜（4.2.15）过滤后 待分析。 7.2 气相色谱-氮化学发
10、光检测器条件 以下气相色谱-氮化学发光检测器条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性： 色谱柱：DB-17（50%苯基-50%二甲基聚硅氧烷毛细管柱）；规格：30 m0.25 mm i.d0.25 m； 进样口温度：250 ； 分流进样：分流比 10：1； 进样量：2 L； 载气：氦气； 流量：恒流模式，1.5 mL/min； 程序升温：初始温度为 110 保持 1 min，以4 /min 升至180 保持1 min，再以 20 /min 升至 250 保持 1 min，共运行24 min； 氮化学发光检测器裂解器温度：950 ； 氮化学发光检测器氧气流量：10 mL/min； 氮化学发光检测
11、器氢气流量：4 mL/min； 氮化学发光检测器数据采集频率：25 Hz。 7.3 标准工作曲线 用生物碱标准系列溶液（4.2.17.3）制作标准工作曲线。根据化合物峰面积与内标峰面积的比值作 为纵坐标（Y），化合物浓度与内标浓度比值作为横坐标（X），分别建立八种生物碱的校正曲线，线性 相关系数（R2）应不小于0.999。 标准工作溶液的定量参数见表1。 表1 生物碱标准工作溶液的定量参数 生物碱名称 线性范围/ g/mL 线性回归方程 线性相关系数 最低检出限/ng 最低定量限/ng 尼古丁 200-5000 Y=1.506X-0.032 0.9998 0.25 0.75 降烟碱 5-100
12、 Y=1.587X-0.002 0.9997 0.15 0.45 麦斯明 0.3-6 Y=1.635X-0.00005 0.9995 0.15 0.45 假木贼碱 1-24 Y=1.552X-0.001 0.9994 0.15 0.45 新烟草碱 5-100 Y=1.571X+0.003 0.9997 0.15 0.45 二烯烟碱 0.3-6.0 Y=1.416X+0.00001 0.9999 0.18 0.54 2,3-联吡啶 0.3-6.0 Y=1.514X-0.00004 0.9991 0.18 0.54 可替宁 0.3-6.0 Y=1.396X-0.00004 0.9999 0.20
13、0.60 DB52/T 13072018 4 7.4 样品测定 按照色谱分析条件（7.2）测定样品（7.1）中生物碱的含量。根据保留时间定性，同时，根据样品 色谱图中化合物峰面积和内标峰面积，计算得出样品溶液中的生物碱的浓度（g/mL）。 混合标准溶液和样品溶液色谱图参见附录A。 7.5 结果的计算与表述 7.5.1 样品中生物碱含量的计算 以干基计的生物碱含量，由式（1）得出： 11 WmA Vc W . (1) 式中： W 样品中各种生物碱的含量，单位为微克每克（g/g）； c 样品溶液中各种生物碱的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）； V 萃取溶液的体积，单位为毫升（mL）； A 稀释倍
14、数； m 样品质量，单位为克（g）； 1W 样品水分的质量分数。 7.5.2 结果的表达 以两次平行测定值的平均值作为样品的测定结果，结果精确至0.01 g/g。平行测定值之差除以平 均值不应大于5%。 8 精密度和回收率 本方法的精密度和回收率测定结果见表2。 表2 方法的回收率和精密度 含量/g/g 生物碱名称 实际含量 添加量 总含量 添加回收率 n=5/% 相对标准偏差 n=5/% 15000.0 44960.0 96.4 4.6 尼古丁 31640.0 30000.0 60720.0 98.5 5.8 300.0 927.0 97.6 2.6 降烟碱 650.0 600.0 1240
15、.0 99.2 3.5 4.0 12.4 99.2 1.5 麦斯明 8.5 8.0 16.8 101.8 1.2 80.0 225.0 102.3 4.3 假木贼碱 140.0 150.0 280.0 96.6 3.2 250.0 719.0 97.2 2.3 新烟草碱 490.0 500.0 976.0 98.6 1.5 DB52/T 13072018 5 表 2 方法的回收率和紧密度 （续） 含量/g/g 生物碱名称 实际含量 添加量 总含量 添加回收率 n=5/% 相对标准偏差 n=5/% 50.0 17.6 103.5 1.2 二烯烟碱 12.0 10.0 21.8 99.1 1.0
16、5.0 16.8 98.8 3.2 2,3-联吡啶 12.0 10.0 21.9 99.5 2.2 5.0 15.9 99.4 3.6 可替宁 11.0 10.0 21.2 100.9 1.9 9 检测报告 检验报告应包括以下内容： 识别被测样品需要的所有信息； 参照本标准所使用的试验方法； 检测结果，包括各单次测定结果及其平均值； 与本标准规定的分析步骤的差异； 在检测中观察到的异常现象； 检测日期； 检测人员。 DB52/T 13072018 6 A A 附 录 A （资料性附录） 色谱图 下图为烟草中生物碱的混合标样（A）和实际烟草样品（B）色谱图。 A为烟草生物碱标样色谱图。 B为样品色谱图（图中：IS为内标喹啉；1为尼古丁；2为降烟碱；3为麦斯明；4为假木贼碱；5为二 烯烟碱；6为新烟草碱；7为2，3 -联吡啶；8为可替宁）。 _ DB52/T 1307-2018
