1、道B中华人民共和国国家标准GB 28404-2012 食品安全国家标准保健食品中-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的测定2012-05-17发布2012-07-17实施._nOT08S3. 户曾主p07阳电H￥f卢咆lii、边8 f1i/i马防伪中华人民共和国卫生部发布1 范围食品安全国家标准保健食品中-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的测定GB 28404-2012 本标准规定了保健食品中r亚麻酸、二十碳五烯酸(简称EPA，下同)、二十二碳五烯酸(简称DPA，下同)和二十二碳六烯酸(简称DHA，下同)的气相色谱测定方法。本标准适用于保健品食品中-亚麻酸
2、、EPA、DPA、DHA的测定，不适用于以脂肪酸乙醋为有效成分的保健食品中r亚麻酸、EPA、DPA、DHA的测定。2 原理试样经酸水解后提取脂肪，其中-亚麻酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)、二十二碳六烯酸(DHA)经醋交换生成甲醋后，通过气相色谱分离检测，以保留时间定性，外标法定量。3 试剂和材料注:除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GBjT6682规定的一级水。3. 1 试剂3. 1. 1 氢氧化饵(KOH)。3. 1.2 盐酸(HCD。3. 1. 3 元水乙酷(C2Hs OC2 Hs)。3. 1.4 乙醇(CH3CH20H):体积分数二三95%。3. 1. 5
3、 石油醒:沸程30.C60 .C。3. 1. 6 正己烧CH3(CH2CH3J:色谱纯。3. 1. 7 甲醇(CH30H):色谱纯。3. 1. 8 元水硫酸铀(Na2S04)。3.2 试剂配制氢氧化饵甲醇溶液(0.5 mol/L):称取2.8g氢氧化饵，用甲醇溶解并定容至100mL，混匀。3.3 标准晶3.3. 1 a-亚麻酸甲醋(C19H32 O2) :纯度:;:99.0%。3.3.2 EPA甲醋(C21H32 O2 ) :纯度二三98.5%。3.3.3 DPA甲醋(C23H36 O2):纯度注98.0%。1 GB 28404-2012 3.3.4 DHA甲醋(C23H34 O2):纯度二三
4、98.5%。3.4 标准溶液的配制3.4. 1 单个脂肪酸甲醋标准储备液(4.0mg/mL):称取100.0mg a-亚麻酸甲醋、EPA甲醋、DPA甲醋、DHA甲醋标准物质于25.0mL容量瓶中，分别用正己烧溶解并定容至刻度，摇匀。此溶液应贮存于一18.C冰箱中。3.4.2 脂肪酸甲醋混合标准中间液(1.0 mg/mL):分别吸取脂肪酸甲醋标准储备液2.50mL于10.0mL 容量瓶中，摇匀，亦为标准曲线最高浓度，临用时配制。3.4.3 脂肪酸甲醋标准工作液z分别吸取脂肪酸甲醋中间液0.40mL、0.80mL、1.0 mL、2.0mL、4.0 mL于10.0mL容量瓶中，用正己烧定容，此浓度即
5、为0.040mg/mL、0.080mg/mL、0.10mg/mL、0.20 mg/mL、0.40mg/mL的标准工作液，临用时配制。4 仪器与设备4. 1 气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(FID)。4.2 天平:感量为1mg和0.1mg。4.3 旋转蒸发仪。4.4 离心机z转速二三4000 r/min。4.5 涡旋混合器。4.6 恒温水洛锅。5 分析步骤5. 1 试样制备5. 1. 1 试样处理5. 1. 1. 1 固体试样称取已粉碎混合均匀的待测试样O.5 g2 g(精确到0.001g)(含待测组分5mg/g10 mg/g)加入50mL比色管中，加8mL水，混匀后再加10mL盐酸。将比色
6、管放入70.C 80 .C水浴中，每隔5 min10 min以涡旋混合器混合一次，至试样水解完全为止，约需40min50 mino取出比色管，加入10mL乙醇，混合。冷却至室温后将混合物移入100mL具塞量筒中，以25mL无水乙醒分次洗比色管，一并倒入量筒中。密塞振摇1min。加入25mL石油膛，密塞振摇1min，静置30min，分层，将吸出的有机层经过元水硫酸铀(约5g)滤入浓缩瓶中。再加入25mL元水乙酷密塞振摇1min, 25 mL 石油酶，密塞振摇1min，静置、分层，将吸出的有机层经过元水硫酸铀(约5g)滤入浓缩瓶中。按再加入25mL无水乙酶.，静置、分层，将吸出的有机层经过元水硫酸
7、铀(约5g)滤入浓缩瓶中重复操作一次，将全部提取液用旋转蒸发仪于45oC减压浓缩至近干。用正己烧少量多次溶解浓缩物，转移至25 mL容量瓶并定容，摇匀。按5.1.2步骤甲酣化处理。5. 1. 1. 2 油类制晶称取混合均匀的油类制品O.2 gl g(精确到0.001g)(含待测组分10mg/g20 mg/g)至25mL 容量瓶中，加入5mL正己烧轻摇溶解，并用正己烧定容至刻度，摇匀。按5.1.2步骤甲醋化处理，脂肪酸乙醋型油类制品的物理鉴别参见附录A。GB 28404-2012 5. 1. 2 甲醋化吸取待测液(5.1.1.1，5.1.1.2)2. 0 mL至10mL具塞刻度试管中，加入2.0
8、mL氢氧化拥甲醇溶液，立即移至涡旋混合器上振荡混合5min，静置5min，加入6mL蒸懵水，上下振摇0.5min，静置分层后，吸取下层液体，弃去后再反复用少量蒸锢水进行洗涤，并用吸管弃去水层，直至洗至中性(若有机相有乳化现象，以4000 r/min离心10min) ，吸取正己烧层待上机测试用。注:如使用塑料离心管或塑料刻度试管进行试样处理须同步进行空白对照试验。5.2 气相色谱参考条件5.2. 1 色谱柱:键合交联聚乙二薛固定相，柱长30m，内径0.32mm，膜厚o.5m或同等性能的色谱柱。5.2.2 柱温箱温度:起始温度180.C , 10 .C/min升温至220.C，再以8.C/min升
9、温至250.C，保持13 min 5.2.3 进样口温度:250.C;进样量lL，分流比20: 10 5.2.4 FID检测器温度:270.C。5.2.5 载气:高纯氮气，流量1.0 mL/min，尾吹25mL/mino 5.2.6 氢气:40mL/min;空气:450mL/mino 5.3 标准曲线的制作将1L的标准系列各浓度溶液(3.4.2，3.4.3)，注入气相色谱仪中，测得相应的峰面积或峰高，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积或峰高为纵坐标，绘制标准曲线(标准溶液气相色谱图见附录B中图B.l)。5.4 试验溶液的测定将1L的试样待测液(5.1.2)注入气相色谱仪中，以保留时间定性，测
10、得峰面积或峰高，根据标准曲线得到待测液中各脂肪酸甲醋的组分浓度(样品溶液气相色谱图见附录B中图B.2)。6 分斩结果的表述试样中-亚麻酸、EPA、DPA、DHA含量按式(1)计算:式中zX , = Ci X V X F X 100 -, m X 1000 Xi 试样中-亚麻酸、EPA、DPA、DHA的含量，单位为克每百克(g/100g) ; Ci 由标准曲线查得测定样液中各脂肪酸甲醋的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mU;V 一一被测定样液的最终定容体积，单位为毫升(mL); m 一一试样的称样质量，单位为克(g);. ( 1 ) F 一一各脂肪酸甲醋转化为脂肪酸的换算系数，其中:-亚麻酸甲醋转
11、化为r亚麻酸的转换系数为0.9520; EPA甲醋转化为EPA脂肪酸的转换系数为0.9557;DPA甲醋转化为DPA脂肪酸的转换系数为0.9592; DHA甲醋转化为DHA脂肪酸的转换系数为0.9590; 100 一一单位转换;1 000一一单位转换。3 GB 28404-2012 计算结果以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。8 其他当试样量为0.5g，定容体积为25mL，各脂肪酸的定量限分别为-亚麻酸0.010g/100 g , EPA 0.018 g/100 g ,DPA 0
12、.024 g/100 g ,DHA 0.018 g/100 go 4 GB 28404-2012 附录A脂肪酸Zli旨型油类制晶的物理鉴别称取1g样品，加入1.0 mL元水乙醇，于涡旋混合器(2000 r/min)混匀30s，静置，观察油在乙醇中的溶解情况。如果油样不溶于乙醇，出现明显的油和乙醇分层的现象，则判断此产品为脂肪酸甘油酶型油类制品，可采用本标准进行分析;若静置后，看不见油状液滴，溶解完全且溶液清澈透明，可判断此产品为脂肪酸乙醋型油类制品，不能使用本标准进行分析。5 GB 28404-2012 附录B标准溶波和试样溶灌典型气相色谱图B.1 -亚麻酸甲醋、EPA甲醋、DPA甲醋、DHA
13、甲醋的标准溶液色谱图，见图B.l。6 pA 450 400 350 300 250 200 150 100 50 1-一-亚麻酸甲醋;2-EPA甲醋;3DPA甲醋54-DHA甲醋。2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 min 图B.1 亚麻酸甲醋、EPA甲醋、DPA甲醋、DHA甲醋标准溶2蓝色谱图GB 28404-2012 B.2 含有-亚麻酸甲醋、EPA甲醋、DPA甲醋、DHA甲醋的试样溶液色谱图，见图B.20pA 450 400 350 300 250 200 150 100 50 句。1一-a-亚麻酸甲醋;2-EPA甲酶z3一-DPA甲醋;4一一DHA甲醋。2.5 2
14、 4 1J 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 mm 图B.2含有任亚麻酸甲醋、EPA甲醋、DPA甲醋、DHA甲醋的试样溶液色谱图7 NFON|吝叮N菌。国华人民共和国家标准食品安全国家标准中保健食品中-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六蜡酸的测定GB 28404-2012 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)非网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张O.75 字数12千字2012年7月第一次印刷开本880X12301/16 2012年7月第一版* 书号:155066. 1-45333定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107GB 28404-2012 打印日期:2012年7月24日F002
