1、 ICS 65.020.01 CCS B20 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 2665 2022 苜蓿草 240 小时体 外消化率 的测定 Determination of 240 hour in vitro digestibility of alfalfa 2022-07-15 发布 2022-08-15 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 2665 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本文件 由内 蒙古 自治 区农 牧厅提 出。本文件 由内
2、 蒙古 自治 区畜 牧业标 准化 技术 委员 会（SAM/TC 19）归口。本文件 起草 单位：内蒙 古 自治区 农牧 厅综 合保 障中 心、内蒙 古自 治区 农牧 业 科学院，蒙草 生态 环境（集团）股 份有 限公 司、内蒙古 农业 大学、内 蒙古 自治区 质量 和标 准化 研究 院、呼 和浩 特市 农牧 局 综 合保障中 心、呼 和浩 特市 农 牧技术 推广 中心、呼和 浩 特市农 畜产 品质 量安 全中 心、巴彦 淖尔 市畜 牧业 服 务中心、呼和 浩特 市农 牧业 综合行 政执 法支 队、土默 特左旗 农牧 业综 合服 务保 障中心。本文件 主要 起草 人：张福 胜、金 鹿、李 胜利、
3、张 崇志、吴昊、毕超、张 春华、桑 丹、珊 丹、郭 大伟、刘芳、张洋、胡晓 晓、萨 初 拉、刘 威、李 长胜、宝华、杨鼎、张跃 华、付 强、王 志 军、康 长清、赵晨 宇、张丽平、王 芳。DB15/T 2665 2022 1 苜蓿草240 小时 体外消化 率的测 定 1 范围 本文件 规定 了 苜 蓿草240 小 时体外 消化 率的 测定 方法。本文件 适用 于不 同生 长期、不同 品种 的苜 蓿草 产品。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件；
4、不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB/T 3358.1 统计 学词 汇 及符号 第1 部分：一 般统 计术语 与用 于概 率的 术语 GB/T 6682-2008 分 析实 验室用 水规 格和 试验 方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动 物饲 料 试 样的制 备 DB15/T 1583 牧草中aNDFom 的测 定 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。中性洗 涤纤 维 neutral detergent fiber 用中性 洗涤 剂去 除饲 草中 的脂肪、淀 粉、蛋白 质和 糖类等 成分
5、后，残留 的不 溶解物 质的 总称。苜蓿中 性洗 涤纤 维体 外降 解率 the degradability of neutral detergent fiber of alfalfa in vitro 瘤胃液 体外 降解 的苜 蓿中 中性洗 涤纤 维含 量占 苜蓿 原样中 中性 洗涤 纤维 含量 的百分 比。4 试剂和 溶液 如无特 别说 明，所用 试剂 均为分 析纯。本文件 所用 水，应符 合 GB/T 6682-2008 中三 级水 要 求。丙酮（100%）。缓冲 液A：将 10.00 g 磷 酸氢二 钾、0.50 g 七水 硫 酸镁、0.50 g 氯化 钠、0.10 g 二水 氯化 钙
6、和0.50 g 尿 素加 入到1000 mL 的容 量瓶 中，用蒸 馏水 定容。DB15/T 2665 2022 2 缓冲 液B：将 15.00 g 碳 酸钠 和1.00 g 九 水硫 化钠 加入 到 1000 mL 的 容量 瓶 中，用 蒸馏 水定 容。3%十二 烷基 硫酸 钠（中性 洗涤剂）溶液：称 取 18.60 g 乙 二胺 四乙 酸二 钠和 6.80 g 四硼 酸钠 加入到100 mL 烧 杯中，加 少量 水加热 溶解 后，再加 入 30.00 g 十二 烷基 硫酸 钠和 20 mL 乙 二醇 乙醚。称 取4.65 g 无 水磷 酸氢 二钠，置于另 一烧 杯中，加少 量 水，微微 加
7、热 溶解 后倒 入 第一个 烧杯 中，稀 释至1000 mL。5 仪器和 设备 实验室 用样 品粉 碎机 或研 钵。瘤胃液 取样 器（长 30 cm，内 径12.70 mm，PPR 管）。分析天 平（分度 值 0.0001 g）。烘干箱（室 温300）。磁力搅 拌器（转 速 为 100 r/min 1400 r/min）。纤维袋（ANKOM F57，25 m 孔 隙）。封口机。体外模 拟培 养箱（ANKOM DAISY 型，美 国）。纤维分 析仪（ANKOM 220P，美国）。量筒（100 mL 和 1000 mL）。6 样品 取样 按GB/T 14699.1 要求 进行 采样。制备 样品按G
8、B/T 20195 的 要求 制备，置于 烘箱 内于65 烘干，研磨，过1 mm 筛后 取筛下 物。7 分析步 骤 瘤胃液 的制 备 在晨饲 前经 瘤胃 瘘管 利用 瘤胃液 取样 器采 集体 况健 康的供 试牛 的瘤 胃液，转 入预热 至39 的保 温容器中，混合 均匀后经4 层纱布过滤，滤 液持续通入CO2 气体，然后量取 试验所需量的瘤胃液 保温备用。体外消 化步 骤 7.2.1 消化 称取0.5000 g 样 品放 置于 纤维袋 中，封 口后 平铺 放 置于体 外模 拟培 养箱 中消 化罐的 分隔 板两 侧。取两个容 器分 别加 入266 mL 缓冲液B和1330 mL 缓 冲液A，于3
9、9 条件 下调 节其pH 达到6.80。于 每个 消化罐中加入 1600 mL 混合 缓冲 溶液后 放置 于体 外模 拟培 养箱中，打开 加热 和转 动 开关，使消化 罐的 温度 在20 min30 min 内达 到平 衡。取出消 化罐 加入 提前 预处 理好的400 mL 瘤 胃液，持 续通入CO2 然后 盖紧 盖子，置于体 外模 拟培 养箱 中连 续培养240 h。7.2.2 洗涤 DB15/T 2665 2022 3 培养完 毕后 取出 消化 罐倒 掉液体，再 将纤 维袋 取出，用流 动的 自来 水冲 洗 干 净。7.2.3 干燥 将纤维 袋置 于105 烘箱 中烘干6 h，放 入干 燥
10、器 中 冷却30 min 后，称 重。然 后再烘 干30 min，再冷却称 重，直至 两次 称量 之差小 于0.0020 g 为 恒重。中性洗 涤纤 维含 量的 测定 原样样 品和 残渣 样品 中中 性洗涤 纤维 含量 按照DB15/T 1583 的规 定进 行。8 结果计 算 样品中 中性 洗涤 纤维 含量 按式（1）计算。10012 3=WW WY（1）式中：Y 样品 中中 性洗 涤纤 维 的含量，单 位为 百分 比(%)；W3 洗涤 后样 品和 纤维 袋的重 量，单位 为克（g）；W2 纤维 袋的 重量，单 位为克（g）；W1 样品 的重 量，单位 为克（g）。样品中 中性 洗涤 纤维
11、体外 降解率 按式（2）计 算。10045 4=WW WZ（2）式中：Z 样品 在240 h 时间 点的中 性洗 涤纤 维瘤 胃液 体外降 解率，单 位为 百分 比(%)；W4 样品 中中 性洗 涤纤 维的重 量，单位 为克（g）；W5 经过240 h 体 外降 解 后残渣 样品 中中 性洗 涤纤 维的重 量，单位 为克（g）。结果表 示 取两次 测定 结果 的算 数平 均值，计算 结果 保留2 位 小 数点。不同苜 蓿草NDF240 h 体外 降解率 的测 定结 果见 附录A。重复性 按照GB/T 3358.1 的 要求，在重复 条件 下同 一样 品同 时两次 平行 测定 所得 结果 相对相
12、 差 小 于等 于10%。DB15/T 2665 2022 4 A A 附录A（资料 性）苜蓿 草NDF240 h 体 外降 解 率的测 定结 果 苜蓿草NDF240 h 体外 降解 率的测 定结 果见 表A.1。表A.1 苜蓿 草NDF240 h 体 外降 解率的 测定 结果 采样地点 品种 茬次 DM（%）NDF（%）NDFD(%NDF)uNDF(%NDF)呼伦贝尔农垦三生产队 紫花苜蓿 三茬 95.89 69.67 50.55 49.45 呼伦贝尔谢尔塔拉农场 杂花苜蓿 三茬 95.38 36.86 69.29 30.71 呼伦贝尔牙克石农垦 杂花苜蓿 三茬 94.99 63.67 58
13、.63 41.37 呼和浩特市 杂花苜蓿 返青期 96.71 36.86 81.09 18.91 呼和浩特市 黄花苜蓿 返青期 95.64 32.20 72.75 27.25 达拉特旗 紫花苜蓿 二茬 96.22 62.10 54.78 45.22 乌审旗毛乌素基地 龙牧 801 二茬 93.85 54.52 58.20 41.80 乌审旗毛乌素基地 中苜 3 号 二茬 93.38 52.93 53.48 46.52 乌审旗毛乌素基地 草原 3 号 二茬 94.79 58.02 52.59 47.41 乌审旗毛乌素基地 中苜 2 号 二茬 96.06 57.26 54.31 45.69 阿鲁科
14、尔沁旗 康赛 三茬 93.92 46.17 55.51 44.49 阿鲁科尔沁旗 WL2981162 三茬 94.85 45.38 57.93 42.07 阿鲁科尔沁旗 WL343HQ 三茬 96.48 45.12 62.70 37.30 阿鲁科尔沁旗 WL319HQ 三茬 96.76 45.39 57.29 42.71 阿鲁科尔沁旗 WL358HQ 三茬 95.72 45.53 57.10 42.90 敖汉旗 紫花苜蓿 三茬 94.76 41.12 51.72 48.28 阿鲁科尔沁旗 龙牧 806 三茬 95.39 41.26 54.22 45.78 阿鲁科尔沁旗 2065MF 三茬 95.34 47.09 62.82 37.18 阿鲁科尔沁旗 公农 1 号 三茬 94.86 45.56 52.22 47.78 阿鲁科尔沁旗 紫花苜蓿 三茬 94.06 51.46 60.46 39.54
