1、 ICS 65.020.99 CCS B 39 12 天津市 地方 标准 DB12/T 1067 2021 淡水小球藻生产技术规程 Technical regulations for production of freshwater Chlorella sp. 2021 - 08 - 16 发布 2021 - 09 - 16 实施 天津市市场监督管理委员会 发 布 DB12/T 1067 2021 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起 草。 本文件由 天津市 农业农村委员会 提出 并归口 。 本文件起草单位：天津市农业
2、科学院 。 本文件主要起草人：张峰峰、谢凤行、周可、赵琼、 李瑞环、 赵玉洁、孙海波、王姝、张越 、高晶 琳 、张新建。 DB12/T 1067 2021 1 淡水小球藻生产技术规程 1 范围 本文件 规定了淡水小球藻 （ Chlorella sp.） 培养的环境、设备 、 水 、 培养 方法 、 采收及注意事项。 本 文件 适用于淡水小球藻 生产 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 5749 生活饮用水卫生标准
3、 SL 733 内陆水域浮游植物监测技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 原藻种 the original microalgae species 由单藻落分离纯化，并在固体斜面培养基上繁殖保存的藻种。 3.2 液体藻种 the liquid microalgae species 原藻种在 固体平板培养基 上活化，挑取单藻落接种至装有灭菌液体培养基的透明容器中，光照培养 的藻种。 4 生产 用水 和设施设备 生产 用水 4.1 生产 用水 应 符合地表水环境质量标准 GB 5749中水质要求。 设施设备 4.2 4.2.1 藻种保藏室 放置冰箱 、 冰柜，保存原藻种的房
4、间。 4.2.2 藻种 培养室 进行培养基的配 制 和藻种的保种、培养及检查等操作的房间。配有分光光度计、电子天平 （精度为 0.01 g） 、光学显微镜（ 1000）、 照度计（精度 为 0.1 lx） 超净工作台、 高压蒸汽 灭菌锅 、恒温光照 培养箱 等。 4.2.3 规模 生产车间 DB12/T 1067 2021 2 进行藻液规模 培养 。 配有光照设备 和 不同容量的透明发酵容器等。 5 生产技术流程 生产流程 5.1 生产流程应按附录 A执行。 藻种质量 5.2 用于 培养 的藻种应有藻种鉴定报告或藻株来源相关信息。 规模生产之前需检测藻种的 细胞密度 和 纯度 ，不能有 其他
5、藻污染， 藻细胞 密 度 1107 cells/mL， 利用平板涂布法或 计数框 计数法测定藻 细胞 密度 ，计数框计数 法 应按 SL 733中 6.4的规定执行。 培养基 5.3 小球藻液体培养基配方见附录 B。保种固体培养基和计数培养基 为在液体培养基中 加入 20 g/L琼脂 粉。 灭 菌消毒 5.4 保种斜面培养基，生产液体藻种培养基以及计数培养基采用高压蒸汽灭菌，灭菌条件为 110 115 ， 0.1 MPa 0.15 MPa，灭菌 10 min 15 min。 规模 培养 容器用 10 mg/L 20 mg/L高锰酸钾溶液或 有效氯浓度为 0.1 0.3 次氯酸钠 溶液浸泡 12
6、 h 24 h。消毒后，用清水洗净。检查无杂藻杂物后，加水和培养基。 也可加入水和培养基后进行高压 蒸汽灭菌，灭菌条件为 110 115 ， 0.1 MPa 0.15 MPa，灭菌 10 min 15 min。 液体藻种培养 5.5 5.5.1 容器 容器为 200 mL 500 mL透明玻璃瓶，可高压蒸汽灭菌。 5.5.2 培养 条件 从斜面培养基接种原藻种到液体培养基中，光照强度 3 000 lx 5 000 lx， 光照周期 14L:10D， 培 养温度 20 25 ， 静置培养 7 d 10 d。 5.5.3 质量检测 配 制 计数培养基，利用平板涂布法测定 小球 藻细胞 密度 及 纯
7、度 。 小球 藻细胞 密度 1107 cells/mL， 其他藻 类 密度 0.1 ，即为合格藻种。 规模培养 5.6 5.6.1 容器 容器容积控制在 0.2 m 2 m，高度 100 cm。选用透光性强的塑料桶、塑料袋、玻璃 缸 等适合的 培养 容器。 5.6.2 接种量 按培养体积的 10% 20%接种液体藻种。 DB12/T 1067 2021 3 5.6.3 光照 光照强度 4 000 lx 20 000 lx。 5.6.4 温度 温度为 15 30 ，最适 培养 温度为 20 25 。 5.6.5 培养 方式 规模 培养 应适当 补充空 气，充气量 应大于培养容积的 1%。 5.6
8、.6 培养 周期 最适 培养条件 下，一个 培养 周期为 7 d 10 d。 生长监测 5.7 每天采 样监测， 用 计数框 计数法 或光密度法 计算藻细胞 密度 ，观察污染情况 。 污染控制 5.8 在培养的生产过程中， 应注意避免污染 ， 定期 检查藻细胞的生长状况，如发现有黄化 、黑化、 浮游 动物或其 他 藻类 污染，应 终止培养 ， 清洗消毒 ， 重新接种。 质量检测 5.9 利用平板涂布法测定 小球 藻细胞 密度 ，藻 细胞 密度 1107 cells/mL， 其他藻类 密度 1%即为合格 。 后处理 5.10 藻液 培养 完毕 ， 直接分装。 6 生产记录 生产、加工过程记录 6
9、.1 应记 载 藻种来源、 培养 日 期、 培养 时间、灌装日期、藻液颜色、藻细胞 密度 、温度等。 培养基采购、使用记录 6.2 应记载培养基进货日期、名称、规格、批号、数量、供货商、索证情况、保质期限、验收人记录、 培养基使用量等。 记录保存 6.3 生产记录应保存不少于 2年。 7 储 存 分装后的藻液 应贮存在通风、干燥、清洁的仓库，仓库内无有害气体、易燃易爆物品及有腐蚀性的 化学物品，远离热源。 DB12/T 1067 2021 4 A A 附录 A （规范性） 淡水 小球藻生产流程图 淡水小球藻生产流程见图 A.1 图 A.1 淡水小球藻生产流程 DB12/T 1067 2021
10、5 B B 附录 B （资料性） 淡水 小球藻培养基 淡水小球藻培养基配方 如下： NaNO3 1.5 g； K2HPO4 0.04 g； MgSO47H2O 0.075 g； CaCl27H2O 0.036 g； Na2CO3 0.02 g； 柠檬酸 0.006 g； 柠檬酸铁铵 0.006 g； EDTA 0.001 g； 微量元素溶液 A5 1 mL； 氨苄青霉素 (终浓度 ) 50 g/mL； 蒸馏水 /自来水 1 L。 其中， 微量元素溶液 A5 配方： H3BO3 2.86g； MnCl24H2O 1.81g； ZnSO47H2O 0.222g； Na2MoO4 0.39g； CuSO45H2O 0.079g； Co(NO3)26H2O 0.049g； 蒸馏水 1L。
