1、湖南省地方标准DB43大型溞室内保种技术规程Daphnia Magna Straus Indoor Storage Technology ProceduresDB43/T 10232015 ICS 65.150B 51湖南省质量技术监督局 发 布2015-04-08 发布 2015-05-08 实施DB43/T 10232015 I 目 次 前言1 范围 12 规范性引用文件 13 术语和定义 13.1 大型溞 13.2 龄期 13.3 龄 13.4 孤雌生殖 13.5 两性生殖 13.6 大型溞生活史 14 大型溞特征 15 溞种来源 26 环境要求 26.1 水质 26.2 水温 26.3
2、 光照 27 栅藻饵料制备 28 保种系统 28.1 保种设备 28.2 构建模拟生态系统 29 日常管理 39.1 养殖密度 39.2 投喂 39.3 曝气 39.4 换水 39.5 清洗消毒 39.6 记录 3附录A（资料性附录） 大型溞雌性模式图及大型溞生活史图 4附录B（资料性附录） “溞一藻一螺一鱼”水生生态模拟系统 5附录C（资料性附录） 重组水和OECD培养基配制方法 6附录D（资料性附录） 大型溞室内保种日常管理记录表 7DB43/T 10232015 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准某些内容可能涉及专利。本标准发布机构不承担识别这些专利
3、的责任。 本标准由湖南省植物保护研究所提出。 本标准由湖南省畜牧水产局归口。 本标准起草单位：湖南省植物保护研究所。 本标准主要起草人：刘勇、蒋桂芳、陈昂、严清平、张德咏、陈源、奚庆、罗香文。 DB43/T 10232015 1 大型溞室内保种技术规程 1 范围 本标准规定了大型溞室内保种的溞种特征、溞种来源、环境要求、栅藻饵料制备、保种系统、日常管理。 本标准适用于我省试验用大型溞的室内保种。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY 5051 无公害
4、食品 淡水养殖用水水质 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 大型溞 Daphnia magna straus 隶属于枝角亚目真枝角部溞科，主要分布于北半球各地，温带南部以及亚热带地区。 3.2 龄 期 Vintage 2次脱壳之间的时间间隔。 3.3 龄 Age 在一定龄期中动物的体态称为龄。幼溞的称为幼龄，有(46)个幼龄；成体的称为成龄，成龄的变化较大，有(626)个成龄。 3.4 孤雌生殖 Parthenogenesis 也称单性生殖，即卵不经过受精也能发育成正常的新个体。通常情况下孤雌生殖。 3.5 两性生殖 Bisexual Reproduction 有性生殖中两性
5、配子的结合，即通过受精过程进行有性生殖的现象。环境条件恶化时进行两性生殖。 3.6 大型溞生活史 Life of Daphnia magna straus 大型溞生活史图详见附录A的A.2。 4 大型溞特征 雌性大型溞体长（2.206.00）mm，体呈宽卵形，后半部比前半部略狭，黄色或淡红色，稍透明。DB43/T 10232015 2头部宽而低，头顶圆钝，无盔。蚤状溞、隆线溞与大型溞三个属种难以区分，大型溞的后腹部肛门处凹陷，将肛刺分成2部分，其他种肛门连续，整个后腹部呈三角型，肛门处不凹陷。大型溞雌性模式图参见附录A的A.1。 5 溞种来源 大型溞（Daphnia magna straus）
6、来自野外采集或选购已纯化好的连续稳定的群体。 6 环境要求 6.1 水质 饲养期间重组水和OECD培养基水质应保持稳定，满足pH为 6.09.0。溶解氧3.0 mg/L。大型溞水质的硬度（以CaCO3计）为（140 250） mg/L。水中氨氮含量应低于0.5 mg/L，并确保添加的水不含氯。保种培养用水水质应符合NY5051的规定，重组水的配制方法参见附录C 的C.1。 6.2 水温 以（1822） 为宜，可采用空调或加热棒调节水温。 6.3 光照 采用LED灯光照。每天光照时间16h。 7 栅藻饵料制备 选购藻种后，应提前准备好OECD培养基，收到藻种后，应尽快进行转接。第一次转接应按1:
7、 51: 2 的比例将（510）mL藻种转接，置于光照摇床中（按10010次/min的频率摇动），每天注意观察藻液颜色变化。（7296）h 后对藻种镜检计数，进行第二次转接。将 10 mL 藻液转接入装有 90 mL无菌OECD培养基的锥形瓶中扩大培养。发现藻种受污染时，应及时引种，确保藻种健壮、纯净。OECD培养基配制方法参见附录C的C.2。 8 保种系统 8.1 保种设备 饲养缸约70L（长宽高为：0.6m0.3m0.4m），为左右底部和侧壁密封、顶部开放的玻璃缸，水面高度以0.3m为宜。 8.2 构建模拟生态系统 在保种培养容器开放的顶部安装LED植物生长灯，面积基本覆盖大型溞培养容器顶
8、部的开口，并放置一个水内循环装置（或曝气装置）。生态系统内包括水草（一个保种缸内放一至两棵水草）、浮游生物（绿藻、大型溞）、少量草螺、砂石（砂石厚度保持在2cm左右）、鱼（一个保种缸内放一至两尾清道夫或青苔鼠）等。 “溞藻螺鱼”模拟生态系统参见附录B。 DB43/T 10232015 3 9 日常管理 9.1 养殖密度 大型溞以每升水中培养50只左右为宜，当密度过大时，可用细抄网将多余大型溞捞出。 9.2 投喂 投喂人工培养的栅藻藻液，在显微镜下观察并计算保种缸内栅藻藻液量，并推算生物密度，栅藻藻液密度以105个/mL为宜。 9.3 曝气 在溞的生长过程中每天定时运行循环水装置（或曝气装置）8
9、h。 9.4 换水 每半月换水一次，每次更换25的水。 9.5 清洗消毒 新购置玻璃缸需要用稀硝酸浸泡后彻底清洗干净。 饲养缸应定期进行清洗及杀菌消毒。 9.6 记录 一个星期（可根据实际情况）记录保种缸内溞的密度、栅藻藻液密度 、水质条件等情况。大型溞室内保种日常管理记录表参见附录D。 DB43/T 10232015 4附录A （资料性附录） 大型溞雌性模式图及大型溞生活史图 1.颈沟；2.吻；3.头盔；4.壳弧；5.腹突；6.尾刚毛；7.后腹部；8.尾瓜；9.肛刺；10.壳刺；11.孵育囊中的夏卵；12.第一触角；13.第二触角；14.大颚；15.上唇；16.胸肢；17.脑；18.视神经节
10、；19.复眼；20.动眼肌；21.单眼；22.食道；23.中肠；24.直肠；25.人囊；26.心脏；27.颚腺；28.卵巢；29.生殖孔。 附录A.1 大型溞雌性模式图 附录A.2 大型溞生活史图 DB43/T 10232015 5 附录B （资料性附录） “溞一藻一螺一鱼”水生生态模拟系统 附录B.1 “溞一藻一螺一鱼”水生生态模拟系统 DB43/T 10232015 6附录C （资料性附录） 重组水和OECD培养基配制方法 表1 重组水的配制方法 注：重组水时避免接触铜质器皿。 表2 OECD培养基配制方法 注：将配好的储备液经0.2 um滤膜过滤或高压灭菌（120，15min），4避光冷
11、藏保存，储备液2和储备液4只能通过滤膜过滤灭菌。 母液（单一物质） 物质名称 浓度 加入并定容至1 L水中的母液量 CaCl22H2O 11.76 g/L 25 mL MgSO47H2O 4.93 g/L 25 mL NaHCO3 2.59 g/L 25 mL KCl 0.23 g/L 25 mL 营养盐 储备液中的质量浓度 取用体积 最终定容体积 储备液1：常量营养盐 NH4Cl MgCl26H2O CaCl22H2O MgSO47H2O KH2PO4 1.5 g/L 1.2 g/L 1.8 g/L 1.5 g/L 0.16 g/L 10mL 储备液2：Fe-EDTA FeCl36H2O N
12、a2EDTA2H2O 80 mg/L 100 mg/L 1mL 储备液3：微量元素 H3BO3 MnCl2 4H2O ZnCl2 CoCl26H2O CuCl22H2O Na2MoO42H2O 185 mg/L 415 mg/L 3 mg/L 1.5 mg/L 0.01 mg/L 7 mg/L 1mL 储备液4：NaHCO3 NaHCO3 50 g/L 1mL 1000mL DB43/T 10232015 7附录D （资料性附录） 大型溞室内保种日常管理记录表 房间号 溶解氧仪编号 水质硬度计编号 照度计编号 pH计编号 日 期 （ 年） 缸 号 水温（） 水硬度 （mg/L） 溶氧量（mg/L） pH 值 水面光照 强度（Lux） 栅藻藻液密度 大型溞 密度 水体积（L） 是否更换 25%的水 备 注 记录人 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 是 否 校核人： 时间：
