1、1专题 2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、选择题（12 小题）1下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，正确的是A分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，可以用于制取土壤稀释液B测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释度范围不同C测定土壤样品中的活菌数目，常用显微镜直接计数法D接种土壤微生物稀释液时，平板划线法可以采取连续划线的方法使微生物均匀分布【答案】B2在做分离分解尿素的细菌实验时，A 同学从对应 106培养基上筛选出大约 150 个菌落，而其他同学只选择出大约 50 个菌落。产生 A 同学结果的原因可能有土样不同培养基污
2、染操作失误没有设置对照ABCD【答案】A【解析】在做分离分解尿素的细菌实验时，A 同学获得的菌落远大于其他同学，可能是2由于其所取的土样不同，含有的细菌数较多，正确；也可能操作过程中没有保证无菌操作，如培养基灭菌不彻底、被杂菌污染，导致获得的菌落数较多，正确；没有设置对照不会导致其获得的菌落数明显增加的，错误。综上所述，以上说法正确的有，故选 A。3培养基是微生物生长、分离、鉴别的营养基础，下列有关微生物培养及培养基的描述错误的是A微生物培养基的配方中必须包含的成分有碳源、氮源、水、无机盐、生长因子及琼脂B不论何种培养基，在各成分溶化后都要进行灭菌操作，灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌C接种微生物
3、常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法D在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂可以鉴定分解尿素的细菌【答案】A4在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是A筛选出能分解尿素的细菌B对分离的菌种做进一步的鉴定C培养基中还缺乏酚红指示剂作细菌的营养物质D若指示剂变蓝我们就能准确地认定该菌能分解尿素【答案】B【解析】尿素分解菌可以产生脲酶将尿素分解分解为氨，使 pH 升高，培养基中进入酚红指示剂后，氨可以使指示剂呈红色，据此可以用酚红指示剂鉴别尿素分解菌，B 正确。点睛：熟记筛选土壤中能分解尿素的细菌的分离的步骤：土壤取样样品的稀释将稀3释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上挑选能生长的菌
4、落鉴定。5下列生物学实验操作，能够顺利达到实验目的的是A在固体培养基上涂布稀释的大肠杆菌培养液获得单菌落B在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气制作果酒C土壤浸出液接种于牛肉膏蛋白胨培养基上筛选分解尿素的细菌D在分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，可以用于制取土壤稀释液【答案】A【解析】在固体培养基上涂布稀释后的菌液能够得到单个菌落，A 正确；在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气，有利于酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，不利于制作果酒，B 错误；牛肉膏蛋白胨培养基不能筛选出分解尿素的细菌，应在以尿素为唯一氮源的培养基上筛选尿素分解菌，C 错误；在分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集
5、的土样经高温灭菌后，土样中的微生物全部被杀死，不能用于制取土壤稀释液，D 错误。6为了从土壤中分离出尿素分解菌，某同学按照下列配方配制培养基。下列叙述中，错误的是：培养基成分 重量KH2PO4 1.4 gNa2HPO4 2.l gMgSO47H2O 0.2 g葡萄糖 10.0 g尿素 10 g水 定容到 l000 mLA该培养基缺少琼脂B该培养基中，尿素是唯一的氮源C该培养基属于选择培养基D需要用刚果红染色法对分离的细菌进行鉴定【答案】D47从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的是A将土壤用无菌水稀释，制备 10310 5稀释倍数的土壤稀释液B将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板
6、上C用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌D从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株【答案】C【解析】从土壤中分离以尿素为氮源的细菌时，将土壤用无菌水稀释，制备土壤稀释液，将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上，用加入酚红指示剂的鉴别培养基可以鉴别分解尿素的细菌。从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株。8下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是A3 号试管的稀释倍数为 103倍B4 号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能为 5 号试管的 10 倍C5 号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为 1.7109个D该实验方法统计
7、得到的结果往往会比实际活菌数目要高【答案】B59下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，正确的是A分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氮气B用选择培养基选择出分解尿素的细菌，杀死其他微生物C统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在 300 以上的平板进行计数D用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红【答案】D【解析】分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解为氨和 CO2，A 错误；用含尿素的选择培养基选择出分解尿素的细菌，目的是淘汰不能分解利用尿素的其他微生物，B 错误；统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在 30300 以上的平板进行计数，求其平均值，C 错误
8、；用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红，D 正确。10用稀释涂布平板法来统计样品中尿素分解菌的数目，为了提高实验结果的可信度，往往要设置对照，对于对照组的要求不包括哪项A对照组培养基也严格灭菌，且不接种任何微生物B对照组和实验组培养基放在相同的条件下培养C所用培养基成分及 pH 大小完全与实验组一致D培养基的量的多少与实验组必须绝对相同【答案】D611用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是A平板上的一个菌落就是一个细菌B菌落中的细菌数是固定的C此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌D此方法统计的菌落数
9、一定与活菌的实际数相同【答案】C【解析】菌落是指肉眼可见的，具有一定形态结构的细胞群体，所以 A、B 错误；用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，由于一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，所以通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，C 正确；由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，而样品稀释度无论多高都很难使其中的细菌都单个分布于培养基上，所以此方法估算出样品中的活菌数可能与实际数不同，D 错误。12下图为从土壤中分离纯化尿素分解菌的过程。下列有关叙述错误的是A培养基都应以尿素为唯一氮源B图中所用培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌C过程是梯度稀释，稀释溶剂是无
10、菌水D可用酚红染料鉴定，菌落周围是否出现红色圈【答案】C7二、非选择题（3 小题）13下图是从土壤中筛选分解尿素细菌的过程，请回答下列问题。（1）图中选择培养基应以_为唯一氮源；鉴别培养基还需添加_作指示剂，分解尿素细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_色。（2）土壤中的细菌将尿素分解为_之后，才能被植物利用，土壤中的细菌之所以能将尿素分解，是因为细菌能合成_。（3）制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是_和灭菌，对培养基进行灭菌的常用方法是 _。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是_。（4）在 5 个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为 1
11、05的土壤样品溶液 0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为 191、16、326、173 和 182。该过程采取的接种方法是_，每克土壤样品中的细菌数量为 _108个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数较_（填“多”或 “少” ）【答案】 （1）尿素 酚红 红 （2）氨 脲酶 （3）调整 pH 高压蒸汽灭菌 防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染 （4）稀释涂布平板法 1.82 少8（ 4） 在 5 个 细 菌 培 养 基 平 板 上 ， 长 出 的 细 菌 菌 落 数 分 别 为 191、 16、 326、 173 和 182， 统 计 菌 落 数 在 3030
12、0 之间的平板，菌落数平均值为（191+173+182）/3=182，每克土壤样品中的细菌数量为 1820.1105=1.82108个；分离计数采取的接种方法是稀释涂布平板法；可能位置较近的两个或多个细菌形成一个菌落，与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较少。14请回答下列有关尿素分解菌的筛选和计数的问题：（1）从土壤中分离尿素分解菌时，所用培养基应以_作为唯一氮源。该培养基中含有 KH2PO4和 Na2HPO4，其作用有_（答出两点即可） 。对该培养基进行灭菌的常用方法为_。（2）在培养基中加入_指示剂可用来鉴定尿素分解菌，原理是尿素分解菌能合成和分泌_，将尿素分解成氨而使周围环境的
13、 pH 上升，从而使该指示剂变色。（3）若要检测土样中的尿素分解菌含量，应采用_法接种。若实验时取 0.1 mL 稀释液接种，发现稀释倍数为 104的 5 个平板上，长出的菌落数分别为 9、147、150、153 和 360，则每升土壤样液中的细菌数量为_个。【答案】 （1）尿素 为细菌生长提供无机营养、作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH稳定 高压蒸汽灭菌法 （2）酚红 脲酶 （3）稀释涂布平板 1.5l0 10【解析】土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH 等） ，同时抑制或阻止其他微生物生长。培养基选择9分解尿素的微生物的原理：培养基
14、的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源；缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素，配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。（3）微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中后者可以用于尿素分解菌的计数；计 数 时 应 该 选 择 菌 落 数 为 30-300 的 平 板 进 行 计 算 ， 因 此 符 合 要 求 的 平板 的 平 均 值 =（ 147+150+153） 3=150 个，则每升土壤样液中的细菌数量约为 15
15、00.11041 000=1.5l010个。15人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：（1）土壤中某些细菌能分解尿素是因为它们能合成_。土壤中这类细菌的代谢活动对植物十分重要，主要原因是_。（2）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，实验室常用的灭菌方法有_。（3）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。一般选择菌落数在 30-300 的平板进行计数，菌落数太多或太少都会增加实验误差，原因是_。（4）使用选择培养基分离得到菌种后，若要作进一步的鉴定
16、，通常还需要借助_10_的方法。例如，用含有_指示剂的培养基对能分解尿素的细菌进行鉴定。【答案】 （1）脲酶 土壤中的尿素只有被分解为氨后才能被植物利用（2）高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌、干热灭菌（3）菌落数太少，会增加实验偶然性；菌落数太多，出现多个细胞连在一起但只观察到一个菌落的情况增多，计数偏小（4）生物化学 酚红【解析】【分析】尿素分解菌广泛存在与土壤，其可以产生脲酶使尿素被分解成氨可使 pH 呈碱性，从而使添加酚红指示剂的鉴别培养基上的菌落周围会出现红色环带；分离尿素分解菌时常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌，灼烧灭菌，干热灭菌；在实验操作过程中，为防止杂菌污染操作要在酒精灯火焰旁操作，接种后的培养皿倒置于 37 的恒温培养箱中培养。（4）使用选择培养基分离得到的菌种还需要借助生物化学的方法进行鉴定，如用含有酚红指示剂的培养基对能分解尿素的细菌进行鉴定。
