1、ICS 67120B 45中华人民共和国国家标准农业部1163号公告一22009动物性食品中林可霉素和大观霉素残留检测气相色谱法Gas chromatographic method for determination of Lincomycinand Spectinomycin residues in animal products20090206发布 2009-0301实施中华人民共和国农业部发布刖 肓农业部1 163号公告2-2009本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：华中农业大学。本标准主要起草人：袁宗辉、于刚、陶燕飞、陈冬梅、王玉莲、黄玲
2、利、彭大鹏、戴梦红、刘振利。动物性食品中林可霉素和大观霉素残留检测气相色谱法1范围本标准规定了动物源性食品中林可霉素和大观霉素残留检测的制样和气相色谱测定方法。本标准适用于猪肾脏、猪肌肉、牛肾脏、牛肌肉、鸡胸肌、鸡肾脏、鸡蛋、牛奶中林可霉素和大观霉素单个或多个残留量的定量测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。6BT 6682分析实验室用水规格和试验方法。3制样
3、31样品的制备取适量新鲜或冷藏的空白或供试组织，绞碎并使均匀。32样品的保存一20以下贮存备用。4测定方法41方法提要或原理试料用磷酸缓冲液提取，利用离子对原理反相SPE柱净化，BSTFA衍生后用GC NPD测定。42试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂。水为符合GBT 6682规定的一级水。421盐酸林可霉素标准品(C；。H。tNtOsSHCl)，含量99。4 22硫酸大观霉素标准品(c。HzNzO，HzSOt)，含量98。4 2 3 N，0一双(三甲基硅烷基)i氟乙酰胺(BsTFA，N，Obis(trimethylsily)trifluoroacetarnide)。42 4
4、 Waters oasis HLB SPE柱(60 mg3 mL)或相当者。425甲醇。4 26乙腈：色谱纯。42 7正己烷：色谱纯。4 2 8磷酸二氢钾：优级纯。4 2 9磷酸：优级纯。4210氢氧化钾：优级纯。4 2 11三氯乙酸：优级纯。4 2 12十二烷基磺酸钠：色谱纯。1农业部1 163号公告一220094213乙酸：优级纯。4214 40氢氧化钾溶液：称取氢氧化钾40 g，加水溶解并稀释至100 mL。4215 10氢氧化钾溶液：称取氢氧化钾10 g，加水溶解并稀释至100 mL。4 216 1 toolL的盐酸：量取浓盐酸9 mL，加水稀释至100 mL。4 217提取液：称取磷
5、酸二氢钾136 g，加水溶解并稀释至1 000 mL，磷酸调节pH至40，加人三氯乙酸309。4 218十二烷基磺酸钠溶液：称取十二烷基磺酸钠278 g，加水溶解并稀释至50 mL。4219十二烷基磺酸钠缓冲液：称取十二烷基磺酸钠278 g，用水溶解，加入乙酸1 mL，并稀释至500mL。4 220标准贮备液：称取林可霉素对照品约10 mg(以纯品计算)于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解、定容，制成10 mgmL的标准贮备液。称取大观霉素对照品约10 rag(以纯品计算)于10 mL容量瓶中，用超纯水溶解、定容，制成10 mgmL的标准贮备液。配制完毕后移至10 mL聚四氟乙烯管中储存。以上TC
6、8避光保存，有效期6个月。4 2 21标准工作液：准确量取林可霉素和大观霉素标准贮备液适量，用甲醇稀释成适宜浓度的标准工作液，2。C8避光保存，有效期1周。43仪器和设备431气相色谱仪：配氮磷检测器。4 3 2分析天平：感量0000 01 g，感量001 g。4 3 3离心机。434电热恒温水浴锅。4 35旋涡混合器。4 36组织匀浆机。4 4测定步骤441试料的制备试料的制备包括：取混合均匀后的供试样品，作为供试试料；取混合均匀后的空白样品，作为空白试料。442提取称取试料(2005)g于50 mI。聚四氟乙烯离心管中，加提取液15 mL。漩涡混匀，摇床振荡30 min，5 000 rmi
7、n离心10 min。取上清液，残渣用提取液10 mL重复提取一次。合并上清液，5 000 rrain离心15 rain。水层(用40、10氢氧化钾和1 toolL盐酸)调节pH到58i02。加十二烷基磺酸钠溶液2 mL，漩涡混匀后静置15 rain，备用。牛奶样品的提取：量取试料(2005)mL置于50 mL聚四氟乙烯离心管中，加提取液10 mI。漩涡混匀，摇床振荡30mln，5 000 rmln离心10rain。取上清液，残渣用提取液10mL重复提取一次。合并上清液，加正己烷5 mL，5 000 rrain离心15 rain，弃有机层。提取液调节pH至5802。加十二烷基磺酸钠溶液2 mL，
8、漩涡混匀后静置15 rain，备用。4 4 3净化固相萃取柱依次用甲醇、水、十二烷基磺酸钠缓冲液各3 mL预洗，取备用液过柱，用水3 mI。淋洗2次，甲醇4mL洗脱，收集洗脱液，水浴40。C下氮气吹干至约100”L左右时取出，室温下吹干。加500”I雉烷化试剂(BSTFA)和100pL乙腈，涡旋混合1rain，密封，75恒温箱中，衍生反应1 h；于室温2下氮气吹干I由10mI。正己烷，涡旋混合2min，为试样溶液，供GC NPD分析。44 4标准曲线的制备分别精密量取适量标准贮备液，制成混合标准溶液，再用甲醇稀释成其中林可霉素浓度为20 000 ggL、i0 000“gI。、5 000 ugL
9、、1 000 ttgL、500 ugL、100 ugL、50 ugL，大观霉素为20 000ugL、10 000 pgL、5 000 ugI。、1 000ugL、500ugL、100ugL、5099L的工作液。按照衍生化反应步骤得到系列衍生化产物，供气相色谱分析，将测得的峰面积与相对应浓度绘制标准曲线。4 4 5测定4 4 51气相色谱条件a)色谱柱：HP 5，300mX 320 pmX025“m。b)进样口温度：280。c)进样方式：不分流。d)进样体积：1 tzL。e)模式：恒流。f)载气：氮气(99999)。g)柱流速：1 mLmin。h)柱温升温程序见表1：表1柱温升温程序起始温度 终
10、止温度 升温速率 保持时间 总时间min 131111150 150 20 20150 300 20 10 195i)检测器温度：325。j)辅助气：氢气3 mLmin，空气60 mLmin。k)尾吹气：氮气12 mLmin。4 4 5 2气相色谱测定取适量试样溶液和相应的标准溶液，做单点或多点校准，按外标法，以峰面积积分值定量，标准工作液及试样液中林可霉素和大观霉素的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。在上述色谱条件下，标准溶液和试样的液相色谱图参见附录A。4 4 6空白实验除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。4 5结果计算与表述试料中林可霉素和(或)大观霉素的残留量(ugL或
11、ugkg)按式(1)计算： x一筹(1)式中：X试料中林可霉素和(或)大观霉素残留量，单位为微克每千克或微克每升(ttgkg或“gL)；A试样溶液中林可霉素和(或)大观霉素的峰面积；AS-一标准工作液中林可霉素和(或)大观霉素的峰面积；G标准T作液中林可霉素和(或)大观霉素的浓度，单位为纳克每毫升(ngmI，)；V溶解残余物所得试样溶液体积，单位为毫升(mI)；W样品质量，单位为克或毫升(g或mL)。3农业部1 163号公告一22009注：计算结果需将空白值扣除。5检测方法灵敏度、准确度、精密度51灵敏度在猪、牛、鸡的肌肉和肾脏中袜可霉素的定量限为30弘gkg，在鸡蛋、牛奶中袜可霉素的定量限为
12、25 ugkg；在猪、牛、鸡的肌肉和肾脏、鸡蛋、牛奶中大观霉素的定量限为40”gkg。52准确度本方法在样品中添加药物浓度为30“gkg100-gkg的回收率为70110，添加药物浓度100,gkg的回收率为80110。53精密度本方法在组织中添加药物浓度为30 ogkg100 pgkg的变异系数cvzt，添加100,gkg1 000 pgkg的变异系数CV17；1 ooo pgkg3 000 ogkg的变异系数CV11。附录A(资料性附录)标准溶液和试样的液相色谱图农业部1 163号公告2-2009图A 1 林可霉素和大观霉素浓度均为50肛gL的标准溶液色谱图图A2猪空白肾脏和添加药物(林可
13、霉素30l嘻kg、大观霉素40彬kg)图谱图A 3空白牛奶和牛奶添加药物(林可霉素25 IlgL、大观霉素4019L)图谱图A 4空白鸡蛋和鸡蛋添加药物(林可霉素25 j,gkg、大观霉素40暇l【g)色谱图图A 5空白猪肌肉和添加药物(林可霉素30 pgkg、大观霉素40 pekg)色谱图图A 6空白猪肾脏和添加药物(林可霉素30 pgl【g、大观霉素40 ltgkg)色谱图图A 7空白牛肌肉和添加药物(林可霉素30 pgkg、大观霉素40 tw,kg)色谱图农业部1 163号公告-2-2009图A 8空白牛肾脏和添加药物(林可霉素30 pgkg、大观霉素40州l【g)色谱图图A9空白鸡肌肉和添加药物(林可霉素30 w,kg、大观霉素40心r,kg)色谱图图A 10空白鸡肾脏和添加药物(林可霉素30 II；r,kg、大观霉素40 pgl【g)色谱图
