1、ICS 6502030B 41S B中华人民共和国水产行业标准SCT 72033-2007对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第3部分：新鲜组织的TE染色法Diagnostic Protocols for Hepatopancreatic Parvovirus Diseaseof Penaeid Shrimp-Part 3：TE Staining Method With Fresh Ti髂ue20070614发布 2007-0901实施中华人民共和国农业部发布前 言SCT 7203 32007SCT 7203对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程分为三个部分：第1部分：PCR检测法；第2部分：组织病理学诊断法；
2、第3部分：新鲜组织的T-E染色法。本部分为SCT 7203的第3部分。本部分的附录A为规范性附录。本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会归口。本部分起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、全国水产技术推广总站。本部分主要起草人：黄健、杨冰、陈爱平、宋晓玲、史成银、杨丛海、魏琦。1范围对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第3部分：新鲜组织的TE染色法SCT 720332007S；(CT 7203的本部分规定了诊断对虾肝胰腺细小病毒病新鲜组织的T-E染色法的原理、试剂与材料、仪器设备、操作步骤和结果判定。本部分适用于在现场或实验室对感染对虾肝胰腺细小病毒(Hepato
3、pancreatic Parvovirus，HPV)的对虾个体进行快速诊断。不适于对病毒的非感染性携带的标本进行诊断以及对宿主进行组织病理学评价。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。SCT 720212007斑节对虾杆状病毒病诊断规程第1部分：压片显微镜检查法SCT 720322007对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第2部分：组织病理学诊断法3原理31 对虾肝胰腺细小
4、病毒病的病原和病理学特征见SCT 720322007(对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第2部分：组织病理学诊断法)中31的规定。32技术原理台盼蓝含有一个弱碱性基团和一个强酸性基团，其弱碱性基团可与核酸相结合，而强酸性基团的存在，使台盼蓝与弱酸性染料伊红互混而不发生沉淀。因此，台盼蓝与伊红的混合液既能一次性地使新鲜组织的细胞核染上蓝色，又能将细胞质染上红色。4试剂和材料41除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水。42 T-E染色液按附录A的规定执行。5仪器设备5，1解剖刀。5，2尖头镊子。5 3医用剪刀。54载玻片。55盖玻片。56光学显微镜：带高倍镜(40)和油镜(100)。57
5、吸水纸。1SCT 72033200758滴管。6检测步骤61采样样品采集要求见SCT 720212007(斑节对虾杆状病毒病诊断规程第1部分：压片显微镜检查法)附录B。62样品处理对虾糠虾幼体取3尾5尾活体，在载玻片上用解剖刀整体切碎；仔虾及体长小于3 cnl的幼虾，取其头胸部，在载玻片上用解剖刀切碎；对虾体长大于3 cm时，揭开其头胸甲，以尖头镊子取出一小块肝胰腺组织，在载玻片上撕碎涂抹，稍晾干。63染色在组织浆上滴加2滴TE染色液，混匀，常温放置染色3min-5rain。64制片观察盖上盖玻片，再覆上数层吸水纸，轻压以吸去多余染液，除去吸水纸，在高倍镜或油镜下观察。7结果判定7 1正常的对虾肝胰腺细胞经T-E染色，可观察到肝胰腺细胞呈球形，形态较大；细胞质较肥大，为红色；细胞核较圆，为蓝到紫色；核内着色均匀，可见染色质和核仁；细胞质易破碎，有些只可见到蓝色的裸露细胞核。72感染)v的对虾肝胰腺细胞核内，包涵体多呈圆形或卵圆形，数目多为1个；包涵体着色较深，边沿界线清晰，与核膜或边沿化的染色质之间有一空白区间，内部呈均一致密的蓝紫色到紫红色。73结果可疑时，补充组织病理学诊断法或PCR检测法进行结果确认。2A1rE染色液台盼蓝伊红Y(水溶性)苯酚Nacl甘油水室温贮存。附录AI规范性附录)试剂配方06902905905920mL80mL3
