1、ICS 13.310 A 92 睛!中华人民共和国国家标准GB/T 29636-2013 疑似毒品中甲基苯丙肢的气相色谱、高效液相色谱和气相色谱-质谱检验方法GC ,HPLC and GC-MS examination methods for methylamphetamine in suspected drug 2013-07-19发布ft飞咆监土生，告;mFHiL/ 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2013-11-01实施发布GB/T 29636-2013 前本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机
2、构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析标准化分技术委员会(SAC/TC179/SC 1)提出并归口。本标准起草单位z公安部物证鉴定中心、上海市公安局物证鉴定中心。本标准主要起草人z高利生、张玉荣、张春水、郑耳、王跨陡、张润生、钱振华、徐鹏、黄星、王一、汪蓉、王蔚昕、常颖、刘克林。I 1 范围疑似毒品中甲基苯丙肢的气相色谱、高效液相色谱和气相色谱回质谱检验方法GB/T 29636-2013 本标准规定了甲基苯丙脏的气相色谱质谱(GC-MS)定性分析和气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)定量分析。本标准适用于毒品案件固体样品中甲基苯丙腊的定性定量检验鉴定。2
3、 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注目期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GA/T 122 毒物分析名词术语JJF 1059. 1-2012 测量不确定度评定与表示3 术语和定义GA/T 122界定的术语和定义适用于本文件。4 原理本方法采用内标法或外标法进行质量控制，对疑似毒品固体样品中的甲基苯丙胶进行有机溶剂提取，用气相色谱-质谱联用(GC-MS)进行定性分析，用气相色谱氢火焰离子化检测器(GC-FID)或高效液相色谱(HPLC)对甲基苯丙胶进行定量分析。5 试剂及标准物质、仪器及量器具5.
4、1 试剂及标准物质5.1.1 GC、GC-MS分析用试剂及标准物质所用试剂均为分析纯，分析用试剂及标准物质包括za) 甲薛;b) 可溯源标准物质z甲基苯丙腊zc) 外标定量用1.0 mg/mL甲基苯丙肢标准储备液z称取甲基苯丙腊标准物质(根据标准物质纯度和盐型换算后等于50.0mg的甲基苯丙胶)，放入50mL容量瓶中，加入20mL甲醇振荡需解后，用甲醇稀释至刻度，配制成1.0 mg/mL甲基苯丙股标准储备液，置冰箱冷冻保存，保存时间为6个月5d) 外标定量用0.1mg/mL甲基苯丙腊标准工作液:移取1.0mg/mL甲基苯丙胶标准储备液5 mL加人到50mL容量瓶中，用甲晖稀释至刻度，配制成0.
5、1mg/mL甲基苯丙股标准工作GB/T 29636-2013 液，置冰箱中冷藏保存，保存时间为3个月3e) 外标定量用0.01mg/mL甲基苯丙腊标准工作液z移取0.1mg/mL甲基苯丙胶标准工作液1 mL加人到10mL容量瓶中，用甲薛稀释至刻度，配制成0.01mg/mL甲基苯丙胶标准工作液，置冰箱中冷藏保存，保存时间为1个月2f) 内标物:iE十烧;g) 内标物禧液z称取正十皖(根据标准物质纯度换算后等于100.0mg的正十烧)，放人100mL 容量瓶中，加入约20mL甲醇，振摇至样品溶解，超声5min，用甲醇定容至刻度，配制成1. 0 mg/mL正十烧内标储备液(置于冰箱中冷冻保存，保存时
6、间为12个月)，使用时用甲酶稀释到0.1mg/mL，内标物溶液应置于冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用，保存时间为2个月2h) 内标法绘制标准工作曲线用标准工作液z称取甲基苯同股标准物质(根据标准物质纯度和盐型换算后等于2.mg的甲基苯丙胶)，放入50mL容量瓶中，加入队1mg/mL正十烧溶液20 mL，振荡榕解后用.1mg/mL正十烧溶液稀释至刻度，配制成0.5回g/mL甲基苯丙腊标准溶液，并依次用。.1mg/mL正十烧榕液稀释到0.2mg/mL、0.1mg/mL、0.05mg/mL、0.01 mg/mL戴度。5.1.2 HPLC分析用试剂及标准物质2 所用试剂均为色谱纯，实验用水
7、为高纯水，分析用试荆及标准物质包括:a) 甲醇。b) 乙腊。c) 水合磷酸二氢铀。d) 浓磷酸。e) 磷酸锺冲溶液(0.3mol/L，pH=3):称取水合磷酸二氢铀固体93.6g，:bn人200mL高纯水溶解;取浓磷酸2mL，稀释至10mL，配置成稀磷酸溶液;逐滴加入上述稀磷酸榕液调节NaH2P4溶液的pH至3.O( :l: O. 2)(约加入8mL9 mL)，倒入2000mL的容量瓶中，加人高纯水稀释至刻度，摇匀。过捷、超声，即可使用。f) 内标物z色股。g) 内标溶液配制称取色胶粉末51.03 mg，放人500mL的容量瓶中，加入甲薛(色谱纯稀释到刻度，振摇至样本溶解，超声5min，配制成
8、0.1mg/mL的色胶榕液p内标溶液应存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出就至室温后方可使用，保存时间为2个月。h) 可溯源标准物质:甲基苯丙蹄。i) 2.7 mg/mL甲基苯丙胶标准溶液z称取盐酸甲基苯丙胶标准品粉末约3.6mg，放人10mL的容量瓶中，加人内标溶液稀释到刻度，振摇至样本溶解，超声5mina按照实际称量质量。反算出溶液的浓度，贴上标签，存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为2个月。j) 2.2 mg/mL甲基苯丙胶标准溶液z取甲基苯丙腊浓度为2.7mg/mL的标准溶液4mL，放入5 mL的容量瓶中，加入内标溶液稀释到刻度，振摇至样本溶解，超声5min。按照
9、实际数值，反算出榕液的浓度，贴上标签，存放在冰箱冷藏中保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为2个月。k) 1. 24 mg/mL甲基苯丙腊标准溶液z取甲基苯丙胶浓度为2.7mg/mL的标准榕液2.3mL，放人5mL的容量瓶中，加入内标溶液稀释到刻度，振摇至样本溶解，超声5mina按照实际数值，反算出溶液的浓度，贴上标签，存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为2个月。GB/T 29636-2013 1) 0.46 mg/mL甲基苯丙腊标准溶液z取甲基苯丙股浓度为2.7mg/mL的标准溶液0.85mL, 放人5mL的容量瓶中，加入内标榕液稀释到刻度，振摇至样本溶解，
10、超声5min.按照实际数值，反算出溶液的浓度，贴上标签，存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为2个月。m) O. 06 mg/mL甲基苯丙胶标准溶液z取甲基苯丙股浓度为0.46mg/mL的标准溶液0.65 mL，放人5mL的容量瓶中，加入内标榕液稀释到刻度，振摇至样本榕解，超声5min。按照实际数值，反算出溶液的浓度，贴上标签，存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为2个月。n) 0.006 mg/mL甲基苯丙胶标准溶液z取甲基苯丙股浓度为0.06mg/mL的标准榕液1mL，放入10mL的容量瓶中，加入内标溶液稀释到刻度，振摇至样本搭解，超声5mi
11、n。按照实际数值，反算出溶液的浓度，贴上标签，存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为2个月。5.2 仪器及量器具5.2.1 GC、GC-MS分析用仪器及量器具GC、GC-MS分析用仪器及量器具包括:a) 气相色谱仪，配有火焰离子化检测器(FID); b) 气相色谱-质谱联用仪，配有电子轰击源(El); c) 高速离心机，最大转速8000 r/min; d) 电子天平，实际分度值d=O.Olmg; d 电动振荡器Ff) 10 mL和1mL移液器或移液管zg) 10 mL瓶口移液器。5.2.2 HPLC分析用仪器及量器具HPLC分析用仪器及量器具包括za) 液相色谱仪，配有
12、二极管阵列检测器zb) 电子天平，实际分度值d=O.Olmg; c) 2000 mL容量瓶zd) 1 mL移液器或移液管。6 定性分析6. 1 样晶制备样品充分研磨混匀，称取约10mg，加入10mL甲醇，密封井振荡10min，离L后取上清液，用GCMS分析。如果样品搭液中目标物浓度过低，可适当增加样品称量量2倍10倍。同时用GC-MS分析0.002mg/mL的甲基苯丙胶标准溶液进行质量控制。6.2 气相色谱-质谱联用仪参考条件以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整=a) 离子源:EI;b) 质量范围:40amu500 amu; 3 GB/T 29636-2013 c)
13、采集方式z全扫描(Scan);d) 色谱桂类型:DB-5MS石英玻璃毛细柱(5%苯基+95%聚二甲基硅氧烧)或其他等效柱ze) 色谱柱参数:30mXO. 25 mmXO. 25m; f) 色谱柱温程z初始温度60C，以15C/min升温至280C ，保持15min; g) 进样口温度:280 C; h) 传输线温度:250.C; i) 离子源温度:230C; j) 分流比:20:1; k) 载气z高纯氮气(He); 1) 柱流量(恒流):1.0 mL/min; m) 倍增器电压z参考调谐状况:n) 溶剂切割:3min二/ / 7 定量分析/ 7. 1 气相色谱外标法7. 1. 1 含量范围预分
14、析预分析的目的在于要对样品中的甲基苯丙股含量进行初测，以计算准确定量分析时所用样品的称量质量，从而保证准确定量时样品溶液中目标物的最终浓度尽可能接近所使用标准工作液的浓度。称量约10mg样品置于带盖试管中，加入10mL甲醇振荡使其需解，离心后取上清液，用GC-FID分析，采用0.1mg/mL的甲基苯丙胶标准工作液作为定量参照。如果样品溶液中目标化合物的浓度过高，可适当减少样品称量质量，或将样品提取液用甲酶稀释后进行分析。如果样品溶壤中目标化合物的浓度过低，可适当增加样品称量质量，或将样品提取液挥干、定容后进行分析。按式(1)计算样品中目标组分的含量。Co X A X V1 X (V2 + V.
15、 ). . n 。-Ao XV2 X句-X 100 Yo . .-，. .( 1 ) 式中zw一一样品中甲基苯丙腊的含量，%;Co . 标准工作液中甲基苯丙腊的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL); A-一样品溶液中甲基苯丙胶的色谱峰面值FV1一一样品溶液初次定容体积，单位为毫升(mL);V3一一将民稀释时加人甲醇的体积，单位为毫升(mL);4 标准工作液中甲基苯丙肢的色谱峰面积值zV 2 从V1中移取样品溶液的体积，单位为毫升(mL);m一一用于测定的样品的称量质量，单位为毫克(mg)。7. 1. 2 准确定量7. 1. 2. 1 称量质量的计算根据预分析中甲基苯丙胶含量测定结果，选择合适的
16、定容体积、稀释倍数(样品提取操作参数选择参见表A.l)，并按式(2)计算出样品称量质量(m)0 式中EC. XVXD m=X 100 w m一一称量质量，单位为毫克(mg); Co -标准工作液中甲基苯丙腊的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL); V一一初次定容体积，单位为毫升(mL);D一一稀释倍数pw一一-样品中甲基苯丙胶的预分析含量，%。7. 1. 2. 2 样晶提取GB/T 29636-2013 ( 2 ) 根据7.1.2.1计算结果，平行称取样品6份，根据预分析含量范围4日人相应初次定容体积的甲醇。密封并振荡10min;如果样品溶攘需要稀释，移取1mL样品提取液至另一试管中，按照稀释
17、倍数进行稀释定容，离心后取上清液用GC-FID分析。样品提取操作参数选择参见附录A中表A.10 7. 1. 2. 3 气相色谱仪参考条件以下为参考条件，按照本法所获得的气相色谱图参见附录B中图B.1，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整za) 检测器;FID;b) 色谱柱型号:DB-5石英玻璃毛细柱(5%苯基+%聚二甲基硅氧烧)或其他等效柱zc) 色谱柱参数:30rnXO. 25 mmXO. 25m; d) 色谱柱温程z初始温度80.C.以10.C/min升温至200t.以40t/min升温茧280t.保持3 min; e) 进梓口温度:280c ; f) 检删器温度:300C; g
18、) 载气:高纯氯气CN2); h) 分流比:20: 1; i) 桂流速(恒流):1mL/min; j) 燃烧气:Hz;k) 燃烧气流速z按仪器默认值z1) 助燃气z空气sm) 助燃气流速z按仪器默认值97. 1. 2. 4 含量计算按式(1)计算样品中甲基苯丙肢的含量。7.2 气相色谱内标法7.2. 1 标准工作曲线绘制及监测7.2. 1. 1 标准工作曲线绘制采用0.5mg/mL、0.2mg/mL、0.1mg/mL、0.05mg/mL、0.01mg/mL等5个浓度绘制成线性范围为O.01 mg/mLO. 5 mg/mL的甲基苯丙胶标准工作曲线。标准工作曲线应随内标储备液的更换而重新绘制。5
19、GB/T 29636-2013 7.2. 1. 2 标准工作曲线监测采用5.1.1h)中被度为0.05mg/mL和0.5mg/mL的标准物质搭液作为监测样品，建立标准工作曲线时，每个监测样品各分析10次，计算甲基苯丙股与正十烧峰面积比值的平均值及标准偏差(SD)。每次检验前先分析监测样品，若监测样品的结果在平均值士3SD之间，则标准工作曲线有效，否则，应重新绘制标准工作曲线。7.2.2 内标定量7.2.2. 1 提取操作平行称取样品2份各约30mg，加人0.1mg/mL内标溶液60mL，充分振荡，离心后用GC-FID分析，采用7.2.1.1的标准工作曲线进行定量计算。如样品溶液中目标物浓度低于
20、0.01mg/mL时，可适当增加样品称量质量2倍10倍。7.2.2.2 气相色谱仪参考条件同7.1.2. 3. 7.2.2.3 含量计算根据7.2.1.1的标准工作曲线计算样品含量。7.3 遭相色谱内标法7.3.1 标准工作曲线绘制及监测7.3. 1. 1 标准工作曲线绘制采用0.06mg/mL、0.46mg/mL、1.24 mg/mL、2.2mg/mL、2.7mg/mL等5个浓度绘制成建立线性范围在O.06 mg/mL2. 7 mg/mL的标准工作曲线。标准工作曲线应随内标储备液的更换而重新绘制。7.3. 1. 2 标准工作曲线监测采用5.1.2i)中2.7mg/mL的标准物质溶液和5.1.
21、2m)中0.06mg/mL的标准物质溶液作为监测样本，每次检验前先分析监测搭液。若监测样本的结果在士2SD之间，则工作曲线有效。7.3.2 定量分析7.3.2. 1 提取操作称取样本2份，每份2.3 mg2. 7 mg，分别放人自动进样器小瓶中，用移液器加入1mL的内标溶液，振荡至样本充分榕解，过膜，装入自动进样小瓶，供液相色谱仪分析。7.3.2.2 渡相色谱仪参考条件6 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整zu 检测器z二极管阵列zb) 色谱柱参数:5mODS ,250 mmX4. 6 mm; c) 柱温:35C; d) 进样体积:5.0L;GB/T 29636-2
22、013 e) 流动相z缓冲液z乙睛(87: 13); f) 流速:1. 0 mL/min; g) 检测波长:250nm，带宽为4nm，参比波长为400nm，参比带宽为100nmo 7.3.2.3 含量计算根据7.3.1.1的标准工作曲线计算样本含量。8 结果评价8. 1 定性结果评价8. 1. 1 GC-MS分析O.ooZmg/mL甲基苯丙胶标准榕液，检掏出甲基苯丙胶m/z58特征离子峰，样品浓度10mg/mL，未检测出甲基苯丙胶m/z58特征离子峰，阴性结果可靠。检验结果表述为z样品中未检出甲基苯丙腊成分。8. 1.2 如果样品出峰时间与甲基苯丙股标准物质保留时间一致，且质谱特征峰及其丰度比
23、与甲基苯丙胶标准物质致(甲基苯丙腰的特征窝子:m/z58(基峰)、mlz91、m/z134、m/z148，甲基苯丙腔的质谱图见图B.2)，阳性结果可靠。检验结果表述为:样品中检出甲基苯丙股成分。8.2 定量蜡果评价8.2. 1 气相色谱外标法8.2. 1. 1 异常值检验根据Grubbs方程，按式(3)对6份(或5份)平行测定数据进行可疑值判别，如果GiGn侧，则数据有效，否则应剔除该数据，但只能剔除1个数据，否则本次测定元效，需要重新检验。式中zXi一一可疑值Jz。一一平均值EGi = I Xi -XQ I 一s一一-6个(或5个)数据的单次测定挥准差。当测定次数=6时，G6(9日=1.&2
24、2;当测定次数n=5时，G，(剧=1.67208.2. 1. 2 含量结果计算以6份或5份)样品含量测定的平均值作为含量结果。8.2.2 气相色谱肉标法8.2.2. 1 含量结果有效性. ( 3 ) 对两个平行测定数据按式(的进行相对相差(RD)计算，RD不超过10%，数据有效p否则，应重新检验。|X1 -X2 I =X Z 100% ( 4 ) 式中zRD 一一相对相差，%;7 GB/T 29636-2013 X1、X2-一一两个样品平行定量测定的含量数值;立一一两个样品平行定量测定含量的平均值。8.2.2.2 含量结果计算以两份样品测定含量的平均值作为含量结果。8.2.3 渡相色谱内标法8
25、.2.3. 1 含量结果有效性同8.2.2.1。8.2.3.2 含量结果计算同8.2.2.208.3 含量结果表述定量检验完成后，检验结果应表述为:从样品中检出甲基苯丙胶成分，其中甲基苯丙股含量为xx. x%。8.4 测量不确定度的评定与表述如需提供测量不确定度，测定结果的不确定度评定与表述应符合JJF1059. 1-2012的要求。8 GB/T 29636-2013 附录A(资料性附录)外标定量法样晶提取操作参鼓选择表外标定量法样品提取操作参数选择见表A.1.表A.1外标定量法样晶提取操作参数选择表预分析含量/%初次定容体积/mL稀释倍数标准溶液浓度/(mg/mL)50-100 20 21
26、0.1 3050 20 11 0.1 1030 10 11 0.1 510 30 0.1 25 20 0.1 12 10 0.1 0.11 10 0.01 -L一一一一一-9 GB/T 29636-2013 附录B(资料性附录甲基苯两股相关谱圄甲基苯丙腊的色谱图及质谱图见图B.1和图B.2.uV(X10 000) 5.0一一一一一4.0一一-li-+乱。一一-I.-卜一一-卜一-何一-一一-一 自:1: 2.0卡一一11.一卜-.t. i i l甲基着丙眩 1.0卜一一一+t-十- -t-t LiiKt jj i4:A i屯。.0一一一-.-_-一12.5 忌。7.5 10.0 12.5 1且
27、0mm 固B.1 甲基苯丙服气相色谱圈丰度10.0 3 5p 9.0 8.0 7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1. 0 0.0 7.7 40 50 60 70 80 固B.2甲基苯丙股质谱圄10 2日|gmNH阁。华人民共和国家标准疑似毒晶申甲基苯丙脏的气相色谱、高效渡相色谱和气相色谱质谱检验方法GB/T 29636-2013 国中* 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(10004日网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销铸开本880X 1230 1/16 印张1字数22千字2013年9月第一版2013年9月第一次印刷* 书号:155066.1-47416 18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107定价打印日期:2013年9月22日F002
