1、I67.040 C 53 号昌中华人民共和国国家标准GB/T 22250-2008 保健食品中绿原酸的测定Determination of chlorogenic acid in health foods 2008-07-31发布2008-11-01实施丰码防中/中华人民共和国卫生部申舍中国国家标准化管理委员会也叩前言本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准负责起草单位:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准参加起草单位z河北省疾病预防控制中心、吉林省疾病预防控制中心。本标准主要起草人z杨大进、方从容、王竹天、韩会新、李青。本标准为首次发布。GB/T 22250-2008 I G/
2、T 22250-2008 保健食品中绿原酸的测定1 范围本标准规定了保健食品中绿原酸的测定方法。本标准适用于以金银花、菊花、杜仲、山植等一种或几种为主要原料的保健食品中绿原酸的测定。当取样量为2.0g时，定容体积为25mL时，方法的检出限(LOD)为1.4X10-3g/险，方法的定量限(LOQ)为4.0X10g/kg。方法的线性范围为2.0g/mL-80g/mL.2 原理根据绿原酸易溶于甲酶、乙薛等极性有机溶剂的理化特性，一般试样中的绿原酸用70%甲薛提取，如果试样为油性软胶囊，可用石油磁脱脂挥干后再用70%甲醇提取。提取液定容，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，由紫外检测器检测，根据
3、保留时间和峰面积进行定性和定量。3 试剂和材料3. 1 乙酸(CH3COOH):优级纯。3.2 乙睛(CH3CN):色谱纯。3.3 甲醇(CH30H):色谱纯。3.4 石油酶z分析纯，沸程30c -60 c。3.5 水(H20):为实验室一级用水，电导率(25C)为0.01mS/m. 3.6 绿原酸标准品z纯度99%。3. 7 绿原酸标准储备液(2.00mg/mL):称取绿原酸标准品0.02g(精确至0.0001g)于10.0mL容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，混匀(此标准储备液在4C冰箱中，可保存5d)。3.8 绿原酸标准使用液(200g/mL):准确量取1.00 mL绿原酸标准储备液于
4、10.0mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀(此标准使用液在4C冰箱中，可保存5d)。4 仪器和设备4. 1 高效液相色谱仪z附紫外检测器。4.2 超声波清洗器。4.3 离心机:4000r/min. 5 分斩步骤5. 1 试样处理5. 1. 1 一般试样z称取0.5g-2 g粉碎均匀的试样(精确到0.001g)于25.0mL容量瓶中，加入20mL 70%甲晖，超声波提取30min，用70%甲晖定容至刻度，混匀(如试样中绿原酸含量较高，可适当进行稀释)，过0.45m洁、膜，滤液供液相色谱分析。5.1.2 油性试样:称取0.5g-2 g均匀的试样(精确到0.001g)于25mL离心试管中，加入1
5、5mL石油膛，振摇1min后，以3000r/min离心10min，弃去溶剂后再重复一次。将试样中需剂挥干后加入70%甲晖，其余步骤同5.1.1。5. 1.3 液体试样z以3000 r/min离心10min后(如试样中绿原酸含量较高，可适当进行稀释)，过0.45m滤膜，滤液供液相色谱分析。1 GB/T 22250-2008 5.2 标准曲线的制备分别吸取绿原酸标准使用液(3.的，用流动相稀释并在容量瓶中定容的浓度分别为2.00、10.0、20.0、40.0、80.0g/mL标准系列。5.3 灌相色谱参考条件5.3. 1 色谱柱:ODSC18色谱柱，250mmX4. 6 mm，5m。5.3.2 流
6、动相:0.5%乙酸溶液+乙腊=9十1。5.3.3 流速:1.0mL/mim。5.3.4 柱温:35.C。5.3.5 检测波长:327nm. 5.3.6 进样量:10L.5.3.7 色谱分析:取标准溶液和试样溶液注入色谱柱中，以保留时间定性，以试样峰面积或峰高与标准比较定量。6 结果计算试样中绿原酸的含量按式(1)进行计算:c X V X 1000 x=. .L VVV- ( 1 ) 式中zx-试样中的含量，单位为克每千克或克每升(g/kg或g/L); C一一由标准曲线求得进样液中绿原酸的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); V一-试样定容体积，单位为毫升(mL); m一一-试样质量或体积，单位
7、为克或毫升(g或mL)。计算结果保留三位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8 色谱固在上述色谱条件下的色谱图见图1图2。0.080 0.040 0.030 0.020 0.010 0.000 nv向句，FOnunu nUA 吸光度0.050 0.50 1. 00 1. 50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 t/min 图1绿原酸标准色谱图2 o. 16 吸o.14 I 绿原酸光。.12度。.100.08 0.06 0.04 0.02 0.
8、00 F GB/T 22250-2008 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 t/min 图2绿原踵试样色谱圄OONlomNNNH筒。国华人民共和国家标准保健食品中绿原酸的测定GB/T 22250-2008 白 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销除印张0.5字数6千字2008年10月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2008年10月第一版睡定价10.元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066 1-34149 22250-2008
