1、ICS 67.200. 10 X 14 SB 中华人民.II工./、和国国家标准GB/T 24893-2010/ISO 15753 :2006 动植物油脂多环芳短的测定Animal and vegetable fats and oils一Determination of polycyclic aromatic hydrocarbons (ISO 15753: 2006 , IDT) 2010-06-30发布2011-01-01实施数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会发布中华人民共和国国家标准动檀物油脂多环芳短的测定CB/T 24893-2010/1S0 157
2、53: 2006 晤中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销峰开本880X12301/16 印张1.5字数39千字2010年8月第一版2010年8月第一次印刷9峰书号:155066 1-40221 定价24.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 24893-2010/ISO 15753:2006 目。吕本标准等同采用国际标准ISO15753:2006(动植物油脂多环芳煌的测定)(英文版)。为了便于使用，本标准对IS
3、O15753:2006进行了下列编辑性修改:一一本国际标准改为本标准;一一一删除了国际标准的前言;规范性引用文件中用现行国家标准GB/T15687-2008(动植物油脂试样的制备代替ISO 661: 2003 Animal and vegetable fats and oils-Preparation of test sample; 一一第7章及参考文献中用现行国家标准GB/T5524-2008(动植物油脂抨样代替ISO5555: 2001 Animal and vegetable fats and oils-Sampling; 一一用小数点代替国际标准中作为小数点的逗号，;一一对公式进行编号
4、。本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由国家粮食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位:南京财经大学。本标准参与起草单位:上海交通大学、湖北省粮油食品质量监测站。本标准主要起草人:袁建、汪海峰、鞠兴荣、杨晓蓉、吴时敏、熊宁。I GB/T 24893-201 O/ISO 15753: 2006 动植物油脂多环芳短的测定1 范围本标准规定了采用高效液相色谱法测定动植物油脂中15种多环芳煌的相关术语和定义、原理、试剂、仪器设备、一般动植物油脂的前处理方法、椰子油和含短链脂肪酸植物油的前处理方法、高效液相色谱分析、结果表示和精密度。本标准适用于一般动植物油脂以及椰子油和
5、含短链脂肪酸的植物油中多环芳短的测定。本标准不适用于茶、革和药等挥发性较强的组分定量分析以及棕榈油和橄榄果渣油中多环芳煌的测定。荧惠和苯并Cg.h.i)花的定量检测限为O.3g/kg。苟并(1.2.3-c. d)茸的定量检测限为1g/问。其余多环芳煌的定量检测限均为0.2g/峙。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 15687 动植物油脂试样的制备CGB
6、/T15687-2008.1S0 661:2003.IDT) 3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1 多环芳是polycyclic aromatic hydrocarbon. P AH 包含两个或两个以上稠合芳香腔环的化合物。按本标准规定条件测定其含量，以毫克每千克Cmg/kg)计。注:通常多环芳短可分为含2个4个芳香环的轻多环芳经和5个及5个以上芳香环的重多环芳炬。示例:轻多环芳;医包括:茶(CASRN91-20-3J).革(CASRN83-32-9J).蓝烯(CASRN208-96-8J).药(CASRN86-73 7J).惠(CASRN120-12-7J).菲(CASRN85-
7、01-8J).荧葱(CASRN206-44-0J) .茄(CASRN218-01-9 J) .苯并(a)葱(CAS RN56-55-3J).花(CASRN129-00-0J) 0 重多环芳经包括:苯并(a)花(CASRN50-32-8J).苯并(b)荧直(CASRN205-99-2J).苯并(k)荧惠(CASRN207 08-9J) .苯并址.h.。花(CASRN191-24-2J).二苯并(，的惠(CASRN53-70-3J).苟并(1.2. 3-c. d)花(CASRN193-39-5J)。4 原理试样中的多环芳:怪用乙腊-丙酣混合液萃取，然后依次用CI8反相萃取柱和硅酸镜载体键合固定相柱
8、净化，通过高效液相色谱CHPLC)分离，测量在不同激发波长和发射波长处的荧光强度，测定各种多环芳怪的含量。5 试剂警告:应注意危险晶操作规则，操作时应遵循技术上、组织上和个人的安全措施。除非另有说明，仅使用分析纯试剂。1 GB/T 24893-2010/180 15753: 2006 所用溶剂在使用前应检查其质量:将潜剂蒸发浓缩约1000倍(300mL到300L)后，用HPLC分析，色谱图的多环芳娃保留时间处不得出现色谱峰。5. 1 甲醇:超纯(ultraresi-analysed)级lu5.2 正己烧:色谱纯1)。5.3 乙睛:色谱纯lu5.4 丙酣:色谱纯1)。5.5 二氯甲:皖:色谱纯I
9、U5.6 甲苯:色谱纯IU5. 7 水:色谱纯1)。5.8 四氢吱喃:色谱纯1)。5.9 混合溶剂1.乙腊-丙酣氓合液，6+40每个样品的用量:一般方法为41mL，测定椰子油的特定方法为36mLo 5.10 混合榕剂2:乙腊-丙酣渥合液，8十2。每个样品的用量:测定椰子油的特定方法为2X11mLo 5. 11 t昆合溶剂3:正己烧-二氯甲:院提合液，3+10每个样品的用量:一般方法为7mL，测定椰子油的特定方法为2X7 mLo 5.12 四氢吱喃-甲醇混合液:5十505. 13 16种多环芳腔标准甲苯溶液2): 100g/mL，秦、蓝烯、菇、药、菲、蓝、荧惠、蓝、苯并(a)惠、窟、苯并(b)荧
10、惠、苯并(k)荣;臣、苯并()蓝、二苯并(，h)葱、苯并(g，h，i)花、苟并(1，2，c，d)击。在一20.C 下保存。使用前，将标准洛被取出并平衡温度至室温，平衡时间至少1h以上。注:革烯没有荧光性，因此不能用这些方法测定。5.14 标准储备榕破:200ng/mL(200g/L)。用250L注射器(6.11)吸取100L标准榕液(5.13)，注入到50mL容量瓶(6.20)中，用乙腊(5. 3)稀释至刻度。5.15 标准工作溶液50ng/mL(50g/L)。用250L注射器(6.11)吸取250L标准储备陪液(5.14)，注入到750.).L四氢吱喃-甲醇混合液(5. 12)或750L乙腊
11、(5.3)中。5.16 C18键合固定相萃取桂3):固定相2g，体积12mL。5.17 硅酸镜载体键合固定相萃取柱飞固定相500mg，体积3mL。5. 18 氮气:压力调节至34.S kPa(5 psi，约1.5 L/min) 0 6 仪器设备实验室常规仪器，以及下列特殊的仪器。因塑料制品可能含有多环芳:臣，一般应使用玻璃容器，可使用一次性的玻璃管。6.1 离心机:转速二三4000 r/min，能放置100mL和10mL离心管。6.2 带二元梯度洗脱的HPLC系统:一一配有1L的溶剂储液器，流动相在线过滤器;1) 可从Baker公司购得。给出这一信息仅为了方便本标准的使用者，并不代表本标准对这
12、些产品的指定认可。能够获得相同结果的等效产品同样可以使用。2) 美国环保署(EPA)优先监测的多环芳炬，可从Promochem公司购得。3) 可从Varian公司购得。给出这一信息仅为了方便本标准的使用者，并不代表本标准对这些产品的指定认可。能够获得相同结果的等效产品同样可以使用。2 GB/T 24893-201 O/ISO 15753: 2006 泵;一一一自动进样器;一一柱温可调节至25.C; 一一对各种激发/发射波长可全过程扫描的荧光检测器;一一计算机辅助数据采集和处理系统。6.3 Cl8反相键合固定相色谱柱4):长250mm，内径4.6mm，粒径5m，适于多环芳:怪的分析。6.4 涡旋
13、混合器。6.5 氮吹仪5):10 mL管(可选)，或水浴(6.6)。建议操作条件:一一水浴温度:35 .C; 一氮气压力:34.5 kPa. 6.6 水浴:控温35.C。6. 7 天平:感量0.1mg。6.8 离心管:容量100mL(每个样品一个)。6.9 锥形离心管:容量11mL(每个样品三个)，具聚四氟乙烯PTFE隔膜垫的螺旋封帽(每个样品一个)。6.10 量筒。6. 11 微量注射器:250L。6.12 注射器:1000L。6.13 刻度吸量管:5mL。6.14 注射器:5mL，配有与固相萃取(SPE)柱匹配的封帽。6.15 自动进样器用瓶。6. 16 微量瓶:250L.6. 17 超声
14、披水浴:水温不高于40.C。6. 18 巴斯德移液管(巴氏吸管):顶端加脱脂棉。6. 19 固定架6):由支架座和夹子构成，以固定固相萃取柱;或者配置一个自动的固相萃取工作站。注:根据使用的回相萃取样品处理站的具体情况，萃取方法可能需要调整(如时间、压力和体积)。6.20 容量瓶:50mL. 7 抨样所取样品应具有代表性，且在运输和储藏的过程中元损坏或变质。本标准不规定抨样方法，推荐采用GB/T5524规定的方法。8 试样制备接GB/T15687进行。取样前，液体试样应放置于室温下，并经磁力搅拌器?昆匀。固体试样应全部熔化或将部分核心样品熔化并均质。的可使用Vydac公司的编号为201TP54
15、的色谱柱。给出这一信息仅是为了方便本标准的使用者，并不代表对这些产品的指定认可。能够获得相同结果的等效产品同样可以使用。5) 可使用Zymark公司的TurbovapLV蒸发器。给出这一信息仅是为了方便本标准的使用者，并不代表对这些产品的指定认可。能够获得相同结果的等效产品同样可以使用。的可使用Zymark公司的RapidTrace。给出这一信息仅是为了方便本标准的使用者，并不代表对这些产品的指定认可。能够获得相同结果的等效产品同样可以使用。3 GB/T 24893-201 O/ISO 15753: 2006 9 油脂中多环芳短(PAH)的测定步骤一一-一般前处理方法9. 1 一般要求由于油脂
16、含有短链和长链脂肪酸，当环境温度高于20.C时，短链脂肪酸的溶解度会增加。为获得可重复的结果，实验室的环境温度应控制在20.C.这也是萃取椰子油(或含短链脂肪酸的植物油)中多环芳煌的一个重要条件。测定前，应用正己烧(5.2)将所有容器冲洗三次。为计算萃取的回收率(9.3).每个样品系列都应进行空白试验(9.2).标准溶液和样品的萃取条件应完全一致。回收率应在70%110%之间。平均回收率参见表A.1。定量分析时，两份试样应分别进行萃取和测定，以两份试样测定结果的平均值作为最后结果。整个分析不可能在一天完成。样品萃取液应在-18.C的冷冻条件下储存过夜。第一天:按图A.1所示完成步骤1.步骤2和
17、步骤3中的C18固相萃取柱上净化过程。第二天:完成步骤3中的在硅酸镜柱上净化过程并准备样品分析用的HPLC系统(参见图A.1)。第三天后:进行样品分析参见表八.2)。9.2 空白试验为了确证溶剂和固相萃取柱不存在污染，应先用空白样品(潜剂?昆合液，不加油样)对固相萃取柱进行净化测试(按照9.5、立6和第11章进行)。得到的色谱图上应没有影响待测物的色谱峰。如果色谱图上含有干扰物，应确定干扰物的来源并加以消除。由于每次空白测定值通常不一致，所以不能用来校正样品值。9.3 回收率的测定(无基体)固相萃取柱的萃取效率用标准溶液的测试来验证。用250L注射器(6.11)吸取250L标准工作溶液(5.1
18、日，注入1750L混合溶剂1(5.的中，转移至C18固相萃取柱后按照9.5、9.6和第11章进行试验。警告:用氯气流(见9.5.6)除去溶剂时.不可吹干，瓶内应保留约50L溶液，以免挥发性的多环芳是损失。9.4 萃取(液-灌革取9.4.1 分离操作流程参见闻A.1.9.4.2 称取试样约2.5g(精确至1mg)于100mL离心管(6.8)中，加入10mL混合溶剂1(5.9) 9.4.3 用涡旋混合器(半速)振荡离心管30s后，将离心管放入超声披水洛(6.17)中保持5min。9.4.4 再将离心管放入离心机(6.1).在4000r/min转速下离心5mn. 9.4.5 用巴斯德移液管(6.18
19、)小心移取离心管内上层溶液，并转移至己称量的锥形管(6.9)中。9.4.6 在35.C水浴(6.6)或氮吹仪上(6.5)通氨气疏(5.18)蒸发锥形管中的溶剂30min40 min. 9.4.7 再用10mL混合溶剂1(5.的按9.4. 39. 4. 5重复提取二次，萃取液于同一锥形管中。在35 .C水浴(6.6)或氮吹仪(6.5)上用氮气流(5.18)浓缩萃取液。萃取物约200mg800 mg。如萃取物质量大于800mg.一般前处理方法(第9章)是不适用的，应采用适用椰子油的前处理方法(第10章)。9.5 C1B键合固相革取柱净化(固，液革取)9.5.1 固相萃取柱活化:将固相萃取柱(5.1
20、6)放在固定架(6.19)上。先用甲醇(5.1)润洗2次，每次12 mL.再用乙睛(5.3)润洗2次，每次12mL。溶剂在大气压下流出。9.5.2 将另一己称量的锥形管(6.9)放在固相萃取柱(5.16)下面。9.5.3 用注射器(6.12)或刻度吸量管(6.13)吸取2mL混合溶剂1(5.9)加入到装有萃取物的锥形管(9.4.6)中。将锥形管置于涡旋混合器(6.4)上振荡15s.然后离心30S.用巴斯德移液管(6.18)将上层榕液转至固相萃取柱(5.16)中。重复上述操作2次。合并收集从柱中洗脱出的溶剂和淋洗溶剂。GB/T 24893-2010/ISO 15753 :2006 9.5.4 将
21、5mL 1昆合榕剂1(5.9)从固相萃取柱的顶端倒人，洗脱液在大气压下流出。9.5.5 用注射器(6.14)将空气压人固相萃取柱，以洗脱剩余的潜剂和任何可能滞留在固定相中的多环芳炬。9.5.6 在35.C水浴(6.6)或氮吹仪(6.5)上用氯气流除去溶剂。萃取物应不超过50mg. 9.5.7 用注射器(6.12)吸取1mL正己烧(5.2)，稀释残留物。密封锥形管，储存于18 .C下备用。9.6 硅酸镶键合固相萃取柱净化(固-谊革取)9.6.1 萃取液(9.5.7)使用前应在室温下放置平衡1h以上。9.6.2 固相萃取柱活化:将固相萃取柱(5.17)放在固定架(6.19)上。先用二氯甲:皖(5.
22、5)润洗5次，每次3mL;再用正己烧(5.2)润洗4次，每次3mL。9.6.3 将另一已称量的锥形管(6.9)放在固相萃取柱(5.17)下面。9.6.4 用注射器(6.12)或刻度吸量管(6.13)吸取1mL 7昆合榕剂3(5.11)加入到装有萃取液的锥形管(9.6.1)中。将锥形管置于涡旋1昆合器(6.4)上振摇15s，然后用巴斯德移液管(6.18)将溶液转移至固相萃取柱(5.17)中。再用混合溶剂3(5.11)冲洗锥形管二次，每次2mL，将洗涤液同样转移至固相萃取柱上。合并收集从柱中洗脱出的溶剂和淋洗溶剂。为防止交叉污染，要注意避免移液管和锥形管接触。9.6.5 用4mL混合榕剂3(5.1
23、1)淋洗固相萃取柱。用注射器(6.14)将空气压入固相萃取柱内，以洗脱滞留溶剂。9.6.6 在35.C水浴(6.6)或氮吹仪(6.5)上，用氮气流(5.18)浓缩溶液至约1mL(需10min 15 min)。加入约0.5mL甲苯(5.6) (保持液)，继续蒸发至约50L.溶剂不可完全除去。9.6.7 通过称量锥形管中萃取物的质量和甲苯的密度计算加入溶剂甲醇-四氢吱喃(5.12)或乙睛(5.3)J的体积，加入计算量(Vadd)的需剂使总体积为250L。加人溶剂的体积(Vadd)按式(1)计算:Vadd=250-7 . ( 1 ) 式中:Vadd一一加入的溶剂甲醇-四氢吱喃(5.12)或乙腊(5.
24、3)J体积，单位为微升(L);m 萃取物的质量，单位为毫克(mg); d一一甲苯的密度(0.8669 kg/m勺。9.6.8 将样品转移至微量瓶(6.16)中，微量瓶置于HPLC自动进样器瓶(6.15)内。10 油脂中多环芳短的测定步骤一一适用于椰子油的前处理方法10. 1 第一次萃取(液-擅革取)10. 1. 1 分离操作流程参见图A.2010. 1.2 称取约2g样品(精确至1mg)于10omL离心管(6.8创)中，加人1川omL t氓昆合溶?弗剂F网1(5.9)。1叩O.1. 3 离心管于涡旋?混昆合器(半速)中振荡3os后再将其放入超声波水浴(6.17)中保持5min 10. 1.4
25、再将离心管放入离心机(6.1)，在40Oo r旷/min丑转速下离心5min。10. 1. 5 用巴斯德移被管(6.18)小心移取上层溶液，并转移至锥形管中(6.9)。10. 1.6 在3臼5oC7.水k浴(刊6.6们)或氮吹仪(6.5盯)上通氮气流(5.18盯蒸发锥形管中的榕?弗剂F附3o mi旧in4omin 10. 1. 7 再用1川omL 1氓昆合挥潜￥?弗剂F时1(5. 9)重复萃取二次，萃取液于同一锥形管中o在3臼5.C水浴(6.6创)或氮吹仪(6.5)上用氮气流浓缩萃取液。10.2 第二次革取(渡-液革取)10.2. 1 用注射器(6.12)或刻度吸量管(6.13)吸取2mL 7
26、1昆合溶剂1(5.9)加入到装有萃取物的锥形管(10. 1. 7)中。将锥形管置于涡旋混合器(6.4)上振荡15s，离心30s。将萃取液均分成两等份，分别放GB/T 24893-201 O/ISO 15753: 2006 人两个已称量的锥形管(6.的中。为防止交叉污染，切勿使移液管和锥形管接触。10.2.2按照10.2. 1中的步骤重复萃取两次，萃取液同样均分成两等份，分别放入上述锥形管00.2. 1)中。10.2.3 在35.C水浴(6.6)或氮吹仪(6.5)上，用氮气流(5.18)浓缩两份萃取液。每份浓缩液中萃取物约为250mg. 10.3 C18键合固相萃取柱净化(固-液萃取)10.3.
27、 1 固相萃取柱活化:将两根固相萃取柱(5.16)放在固定架(6.19)上。先用甲醇(5.1)润洗2次，每次12mL，再用乙腊(5.3)润洗2次，每次12mL溶剂在大气压下流出。10.3.2 将一个己称量的锥形管(6.9)放在固相萃取柱(5.16)下面。10.3.3 用注射器(6.12)或刻度吸量管(6.13)吸取2mL混合溶剂2(5.10)加入到装有萃取物的锥形管00.2.3)中。将锥形管置于涡旋混合器(6.4)上振荡15s 0用巴斯德移液管(6.18)将每个管中的萃取液全部转入到对应的固相萃取柱(5.16)中。用混合溶剂2(5.10)冲洗锥形管两次，每次2mL，将洗涤液转移至相应的固相萃取
28、柱上。合并收集从柱中洗脱出的潜剂和淋洗溶剂。10.3.4 用5mL混合搭剂2(5.10)淋洗固相萃取柱(注意不要将空气压入固相萃取柱内)。10.3.5 在35oC水浴(6.6)或氮吹仪(6.5)上用氯气流(5.18)除去榕剂。萃取物约为50mg100 mg。10.3.6 用注射器(6.12)吸取1mL正己烧(5.2) ，稀释残留物。密封锥形管，储存于一18.C下待第二天使用。10.4 硅酸镜键合固相革取柱净化(圄-灌革取)10.4. 1 萃取液(10.3.6)使用前应在室温下放置平衡1h以上。10.4.2 固相萃取柱活化:将固相萃取柱(5.17)放在架子(6.19)上。先用二氧甲:皖(5.5)
29、润洗5次，每次3mL，再用正己烧(5.2)润洗4次，每次3mL。10.4.3 将己称量的锥形管(6.9)放在固相萃取柱(5.17)下面。10.4.4 用注射器(6.12)或刻度吸量管(6.13)吸取1mL混合溶剂3(5.11)加入到装有萃取液的锥形管中。将锥形管置于涡旋混合器(6.4)上振荡15S，然后用巴斯德移液管(6.18)将溶被转移至固相萃取柱(5.17)中。用混合熔剂3(5.11)冲洗锥形管二次，每次2mL，将洗涤漉转移至固相萃取柱上。合并收集从柱中洗脱出的榕剂和淋洗溶剂。10.4.5 用4mL混合溶剂3(5.11)淋洗固相萃取柱(注意不要将空气压人固相萃取柱内)。10.4.6 在35
30、.C水浴(6.6)或氮吹仪(6.5)上，用氮气流(5.18)浓缩溶液至约1mL(需10min 15 min)。合并两次萃取液于同一锥形管中(将一个锥形管中的萃取液转移至另一个锥形管中)。用正己;皖(5.2)润洗空的锥形管3次，每次1mL。用注射器(6.12)加入约0.5mL甲苯(保持液)(5.的，继续蒸发至约50Lo榕剂不可完全除去。10.4.7 通过称量锥形管中萃取物的质量和甲苯的密度计算加入溶剂【甲醇四氢吱喃(5.12)或乙睛(5.3)J的体积，加入计算量(Vadd)的溶剂使总体积为200L。加入溶剂的体积(Vadd)按式(2)计算:Vd=200-7 式中:Vadd-一一加入的溶剂甲醇四氢
31、吱喃(5.12)或乙腊(5.3)J体积，单位为微升(L); m-一一萃取物的质量，单位为毫克(mg); d一一甲苯的密度(0.8669 kg/m勺。10.4.8 将萃取物转移至微量瓶(6.16)中，微量瓶置于HPLC自动进样器瓶(6.15)内。. ( 2 ) G/T 24893一2010/ISO15753:2006 门高效液相色谱分析(HPLC)11. 1 操作条件流动相:混合溶剂A:乙睛，混合溶剂B:乙睛-7j(5十5)。流速:1.2 mL/min。进样量:20Lo柱温:25oC。表l列出了溶剂洗脱程序。梯度洗脱程序的条件应根据选用的色谱柱而调整。表1反相C1日柱的梯度洗脱程序时间/混合溶剂
32、成分A/混合溶剂成分B/口lln% % 。100 5 。100 27 60 40 36 100 。41 100 。43 。100 45 。100 11. 2 检测参数激发和发射波长会因不同仪器而有微小变化。为了测定最大激发和发射波长，使用16种多环芳:怪的标准工作溶液(5.15)进行测定，以获得每个化合物的谱图。操作如下:首先，在300nm550 nm间任意激发波长处扫描发射能量，确定最大发射波长(见表2)。然后，在200nm350 nm间扫描激发能量，并结合先前测定的发射波长结果，确定最大激发波长。对七组保留时间相近的化合物(见表2)中的每一组，选择一套尽可能接近每个化合物最大波长的激发/发
33、射波长。作为参照，表2列出了通过HP1100荧光计测量而选定的一些波长。表2测试方案组分时间/组激发波长/发射波长/口llnnm nm 蔡1 革。270 324 药菲2 12.6 248 375 惠3 荧葱16.4 280 462 琵4 苯并(a)惠18.05 270 385 商5 苯并(b)荧惠28.0 256 446 7 GB/T 24893-2010/ISO 15753 :2006 表2(续)组组分时间/激发波长/发射波长/口unnm n1 苯并(k)荧葱6 苯并(a)花31. 1 292 410 二苯并(a，的惠苯并址，h，。花7 苟并(1，2，3-c，的花38.0 274 507 在
34、上述条件下，得到了16种多环芳怪的标准溶液的色谱图，如图1所示。6 18 12 13川r.100% 140 120 100 80 60 40 20 1一一甲苯;2一一茶;3一一菇;4一一药;5一一菲;6一一惠;7一一荧惠;8花59一一苯并(a)惠;10-一窟;2 11. 3 试样和标准品的分析3 8 八i14 11 15 0% 11一一苯并(b)荧葱:12一一苯并(k)荧惠;13 苯并(a)花;14 二苯并句，h)惠;15 苯并怡，h，。花;16 苟并(1, 2 , 3-c , d)花;17 波长的改变;18一一混合溶剂A(乙腊h19一一混合溶剂B(乙腊水5+5)。图1标准工作溶液(5.1日的
35、色谱图试样和标准品应至少进样两次。同一试样两次进样峰面积的相对标准偏差不应超过5%。如果标准偏差超过5%，应将HPLC的条件优化后，再次对试样和标准品进样。进样次序应如下:a) 标准溶液;b) 标准溶液的萃取液;c) 试样。作为参照，表A.2给出了详细的进样次序。试样中多环芳煌的存在，是通过比较样品色谱图的保留时间和最相近参考样品色谱图的保留时间来确定的。图A.3是一个初榨橄榄油样品的色谱图。GB/T 24893-201 O/ISO 15753: 2006 11. 4 检验是否存在多环芳是的实验每个试样进样两次，一次记录每个化合物的发射光谱，另一次记录激发光谱。通过与参考谱图的比对来确认目标化
36、合物的存在。12 结果表示计算前先确认下列几项:一一空白样品质量;同一个试样两次进样的相对标准偏差(不应超过5%); 每个多环芳煌的回收率(表A.l)。采用外标法计算。样品中单个多环芳娃含量(c;)以微克/千克(g/kg)表示，按式。)计算:V一-m FW一my -s -A z-A一z flu . ( 3 ) 式中:Ai同一试样溶液中每个多环芳煌的峰面积(两次进样的平均值hA矿标准工作溶液中每个多环芳:怪的峰面积(两次进样的平均值); Cir一一标准工作溶液中每个多环芳煌的浓度，单位为微克每千克(g/kg);V 最终得到的萃取液的体积，单位为毫升(mL);m 试样质量，单位为克(g)。对于定量
37、分析，每个试样应萃取两次。每个多环芳短的含量都是两次测定结果的平均值，精确至O. 1g/kg。13 精密度13. 1 实验室间试验附录B详述了本标准精密度的实验室间比对测试结果。重复性限和再现性限的值用95%的置信区间表达。超出给定的检测浓度范围和多环芳是种类，这些值可能不适用。13.2 重复性在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测定结果的绝对差值超过表3中给出的重复性限(r)的情况不超过5%。表3重复性限单个多环芳:怪的浓度(c)/ (g/kg) 0-10 10-100 重复性限()/(g/kg)O. 37X c
38、0.12Xc+3.7 其中c是两次测试结果的平均值，以微克每千克(g/kg)表示。13.3 再现性在不同实验室，由不同的操作者使用不相同的设备，接相同的测试方法，对同一被测对象相互独立进行测试获得的两次独立测定结果的绝对差值超过表4中给出的再现性限(R)的情况不超过5%。表4再现性限单个多环芳短的浓度(c)/(g/kg) 。-1010-40 40-100 再现性限(R)/(g/kg)1. 1Xc 0.86Xc+1. 5 40 其中c是两次测试结果的平均值，以微克每千克(g/kg)表示。9 G/T 24893-2010/ISO 15753:2006 14 测试报告10 测试报告应详细说明:一一标
39、识样品的全部信息;一一本标准所涉及的测试方法;本标准没有具体说明的、或者被认为是可选性的，以及所有可能影响结果的操作细节;测定结果及表示单位;每个多环芳煌的回收率。GB/T 24893一2010/ISO15753:2006 附录A(资料性附录)回收率、流程图、色谱图和进样次序A.1 回收率见表A.l。表A.1油中多环芳娃的平均回收率化合物一般方法适用椰子泊的方法菲70% 70% 直70% 70% 荧草70% 70% 花70% 70% 苯并(a)惠70% 70% 窟70% 70% 苯并(b)荧惠70% 70% 苯并(的荧惠70% 70% 苯并(a)花70% 60% 二苯并(a，的惠70% 60%
40、 苯并(g，h，i)花60% 50% 苟并(1,2 , 3-c , d)花70% 50% A.2 流程图见图A.l、图A.2。11 GB/T 24893-201 O/ISO 15753: 2006 第1步第2步第3步12 多环芳经的预浓缩萃取3次:每次用10mL乙蜻丙酣(6+4)涡流振荡30s，超声水浴5min , 4000 r/min转速下离心5min 合并3次萃取液的上层溶液35.C下氮气流蒸发浓缩油脂残留物(200mg-800 mg) 油脂残留物中多环芳经的萃取萃取3次z每次用2mL乙睛丙酣(6+4)涡流振荡15s，离心30s 合并3次萃取液的上层溶液多环芳经的净化=两次固相萃取第一次净
41、化:C1B固相萃取柱(2g) 柱活化:24mL甲醇+24mL乙睛合并3次提取液并加入C1B固相萃取柱中淋洗液:5mL乙睛一丙圃(6+4)35 c下氯气流蒸发浓缩泊脂残留物(约50mg) 用1mL正己统稀释第二次净化z硅酸侯固相萃取柱(500mg) 柱活化:15mL二氯甲炕+12mL正己炕加入萃驭液(1mL正己皖)润洗样品管3次，每次用1mL正己炕一二氯甲皖(3+1) 淋洗液:4mL正己炕一二氯甲炕(3+1)35 c下氮气流蒸发浓缩至1mL B口入500L甲苯(保持液)35 c下氯气流蒸发浓缩至20L用四氢块喃-甲醇(5+5)或乙睛稀释最后体积为250L)四LC分离测得荧光强度图A.1分离步骤的
42、流程图:一般方法第1步第2步第3步GB/T 24893-2010/ISO 15753:2006 缩-浓预一的一泊经-K芳一环一多一13 第一次萃取:重复3次，每次用10mL乙睛一丙酣(6+的涡流振荡30s，超声水浴5min , 4000 r/min转速下离心5min35 c下氯气流蒸发浓缩油脂残留物(约1.5 g) 汹脂残留物中多环芳楚的提取第二次萃取z重复3次，每次用2mL乙睛一丙酣(6+4)旋涡振荡15g，离心30s合并3次萃取液的上层溶液并分成2等份35 .C下氮气流蒸发浓缩2份萃取液:PAHs十油脂残留物(约2X250mg) 用2mL乙睛-丙酣(8十2)稀释多环芳:怪的净化:2次固相萃
43、取第一次净化:2个C18固相萃取柱(2g) 柱活化:24mL甲醉十24mL乙脂将2份提取液加入两个固相小柱中润洗锥形管2次，每次用2mL乙腊-丙酣(8+2)淋洗液:5 mL乙睛丙翻(8+2)35.C下氮气流蒸发浓缩汹脂残留物(每份25mg50 mg) 用1mLi己去完稀释第二次净化:2个Florisil固相萃取柱(500mg) 拄活化:15mL二氯甲皖+12mL正己前将2份萃取液(1rnL正己炕)加入2个国相柱中润洗锥形管3次，每次用1mL正己炕一二氧甲统(3+1)淋洗液，4mL正己炕-二氧甲炕(3+1)35.C下氨气流蒸发浓缩至1mL 加入500L甲苯保持液)35 c下氨气流蒸发浓缩至20L
44、用四氢吠喃甲醇(5+5)或乙睛稀释(最后体积为250L)HPLC分离测得荧光强度图A.2分离步骤的流程图:适用于椰子油的特定方法GB/T 24893-201 O/ISO 15753: 2006 A.3 色谱图见图A.3。250 200 150 100 50 。5 1 甲苯(溶剂)2荼(10.2月/kg)3-nd 4药(2.2g/kg)5菲(15.2问/kg)6惠(1.4g/kg) 7 荧惠(4.2g/kg)8花(4.3月/kg)nd表示未检测到A.4 进样次序见表A.20列1 2 3 4 5 6 多环芳;怪含茸的7 测定8 总分析时间:23h 9 10 11 12 13 14 15 14 8
45、10 15 20 25 30 35 9 苯并(a)草nd10窟(1.0g/kg) 11 苯并(b)荧葱(0.4g/kg)12一一-苯并(k)荧惠(0.2g/kg)13一一一苯并(a)花(0.2g/kg)14一二苯并(a，h)葱nd15一一苯并怡，h，。花(0.4月/kg)16一-苟并(1，2，3-c , d)花nd图A.3初障撒榄油样品的色谱圈表A.2HPLC进样次序瓶进样次数四氢峡喃-甲醇(5十5)1 空白(9.2)1 标准溶液，50ng/mL(5.15) 2 标准溶液的萃取液(9.3)2 样品12 标准溶液，50ng/mL(5.15) 2 样品22 样品32 标准溶液，50ng/mLC5.
46、 15) 2 样品42 样品52 标准溶液，50ng/mL(5. 15) 2 样品62 样品72 标准溶液，50ng/mL(5. 15) 2 t/min 采集方法特定波长特定波长特定波长特定波长特定波长特定波长特定波长特定波长特定波长特定波长特定波长特定波长特定波长特定波长特定波长GB/T 24893-201 O/ISO 15753: 2006 表A.2(续)列瓶进样次数采集方法1 样品11 发射2 样品21 发射3 样品31 发射4 样品41 发射5 样品51 发射6 样品61 发射7 样品71 发射验证是否存在多环芳短8 样品11 激发9 梓品21 激发10 样品3激发11 样品41 激发
47、12 样品51 激发13 样品61 激发14 样品71 激发15 GB/T 24893-201 O/ISO 15753: 2006 附录B(资料性附录)联合实验室测试结果2002/2003年法国油脂协会(lTERG)组织19个实验室进行了联合实验室研究，每个实验室对每个样品测试两次，按照1S05725-2对数据进行统计分析，结果见表B.1。表B.1联合实验室测试结果代码多环芳短实验室数平均S, RSD(r) SR RSD(R) R A 菲15 39.95 4. 96 12.4% 13.89 13.27 33.2% 37.15 A 惠15 31. 60 3.47 11. 0% 9.71 10.5
48、6 33.4% 29.55 A 荧惠13 49. 70 3.57 7.2% 9.99 13. 68 27.5% 38.31 A 花13 70.36 4.67 6.6% 13.07 23.47 33.4% 65. 71 A 苯并(a)葱15 30.64 2.21 7.2% 6.20 9.56 31. 2% 26.78 I A 窟15 34.34 2.39 6.9% 6.68 10.23 29.8% 28.63 A 苯并(b)荧惠15 26.00 2.25 8.7% 6.30 8.61 33.1% 24.11 A 苯并(的荧惠14 20.23 1. 23 6.1% 3.44 6.76 33.4% 18. 94 A 苯并(a)花12 18.19 1. 23 6.8% 3.44 4.44 24.4% 12.42 A 二苯并(a，h)葱15 18.78 2.46 13.1% 6.88 7.24 38.5% 20.27 A 苯并怡，h，i)花13 11. 63 1. 56 13.5% 4.38 4.11 35.3% 11. 51 A 苟并(1，2，3-c , d) tt 14 12.91 2.88 22.3% 8.06 5. 93 45.9% 16.61 B 菲17 82.57 4.08 4.9% 11. 42 13.94 16.9% 39.02 B 惠
