1、I65.020.30 B 44 道童3中华人民共和国国家标准GB/ T 14926.18 14926. 32- 2001 GB/ T 14926. 5614926. 64- 2001 实验动物微生物学检测方法(4)Laboratory animal- Microbiological examination methods 2001- 08 -29发布2002 - 05 -01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局GB/ T 14926.24- 2001 前本标准是对GB/T14926.24-1994(实验动物小鼠肺炎病毒检验方法的修订。删除了血凝抑制试验检测方法，对个别文字作了修改。本
2、标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:屈霞琴。本标准于1994年1月首次发布。19 1 范围中华人民共和国国家标准实验动物小鼠肺炎病毒检测方法Laboratory animal- Method for examination of pneumonia virus of mice (PVM ) 本标准规定了小鼠肺炎病毒CPVM)的检测方法、试剂等。本标准适用于小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠PVM的检测。2 引用标准GB/ T 14926.24- 2001 代替GB/T14926. 24- 1994 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本
3、标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/ T 14926. 50一2001实验动物酶联免疫吸附试验GB/ T 14926. 51- 2001 实验动物免疫酶试验GB/ T 14926.52- 2001 实验动物免疫荧光试验3 原理根据免疫学原理，采用PVM抗原检测小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠血清中PVM抗体。4 主要试剂和器材4. 1试tflj: 4. 1.1 ELISA抗原4. 1- 1- 1 特异性抗原PVM感染小鼠待发病后取肺脏，研磨，制成10%悬液，3000r/min离心10min后取上清液感染BHK21细胞，
4、吸附1.52 h，加维持液培养1014d，当细胞病变达+时收获。冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成ELISA抗原。4.1. 1.2 正常抗原BHK21细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液。4. 1- 2 抗原片PVM感染BHK21细胞，培养57d，病变达十十+十+时，将细胞用膜酶消化分散，PBS洗涤，涂片。室温干燥后，冷丙酣固定10min，一20C保存。4. 1. 3 阳性血清PVM免疫清洁或SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠所获得的抗血清。4. 1- 4 阴性血清中华人民共和国国家质量监督检验检症总局2001-08 -29批准2002- 05
5、-01实施20 GB / T 14926.24- 2001 SPF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清。4. 1. 5 酶结合物辣根过氧化物酶标记羊或兔抗小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠IgG抗体，用于检测相应动物血清抗体。辣根过氧化物酶标记葡萄球菌蛋白A(SPA)可用于小鼠、豚鼠、地鼠血清抗体的检查。4.1.6 异硫氨酸荧光素标记羊或兔抗小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠IgG抗体，用于检测相应动物血清抗体。4.2 器材4.2.1 酶标仪。4.2.2 荧光显微镜。4.2.3 普通显微镜。4. 2.4 37.C培养箱或水浴箱。5 检测方法5. 1 采用ELISA方法(见GB/T14926. 50-2001)进行血清学检测。5
6、.2 采用IFA方法(见GB/T14926.52-2001)进行血清学检测。5. 3 采用lEA方法(见GB/T14926.51-2001)进行血清学检测。6 结果判定对阳性检测结果，选用同一种方法或另一种方法重试。如仍为阳性则判为阳性。7 结果报告根据判定结果，作出报告。21 CON-3.N叮lg.Nm叮CON-s.N叮Fj.N叮H阁。H国。华人民共国家标准实验动物微生物学检测方法(4)GB/ T 14926. 18- 14926. 3-2001 GBj T 14926.56- 14926.64- 2001 国和中 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售4峰印张4字数102千字2002年2月第一次印刷开本880X12301/ 16 2002年2月第一版印数1-2000定价35.00元* 书号:155066 .1-18099 网址版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533* 595- 548 科目 GB/ T 14926.18-2001
