1、 ICS 65.020.30 B 44 DB33 浙江省 地方标准 DB33/T 2110.12018 实验动物 长爪沙鼠 第 1 部分：微生物控制等级及监测 Laboratory animal Mongolian gerbil Part1: Microbiological standards and monitoring 2018 - 04 - 12 发布 2018 - 05 - 12 实施 浙江省质量技术监督局 发布 DB33/T 2110.12018 I 前 言 实验动物 长爪沙鼠分为七个部分： 第 1部分：微生物控制等级及监测； 第 2部分：寄生虫控制等级及监测； 第 3部分：遗传质量
2、控制； 第 4部分：组织病理检查规程； 第 5部分：配合饲料营养成分； 第 6部分：环境及设施； 第 7部分：饲养管理规程。 本部分为实验动物 长爪沙鼠的第 1部分。 本部分依据 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本部分由 浙江省科技厅 提出 并归口 。 本部分起草单位：浙江省医学科学院、杭州师范大学 。 本部分主要起草人：褚晓峰、戴方伟、宋晓明、王吉、周莎桑、岳秉飞、李巍、杜江涛、郭红刚、应华忠、萨晓婴。 本部分为首次发布。 DB33/T 2110.12018 1 实验动物长爪沙鼠 第 1 部分： 微生物控制等级及监测 1 范围 本部分规定了实验动物长爪沙鼠（ Mongolian
3、gerbil）微生物学等级分类、检测要求、检测程序、检测方法、检测规则、结果判定和检测结论等。 本部分适用于实验动物长爪沙鼠微生物控制等级及监测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 14922.2 实验动物 微生物学等级及监测 GB/T 14926.1 实验动物 沙门菌检测方法 GB/T 14926.4 实验动物 皮肤病原真菌检测方法 GB/T 14926.5 实验动物 多杀巴斯德杆菌检测方法 GB/T 14926.6 实验动物 支气管鲍特杆菌
4、检测方法 GB/T 14926.8 实验动物 支原体检测方法 GB/T 14926.9 实验动物 鼠棒状杆菌检测方法 GB/T 14926.10 实验动物 泰泽病原体检测方法 GB/T 14926.11 实验动物 大肠埃希菌检测方法 GB/T 14926.12 实验动物 嗜肺巴斯德杆菌检测方法 GB/T 14926.13 实验动物 肺炎克雷伯杆菌检测方法 GB/T 14926.14 实验动物 金黄色葡萄球菌检测方法 GB/T 14926.15 实验动物 肺炎链球菌检测方法 GB/T 14926.16 实验动物 乙型溶血性链球菌检测方法 GB/T 14926.17 实验动物 绿脓杆菌检测方法 G
5、B/T 14926.18 实验动物 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法 GB/T 14926.19 实验动物 汉坦病毒检测方法 GB/T 14926.22 实验动物 小鼠肝炎病毒检测方法 GB/T 14926.23 实验动物 仙台病毒检测方法 GB/T 14926.24 实验动物 小鼠肺炎病毒检测方法 GB/T 14926.25 实验动物 呼肠孤病毒 III型检测方法 GB/T 14926.26 实验动物 小鼠脑脊髓炎病毒检测方法 GB/T 14926.28 实验动物 小鼠细小病毒检测方法 GB/T 14926.41 实验动物 无菌动物生活环境及粪便标本的检测方法 GB/T 14926.42 实
6、验动物 细菌学检测 标本采集 GB/T 14926.43 实验动物 细菌 学检测染色法、培养基和试剂 DB33/T 2110.12018 2 GB/T 14926.50 实验动物 酶联免疫吸附试验 GB/T 14926.51 实验动物 免疫酶试验 GB/T 14926.52 实验动物 免疫荧光试验 GB/T 14926.54 实验动物 血凝抑制试验 NY/T 541 动物疫病实验室检验采样方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 长爪沙鼠 Mongolian gerbil （ Meriones unguieulataus） 经人工饲育，对其携带的病原微生物和寄生虫实行控制，遗
7、传背景明确或者来源 清楚，用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验的长爪沙鼠。 3.2 普通级长爪沙鼠 conventional (CV) Mongolian gerbil 不携带重要人兽共患病病原和烈性传染病病原。 3.3 清洁级长爪沙鼠 clean (CL) Mongolian gerbil 除普通级应排除的病原外，不携带对科学实验干扰大的病原。 3.4 无特定病原体级长爪沙鼠 specific-pathogen free（ SPF） Mongolian gerbil 除清洁级动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验产 生干扰的病原。 3.5 无菌级长爪沙鼠 ge
8、rm free（ GF） Mongolian gerbil 利用现有的生物学技术，无可检出的一切生命体。 4 缩略语 ELISA：酶联免疫吸附试验 HAI：间接血凝试验 IEA：免疫酶试验 IFA：免疫荧光试验 5 长爪沙鼠等级 DB33/T 2110.12018 3 根据对病原微生物和寄生虫控制的程度，长爪沙鼠分为普通级、清洁级、无特定病原体级和无菌级四个等级，各等 级的具体控制指标见表 1、表 2。 6 检测要求 6.1 临床观察 外观检查无异常。 6.2 微生物检测项目 微生物检测项目分为必须检测项目和必要检测项目。必须检测项目是在进行长爪 沙鼠质量评价时必须检测的项目。在引进种 源和疑
9、有本病流行时，除必须检测项目外，需增加必要检测项目。 病原菌检测项目按表 1执行，病毒检测项目按表 2执行。 表 1 长爪沙鼠病原菌检测项目 动物等级 病原菌检测项目 检测要求 无菌级 无特定病原体级 清 洁 级 普 通 级 沙门菌 Salmonella spp. 皮肤病原真菌 Pathogenic dermal fungi 泰泽病原体 Tyzzers organism 支原体 Mycoplasma spp. 多杀巴斯德杆菌 Pasteurella multocida 支气管鲍特杆菌 Bordetella bronchiseptica 大肠埃希菌 0115a,c:K(B)Escherichia
10、 coli 0115a,c:K(B) 嗜肺巴斯德杆菌 Pasteurella pneumotropica 肺炎克雷伯杆菌 Klebsiella pneumonia 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 鼠棒状杆菌 Corynebacterium kutscheri 绿脓杆菌 Pseudomonas aeruginosa 肺炎链球菌 Streptococcus pnemoniae 乙型溶血性链球菌 -hemolytic Streptococcus 产酸克雷伯杆菌 Klebsiella oxytoca 螺杆菌 Helicobacter spp. 幽门螺旋杆菌 Helicoba
11、cter pylori 用现有的生物学技术，无可检出的病原菌 注： “”为必须检测项目， “”为必要检测项目。 DB33/T 2110.12018 4 表 2 实验动物长爪沙鼠病毒检测项目 动物等级 病毒检测项目 检测要求 无菌级 无特定病原体级 清 洁 级 普 通 级 汉坦病毒 Hantavirus (HV) 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 Lymphocytic Choriomeningitis Virus (LCMV) 仙台病毒 Seandai Virus (SV) 小鼠肝炎病毒 Mouse Hepatitis Virus (MHV) 小鼠肺炎病毒 Pneumonia Virus of Mic
12、e (PVM) 呼肠孤病毒 III 型 Reovirus type (Reo-3) 小鼠细小病毒 Minute Virus of Mice (MVM) 小鼠脑脊髓炎病毒 Theilers Mouse Encephalomyelitis Virus（ TMEV） 用现有的生物学技术，无可检出的病毒 注： “”为必须检测项目。 7 检测程序 检测程序按图 1执行。在采样时，结合临床症状和实验室检查结果，需要进一步确证的，可取特定样本进行检测 。 图 1 检测程序 编号 外观检查 检测 结果判定 检测报告 麻醉、采样 皮肤取样 真菌检查 采血 无菌解剖，取器官分泌物、肠内容物（新鲜粪便）、脏器等样本
13、 分离血清，病原抗体检查 细菌检查 DB33/T 2110.12018 5 8 检测方法 检测方法见表 3。 表 3 长爪沙鼠微生物检测方法 微生物检测项目 方法 沙门菌 GB/T 14926.1 皮肤病原真菌 GB/T 14926.4 多杀巴斯德杆菌 GB/T 14926.5 支气管鲍特杆菌 GB/T 14926.6 支原体 GB/T 14926.8 鼠棒状杆菌 GB/T 14926.9 泰泽病原体 GB/T 14926.10 大肠埃希菌 GB/T 14926.11 嗜肺巴斯德杆菌 GB/T 14926.12 肺炎克雷伯杆菌 GB/T 14926.13 金黄色葡萄球菌 GB/T 14926.
14、14 肺炎链球菌 GB/T 14926.15 乙型溶血性链球菌 GB/T 14926.16 绿脓杆菌 GB/T 14926.17 小鼠细小病毒 见附录 A 汉坦病毒 见附录 B 小鼠肝炎病毒 见附录 C 小鼠肺炎病毒 见附录 D 呼肠孤病毒 III型 见附录 E 仙台病毒 见附录 F 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 见附录 G 9 检测规则 9.1 检测频率 9.1.1 普通级、清洁级和无特定病原体级长爪沙鼠：每三个月至少检测一次。 9.1.2 无菌级长爪沙鼠：每年至少检测一次。 每 2 周 4 周检查一次动物的生活环境标本和粪便等标本。 9.2 采样 9.2.1 方式 选择 12 周龄以上的长爪沙
15、鼠用于检测，随机取样；新鲜粪便样本应在饲养单元中选取至少 4 个点随机取样。 微生物的采样应当与寄生虫采样联合进行。 DB33/T 2110.12018 6 9.2.2 方法 采样方法按照标准 NY/T 541进行。 9.2.3 数量 根据实验动物长爪沙鼠群体大小，采样数量见表 4。血液采样不少于 1 毫升 /只；每个隔离器采样不少于 2 只动物。 表 4 采样数量 群体大小（只） 采样数量 100 不少于 5 只 100 500 不少于 10 只 500 不少于 15 只 9.3 送检要求 样本要求 有明显标识，包装完好，安全送达实验室，送检单应写明检品名称、品系、等级、数量及检测项目等内容
16、。 10 结果判定 10.1 抗体检查 待检血清经 ELISA、 IEA、 IFA 或 HAI检测，血清特异性抗体阴性判为合格。 10.2 病原体检查 待检样品经分离培养和鉴定，未见病原体判为合格。 11 结论与报告 按照相应的等级控制要求，所有项目的检测结果均为阴性，判为合格。报告应包括检测结果、检验结论等内容。DB33/T 2110.12018 7 附 录 A （规范性附录） 长爪沙鼠的小鼠细小病毒（ MVM）检测方法 A.1 原理 根据免疫学原理，采用 MVM抗原检测长爪沙鼠血清中 MVM抗体。 A.2 主要试剂和 器材 A,2,1 试剂 A.2.1.1 ELISA抗原 A.2.1.1.
17、1 特异性抗原 MVM接种小鼠胚胎（ ME）或 3T3细胞，加维持液培养 7 d 10 d，当细胞病变达 + +时收获，冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成 ELISA抗原。 A.2.1.1.2 正常抗原 ME或 3T3细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液。 A.2.1.2 抗原片 MVM接种大鼠胚胎（ RE）或 ME细胞，培养 7 d 10 d，病变达 + +时，将细胞用胰酶消化分散，用 PBS洗涤，涂片。室温干燥的同时，冷丙酮固定 10 min， -20 保存。 A.2.1.3 阳性血清 MVM抗原免疫 SPF级长爪沙鼠所获得的抗血清。
18、 A.2.1.4 阴性血清 SPF级长爪沙鼠血清。 A.2.1.5 酶结合物 辣根过氧化物酶标记羊抗长爪沙鼠 IgG抗体或兔抗长爪沙鼠 IgG抗体。用于检测相应动物血清抗体。 A.2.1.6 荧光抗体 异硫氰酸荧光素标记羊抗长爪沙鼠 IgG抗体或兔抗长爪沙 鼠 IgG抗体。 A.2.2 器材 主要有酶标仪、荧光显微镜、 37 培养箱或水浴箱。 A.3 检测方法 DB33/T 2110.12018 8 采用 ELISA方法 (见 GB/T14926.50)进行血清学检测。 采用 IEA方法 (见 GB/T14926.51) 进行血清学检测。 采用 IFA方法 (见 GB/T14926.52) 进行血清学检测。 A.4 结果判断 血清特异性抗体阴性判为合格。
