1、ICS 67050X 04 a雪中华人民共和国国家标准GBT 22964-2008河豚鱼、鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素、交沙霉素残留量的测定液相色谱一串联质谱法Determination of lincomycin，oleandomycin，erythromycin，tilmicosin，tylosin，spiramycin，kitasamycin and josamycinresidues in fugu and eeILCMSMS method2008-12-31发布 2009050 1实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局岩者中国国家标准化
2、管理委员会厘111刖 昌本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王飞、王海洋、曹彦忠、贾光群、张进杰、石玉秋、庞国芳。GBT 22964-20081范围河豚鱼、鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素、交沙霉素残留量的测定液相色谱一串联质谱法GBT 22964-2008本标准规定了河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红
3、霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉索和交沙霉素残留量的测定。本标准的方法检出限：河豚鱼中的林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素均为20 pgkg。鳗鱼中的林可霉素、红霉素、泰乐菌素、吉他霉素均为2o pgkg，螺旋霉素、竹桃霉素、交沙霉素、替米考星均为50 pgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 637
4、91 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分：总则与定义(Gt3T 637912004，ISO 57251：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 63792 2004，ISO 57252：1994，IDT)6BT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD)3原理河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉索和交沙霉素的残留用Tris缓冲溶液提取后，经Oasis HLB固相萃取柱”净化，甲醇洗
5、脱，洗脱液浓缩定容后，液相色谱一串联质谱法测定，内标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯。41 水：GBT 6682，一级。42甲醇：色谱纯。43乙酸铵。44乙腈：色谱纯。45盐酸。46三羟甲基氨基甲烷(tris)：C。H-，NO。1)Oasis HLB周相萃取柱是waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。1GBT 22964-200847氯化钙：CaCl：2HzO。48 甲醇溶液：2+3。400 mL甲醇(42)与600 mL水混合。49 001 molL乙酸铵溶液：0
6、77 g乙酸铵(43)溶解于水中，定容于1 000 mL容量瓶中。410定容液：001 molL乙酸铵溶液(49)4-乙腈(44)(174-3)。411 tris溶液：称取120 g三羟甲基氨基甲烷(46)、735 g氯化钙(47)溶解于1000 mL水中，用盐酸(45)调节pH值为9。412标准物质：林可霉素(CAS：7179499)、竹桃霉素(CAS：7060744)、红霉素(CAS：59319 72一I)、替米考星(CAS：10805054一o)、泰乐菌素(CAS：74610552)、螺旋霉素(CAS：8025818)、吉他霉素(CAS：1392-218)、交沙霉素(CAS：168462
7、45)和内标物质罗红霉素(CAS：80214831)，纯度95。413标准储备溶液I：10mgmL。依次准确称取每种标准物质(412)适量，分别放人相应的10mL容量瓶中，尾甲醇溶解并定容至刻度，混匀。4保存。414标准储备溶液：100 pgmL。依次吸取01 mL各标准储备溶液I(413)，分别放人相应的10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。4保存。415标准工作溶液：20LgmL。依次吸取20 mL混合标准储备溶液(414)，分别放人相应的10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。416内标储备溶液：10 mgmL。准确称取100 mg罗红霉素(412)于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻
8、度，混匀。4保存。417中间浓度内标溶液：10o pgmL。吸取o1 mL内标储备溶液50 20K50 10K20 K10允许最大偏差 士20 土25 土30 士50742定量测定在仪器的最佳工作条件下，用基质标准混合工作溶液(419)分别进样，以各标准溶液中被测组分峰4GBT 22964-2008面积与内标物峰面积的比值为纵坐标，以各标准溶液被测组分浓度(ngmL)与内标物浓度的比值为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。用基质标准混合工作溶液的工作曲线对样品进行定量，应使样品溶液中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的响应值在仪器测
9、定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的参考保留时间见表4。表4林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素参考保留时间化合物名称 保留时间rain林可霉素 696竹桃霉素 736红霉素 806替米考星 836泰乐菌素 848螺旋霉素 867吉他霉素 883交沙霉素 914林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的标准物质多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图A1、图A2、图A3、图A4、图A5、图A6、图A7、图A8。林可霉素、竹桃霉素、红
10、霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B1。75平行试验按试样步骤，对同一试样进行平行试验测定。76空白试验不称取样品，其余均按试样步骤71和72进行。8结果计算林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的测试结果按式(1)计算：x一是乏AXil筹揣(1)式中：x试样中被测物残留量，单位为微克每千克(pgkg)；矗基质标准工作溶液中被测物的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；A试样溶液中被测物的色谱峰面积A，基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积；Ci一一试样溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升(n
11、gmL)；“基质标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；A。基质标准工作溶液中内标物的色谱峰面积；A试样溶液中内标物的色谱峰面积；V样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；5GBT 22964-2008m试样溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95的可信度来计算。92重复性在重复性试验的条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉索、吉他霉素和交沙霉素添加
12、浓度范围及重复性方程见表5。表5林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素添加浓度范围及重复性和再现性方程 单位为微克每千克化合物名称 添加浓度范围 重复性限r 再现性限R林可霉素 20500 lgr=1 031 9 19mI019 9 IgR=1187 9 lgm一0678 2竹桃霉素 2050O lgr一0733 719m 0 783 5 lgR=0822 5 lgm 0440 2红霉素 20-500 Igr=0996 2【gm 1013 6 tgR=0939 9 lgm一0479 5替米考星 2 0500 lgr-1292 5 lgm一1234 1 lg
13、R=】093 1 lgm 0576 0泰乐菌素 20500 lgr=0890 5 lgm一1010 4 lgR=0982 8 lgm一0599 4螺旋霉素 2 0500 lgr=1007 6 lgm一1106 7 lgR一0896 9 lgm一0438 9吉他霉索 2050 0 lgr-0940 3 lgm 1007 7 lgR=0977 1 lgm 0543 4交沙霉素 2050 0 lgr=0816 3gm一0936 2 igR=0 907 3 lgm一0503 7注：拼为两次测定值的算术平均值。如果差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。93再现性在再现性试验的条
14、件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，河豚鱼和鳗鱼中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素的添加浓度范围及再现性方程见表5。附录A(资料性附录)标准物质多反应监测(MRM)色谱图GBT 22964-2008林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素标准物质多反应监测(MRM)色谱图，分别见图A1、图A2、图A3、图A4、图A5、图A6、图A7、图A8。响应值600 e45 oo e 43 oo e42 oo e40 0 邑，。LJ一。j一一圈A1 林可霉素标准物质多反应监测(MRM)色谱图l。1 图A2竹
15、桃霉素标准物质多反应监测(MRM)色谱图uu【图A3红霉素素标准物质多反应监测(MRM)色谱图图A4替米考星标准物质多反应监测(MRM)色谱图：一。4440糠i；。靴32iGBT 22964-200884oo e43oo e42oo e41 oo e40 018L1 2 3 4 5 6 7 8 9 lO 11 12 13 14 15 tmin图A5泰乐菌素标准物质多反应监测(MRM)色谱图8一1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 lI 12 13 14 15折nIn图A6螺旋霉素标准物质多反应监测(MRM)色谱图：【图A7吉他霉素标准物质多反应监测(MRM)色谱图4【图A8交沙霉素标准物质
16、多反应监测(MRM)色谱图44444急裟采鬣啦E量ti&i鸥曲鸥略圯日巾黧烹烹。“唯o鲋&40zi雌叭叭哺最t附录B(资料性附录)回收率GBT 22964-2008本方法中林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B1。表B1 林可霉素、竹桃霉素、红霉素、替米考星、泰乐菌素、螺旋霉素、吉他霉素和交沙霉素添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称 添加浓度(Pgkg) 平均回收率2o 91o40 939林可霉素80 92520o 87220 106 640 1031竹桃霉素80 903200 9122 0 9814 0 930红霉素80 8j320 0 93420 8684 0 942替米考星8 0 868200 88620 85840 889泰乐菌素8 0 887200 9192 0 96240 878螺旋霉素80 92 4200 94420 96440 991吉他霉素80 849200 83420 89640 891交沙霉素80 836200 894
