1、 ICS 13.310 CCS A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA 法庭科学 硅藻rbcL 基因特异 片段检测 毛细管电 泳荧光检 测法 Forensic sciences Methods for detection of rbcL gene of diatom Capillary electrophoresis and fluorescence method （ 报批稿） - - 发布 - - 实施 中 华 人 民 共 和 国 公 安 部 发 布 GA/T XXXX XXXX GA/T XXXX XXXX I 前 言 GB/T 1.12020 1 SA
2、C/TC 179 GA/T XXXX XXXX 1 法庭科 学 硅 藻rbcL 基 因特异 片段检测 毛 细管 电泳荧光 检测法 1 范围 PCR -1,5- rbcL 2 规范性 引用 文件 GA/T382-2014 DNA GA/T383-2014 DNA 3 术语和 定义 3.1 rbcL 基因 rbcL gene -1,5- 4 原理 - rbcL DNA 5 仪器设 备 a) 2 L 10 L 100 L 1000 L b) 12000 r/min c) PCR d) PCR e) GA/T XXXX XXXX 2 f) g) h) 6 试剂耗 材 6.1 DNA Powersoil
3、 DNA a) b) c) 20 mg/mL K d) e) f) DNA g) h) i) DNA 6.2 SYBR Green PCR a) rbcL F b) rbcL R c) SYBR Green PreMix 5 U/L - 6.3 PCR-CE a) rbcL F - b) rbcL R c) PCR PreMix Taq 5 U/L - d) e) 75 bp500 bp f) POP-4 g) h) PCR 0.2 mL i) 96 j) 0.5 mL 2 mL 7 实验室 环境 要求 GA/T382-2014 8 操作步 骤 GA/T XXXX XXXX 3 8.1 样本准
4、 备 8.1.1 0.5 g 600 L DNA 8.1.2 DNA DNA DNA 0.51.0 ng/ L -20 8.2 实时荧 光定量 PCR 检测 20 L qPCR SYBR Premix Ex Taq II 10 L 0.5 L DNA 2 L 7 L A A.1 8.3 PCR-CE 毛 细管 电泳 分离 检 测 8.3.1 样品PCR准备 8.3.1.1 PCR-CE 8.3.1.2 PCR PCR-CE 20 L A A.2 8.3.1.3 PCR 8.3.1.4 PCR A A.3 8.3.1.5 8.3.2 毛细管 电泳 分离 检测 8.3.2.1 1 mL 50 L
5、8.3.2.2 96 10 L 1 L 3000 r/min 30 s 8.3.2.3 3 min 3 min 8.3.2.4 96 8.3.2.5 9 结果判 断 9.1 PCR QuantStudio 6 and 7 Flex Real-Time GA/T XXXX XXXX 4 PCR System Software, v1.0 Ct 35 A A.4 A A.5 Ct 35 9.2 A A.6 10.6 9.3 10 注意事 项 10.1 Premix Taq -20 4 -20 10.2 150 RFU RFU 10.3 DNA 10.4 10.5 3500 ID-X 0.5 bp
6、10.6 DNA 8.3 10.7 PCR GA/T XXXX XXXX 1 附录A （资料 性） 法庭科 学 硅藻rbcL 基 因 特 异片段 检 测 毛 细管 电泳 荧 光检测 法相 关资 料 A.1 A.1 rbcL PCR 表A.1 硅藻rbcL 基因 特异 片段实 时荧 光定 量PCR检测体 系参 考的 反应 参数 s PCR 95 300 1 95 5 40-45 60 25 95 1 min 60 1 min 95 1 A.2 A.2 rbcL PCR-CE 表A.2 硅藻rbcL 基因 特异 片段实 时荧 光定 量PCR-CE 扩增检 测体 系参 考组 分 (L) PreMix
7、 Taq 10 10 mol/L 1.5 7.5 DNA 0.5 1.0 ng 1.0 DNA 0.5 1.0 ng DNA 20 L A.3 A.3 rbcL PCR-CE 表A.3 硅藻rbcL 基因 特异 片段实 时荧 光定 量PCR-CE 扩增检 测体 系参 考的 反应 参数 min 95 10 1 94 1 35 47 1 / 72 1 / 72 7 1 4 / / GA/T XXXX XXXX 2 A.4 rbcL qPCR A.4 图A.4 rbcL 引物 扩增 硅藻 标准株 的qPCR 扩 增曲 线 A.5 rbcL qPCR A.5 图A.5 rbcL 引物 扩增 硅藻 标准株 的qPCR 熔 解曲 线 GA/T XXXX XXXX 3 A.6 rbcL A.6 图A.6 rbcL 引物 扩增 硅藻 标准株 标准 株的 电泳 图谱
