1、湖南省地方标准DB43饲料中乙酰甲喹的测定高效液相色谱法Determination of Maquindox in feedsHigh performance liquid chromatographic methodDB43/T 12012016 湖南省质量技术监督局 发 布2017-02-13实施2016-12-13 发布ICS 65.120B 46DB43/T 12012016 I 目 次 前言1 范围 12 规范性引用文件 13 原理 14 试剂与材料 15 仪器与设备 26 采样与试样的制备 27 测定步骤 28 结果计算 39 灵敏度、准确度和精密度 3附录 A（资料性附录） 乙酰
2、甲喹高效液相色谱图 4DB43/T 12012016 II 前 言 本标准按GB/T 1.12009给出的规则起草。 请注意本标准某些内容可能涉及专利，本标准发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由湖南省畜牧水产局提出并归口。 本标准起草单位：湖南省兽药饲料监察所、湖南省冷水江市农业局、耒阳市畜牧水产局。 本标准主要起草人：陈福华、杨彦宁、隆雪明、周灿、陈爱忠、王集富。 DB43/T 12012016 1 饲料中乙酰甲喹的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中乙酰甲喹（Maquindox）的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于我省配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中乙酰甲喹的
3、测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 采用甲醇水溶液提取试样中乙酰甲喹，固相萃取柱净化，收集流出液，高效液相色谱法测定，外标法定量。 4 试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682一级水的规定。 4.1 乙酰甲喹标准品：纯度99.0%。 4.2 乙腈，色谱纯。 4.3 甲醇
4、，色谱纯。 4.4 甲醇。 4.5 二甲亚砜。 4.6 盐酸。 4.7 提取液：甲醇：水=10:90。 4.8 淋洗液1：0.02mol/L 盐酸：移取1.67mL盐酸，用水定容至1000mL。 4.9 淋洗液2：0.1mol/L 盐酸：移取8.33mL盐酸，用水定容至1000mL。 4.10 淋洗液3：甲醇：水=10:90。 4.11 洗脱液：甲醇：水=80:20。 4.12 固相萃取柱：HLB固相萃取柱，规格为100mg/3mL或相当者。 4.13 乙酰甲喹标准贮备液：1.0mg/mL：准确称取乙酰甲喹对照品 10.0mg于 10mL 棕色容量瓶中，用2mL二甲亚砜溶解，甲醇定容。-20密
5、封避光保存，有效期三个月。 4.14 乙酰甲喹标准工作液：移取适量乙酰甲喹标准储备液，用 80%甲醇溶液稀释成浓度为（0.1-100）g/mL的乙酰甲喹标准工作液，现配现用。 DB43/T 12012016 24.15 流动相：乙腈：水=20：80。 4.16 滤膜：0.45m有机滤膜。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱：配置二极管阵列或紫外检测器。 5.2 分析天平：感量0.01mg和0.001g。 5.3 真空泵。 5.4 恒温水浴锅。 5.5 氮吹仪。 5.6 离心机。 5.7 超声波清洗机。 5.8 饲料粉碎机。 5.9 0.42m分析筛。 6 采样与试样的制备 6.1 采样按GB
6、/T 14699.1的规定执行。 6.2 试样制备按GB/T 20195的规定执行。 7 测定步骤 所有检测都应在避光条件下进行，并使用棕色容器。 7.1 提取 准确称量试样适量（配合饲料5g，浓缩饲料2g，复合预混料1g，精确至0.001g）于50mL离心管中，加入甲醇：水提取液20.0mL，超声提取15min后，4 000r/min 离心10min，上清液过滤备用。 7.2 净化 分别用2mL甲醇和水对SPE柱进行活化，取提取液2.0mL过柱，控制流速不超过1mL/min，再分别用淋洗液1、淋洗液2和淋洗液3各2mL淋洗小柱，吹干。用4.00mL甲醇：水洗脱液洗脱，收集洗脱液，过0.45m
7、滤膜，上机测定。 7.3 测定 7.3.1 高效液相色谱参数 色谱柱：C18柱 (250mm4.6mm，5m)，或相当者。 流动相：乙腈：水=20：80。 流速：1.0mL/min。 进样量：10.0L。 检测波长：260nm。 7.3.2 试样测定 DB43/T 12012016 3 取试样溶液和相应的标准工作液进样，以组分的保留时间定性，以色谱峰峰面积积分值做单点或多点校准，外标法定量。标准工作液和试样溶液中乙酰甲喹的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。乙酰甲喹的高效液相色谱图参见附录A，乙酰甲喹标准工作液色谱图参见附录A中图A1，饲料中添加乙酰甲喹标准物质色谱图参见附录A中图A2。 7.
8、3.3 空白试验 除不加试料外，采用上述相同步骤操作。 8 结果计算 试样中乙酰甲喹的含量由色谱数据处理软件或按下式计算获得： X= 10001000201VmAVVCAss 式中： X试样中乙酰甲喹的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A试样溶液对应的色谱峰面积响应值； As标准溶液对应的色谱峰面积响应值； V0试样提取液的体积，单位为毫升（mL）； V1定容体积，单位为毫升（mL）； V2提取液的过柱体积，单位为毫升（mL）； Cs标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（g /mL）； m试样质量，单位为克（g） 计算结果需扣除空白试样值，测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，测定结果保留三位有效数字。 9 灵敏度、准确度和精密度 9.1 灵敏度 乙酰甲喹在饲料中的定量限为1.0mg/kg。 9.2 准确度 本方法乙酰甲喹添加浓度为（1.050.0）mg/kg的回收率为（80.0110.0）%。 9.3 精密度 本方法的批内变异系数10%，批间变异系数15%。 DB43/T 12012016 4附录A (资料性附录） 乙酰甲喹高效液相色谱图 图A1：乙酰甲喹标准工作液（10.0 mg/L）的色谱图 图A.2 空白试料样中添加乙酰甲喹标准品（10.0 mg/L）的色谱图
