1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SNjT 1951-2007 进出口保健食品中伐地那非、西地那非、他达那非的检测方法液相色谱-质谱/质谱法Determination of vardenafil ,sildenafil and tadalafil in health foods for import and export-LC-MSjMS method 2007-08-06发布2008-03-01实施4面向善泣翠玉:中华人民共和国H，Y叮国家质量监督检验检菇总局前言本标准的附录A和附录B均为资料性附录。本标准EI回家认证认可监17管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国湖南出入境检验检疫
2、局起草。本标准主要起草人z王美玲、万向阳、戴华、李拥军、王正良、主象贤、黄挥。本怀Illi系首次发布的出人统检验检疫行业标准。S:-I/T 1951-2007 1 范固进出口保健食品中伐地那非、西地那非、他达那非的检测方法液相色谱-质谱/质谱法SN/T 1951-2007 本标准规定了保健食品巾伐地那非、西地那非、他达那非的液相包i曾一质i苦/!Jn吉检测方法。本标准适用于片开rJ、胶囊剂和陆般被剂类保伶食椅中校常常ln两地那非、他达那非的检测。2 J!rJ定方法I 1 2. 1 方法键要甲幽一-_中叩-;./ 片剂、胶囊剂试样中的伐地那非、困地那才以他这那才ifll号邮超声提取，提取液经稀释
3、后过滤。口服溶液剂经直接稀释后过滤，用配有也喷雾黄宇wl.的浓丰日谱质i古/质谱仪进行测定，外标法定量。2.2 试剂和材料/F J/ ./ / 所有试齐rJ除特殊注明外，均为吩忻统，水为二3比昌在每每42.2. 1 乙脯z高效液相色谱级。2.2.2 叩醉g高效液丰H，肯级。2.2.3 冰乙酸:优级纯。2.2.4 2.2.5 2.2.6 2.3. 1 2.3.2 超声波沂洗器。2.3.3 旋涡Itt匀器。2.3.4 电子天平感量1mg。2.3.5 研钵。2.4 测定步骤2.4. 1 试样的制备2. 4. 1. 1 片剂随机取同一批号的供试品20片，研细为试样。SN/T 1951-2007 2.
4、4. 1. 2 硬胶囊随机取同一批号的供试品20粒，倾出所有内容物，研细为试样。2. 4. 1. 3 软胶囊随机取同一批号的供试品20粒，将内容物全部挤到一离心管中，充分混匀后，作为试样。2. 4. 1. 4 口服溶液剂随机抽取同一批号的供试品10支(瓶).取等量体积样品到同一容器中混匀，作为试样。2.4.2 提取2.4.2. 1 片剂、硬胶囊、软胶囊试样称取1g试样(精确到0.01g)于100mL容量瓶中.加入90mL月1醉，盖上盖混匀，置于超声波清洗器中越声1h.冷却至室温后用甲醇定容至刻度，混匀。取1.0 mL于10mL容量瓶中.Y日0.1mol/L 盐酸十甲醉混合液(2.2.5)定容后
5、混匀，溶液过0.45m微孔滤膜后.供液相色-质i击/质谱仪测定。2.4.2.2 口服溶液lflJ准确移取1.0 mL试样于10mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸十甲醇混合液(2.2.5)定容，混匀，溶液过0.45m微孔滤膜后，供液相色谱质i汗/谱仪测定。2.4.3 测定2.4.3. 1 液相色谱-质谙/质谱条件a) 色i普柱z柱填料为十八炕基硅饺键合相的包i击性.2.1X 150 mm.5m 戎相当手-; b) 流动相g梯皮洗脱程序见表1，。流速:0.20mL/min, d) 柱温:40C, 的进样量:10IL, f) 离子源2屯喷雾离子源gg) 扫描方式正离子:h) 检测方式2多反应HE测
6、(MRM):i) 雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气等气体使用前应调节各气体流是以使质i苦灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录A:j) 喷雾电压、去集簇屯庄、碰擅自E等Ll!.压Ui应优化至最优灵敏度，参考条件参见附录A，k) JIi担l离子对(m/z):他达那非390.4/268. 3(定最高子对人390.4/135.1、390.4/169.1，i内地那非475.3/100.(定最离子对)、475.3/58.0、475.3/311.4 :fJUUl非489.5/151.1(定应离子对)498.5/72.1、489.5/312.I。表1流动相梯度洗脱程序时间/min0.1%乙股水济液/%乙腊1
7、%0.00 85.0 15.0 3.00 85.0 15.0 8.00 5.0 95.0 13.00 5.0 D5.0 13.01 85.0 15.0 20.00 85.0 15.0 2.4.3.2 液相色谱质谱/质谙测定按照2.4.3.1液相色消质i白/质i昔条件测定样液和标准工作济液，标准曲线法测定样液中的伐地那非、西地那非、他达那非含量。样液中被坦l物的响应值应在仪器线性if，J之内，如果超出仪器线性范2 SN/T 1951-2007 围，应用。.1mol/L盐酸十甲醇混合液(2.2.引进行适当稀释。在上述色i苦条件下，伐地那非、西地那非、他达那非的质量色W峰保留时间约为10.5min、
8、10.7min、12.4mino标准溶液的提取离子流色谱图参见附录日中的图B.l。在相同的实验条件下，样液巾被扭l物的质量色谱曲在保留时间与标准工作溶液一致，并且在扣除背景后的样品包谱图中，所选择的离子对均出现，各定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液的离子相对丰度一致，误差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被视物。表2定性确证时相对离子车度的最大允许误差相对离子丰度/%允许的相对误差/%50 士2020-50 :i: 25 10-20 土3010 土502.4.3.3 空白试验除不加试样外，均按上述lJl定步骤进行。2.5 结果计算和表述用液相包i吉质i苦/J!JJtt数据处理机
9、或按照式(1)计算样品中伐地那非、西地那非、他达那非含量，计算结果需扣除空白。式中-X(A-Ao)cs-v 一As m ( 1 ) X 试样中伐地那非、西她那非、他达那非的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)或者毫克每升(mg/U; A 样液中伐地那非、西地那非、他达那非的峰面积或峰高gCs一一标准工作液中伐地那非、西地那非、他达那非的浓度，单位为微克每毫升(g/mU;As 标准工作液中伐地那非、西地那非、他达那非的峰面积或峰高;V 样液最终定容体积，单位为毫升(mL);A，一一空白实验液中伐地那非、西地那非、他达那非的峰面积或峰高;m一一-最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)或者所代表的
10、试样体积单位为毫升(mL)o3 测定低限、回收率3. 1 测定低限本方法片剂、胶囊剂样品中伐地那非、两地那非、他达那非的测定低限均为1.0 mg/kg;测定口服溶液剂样品中伐地那非、西地那非、他达那非的测定低限均为0.010mg/L。3.2 回收率3.2. 1 保健食品中伐地那非添加浓度及其回收率数据片剂、胶囊剂添加浓度在1.0 mg/kg 10 mg/kg时，凹收率在89.3%104%之间。口服溶液添加浓度在O.010 mg/LO. 10 mg/L时，囚收率在94.5%1I4%之间。3.2.2 保健食品中西地那非添加浓度及其回收率蚊据片剂、胶囊剂添加浓度在1.0 mg/kg 10 mg/kg
11、时，回收率在83.8%101%之间。口服溶液添加浓度在O.010 mg/LO. 10 mg/L 时，回收率在85.4%108%之间。3.2.3 保健食品中他达那非添加浓度及其回收率数据片剂、胶囊剂添加浓度在1.0 mg/kg 10 mg/kg 时，同收率在81.5%108%之间。口服溶液添加浓度在O.010 mg/LO. 10 mg/L时，回收率在85.7%100%之间。3 SN/T 1951-2007 附录A(资料性附景)API 4 000 LC-MS/MS系统检测伐地那非、西她那非、他达那非参考条件API 4 000 LC-MS/MS系统屯喷雾离子源参考条件2a) 窗帘气(CUR):20.
12、 00 Psi, b) 雾化气(GS): 40.00 Psi, c) 辅助加热气(GS2):45. 00 Psi, d) 碰撞气(CAD):7. 00 Psi, e) 离子源喷雾器电压(lSl: 5f罚Jf) 喷雾针温度50 :1: 20 20-50 :1: 25 10-20 :1: 30 ,;(10 士502. 4. 3. 3 Blank test The operation of the blank test is the same as that described in the method of determination but 10 SN!T 1951-2007 without
13、addition of sam口le2.5 Calculation and expression of result Calculate the content of vardenafil , sildenafil and tadalafil in the test sample by LC!MS/MS data pro cessor or according to the formula (1) , the blank value should be subtracted from the result of calcu lation, X=A町-Ao)csV-. ( 1 ) Asm whe
14、re X-the content of tadalafil , sildenafil , vardenafil in the test sample , mg/kg or mg/L; A-the peak area or peak height of tadalafil , sildenafil , vardenalil in the sample solution, cs-the concentration of tadalalil , sildenalil , vardenalil in the standard working solution，g!mL， As-the peak are
15、a or peak height 01 tadalalil , sildenafil , vardenalil in the standard working solution , V-the final volume 01 the sample solution , mL, A。一thepeak area or peak height 01 tadalalil , sildenafil , vardenalil in the blank solution; m-the corresponding mass 01 the test sample in final sample solution
16、 , g,or the corresponding vol ume 01 the test sample in linal sample solution, mL. 3 Limit of determination and recovery 3. 1 Limit of determination The limit 01 quantification is 1.0 mg/kg for troche, capsule and soft capsule and O. 010 mg/L for oral solution in this method. 3. 2 Recovery 3.2.1 Acc
17、ording to the experiment data , the lortified concentrations 01 vardenalil in health foods and its corresponding recoveries are; Spike 1.0 mg/kg-10 mg/kg in capsu怡，troche and soft capsule , the recovery is 89.3%-104%. Spike O. 010 mg/L-O. 10 mg/L in oral solution , the recovery is 94.5% -114%. 3.2.2
18、 According to the experiment data , the fortilied concentrations 01 sildenalil in health foods and its corresponding recoveries are, Spike 1. 0 mg/kg-10 mg/kg in capsule , troche and soft capsule , the recovery is 83. 8% -101 %. 11 SN/T 1951-2007 Spike 0.010 mg/L-0.10 mg/L in oral solution. the reco
19、very is 85.4%-108%. 3.2.3 According to the experiment data. the fortified concentrations of tadalafil in health foods and its corresponding recoveries are: Spike 1.0 mg/kg-10 mg/kg in capsule.troche and soft capsu怡.the recovery is 81. 5 % -108 % Spike 0.010 mg/L-0.10 mg/L in oral solution.the recove
20、ry is 85.7%-100%. 12 SN/T 1951一2007Annex A ( informative) Referenced conditions for analysing vardenafil, sildenafil and tadalafil by API 4000 LC-MS/MS system口Referenced conditions for electtospray ionization source of API 4 000 LC-MS!MS system: a) Curtain gas (CUR): 20.00 Psi; b) Nebulizer gas (GSl
21、l: 40.00 Psi; c) Auxiliary gas (GS2): 45.00 Psi; I d) Collision gas (CAO): 7.00Psr;-一一一m二二./ e) f) Probe temperature(TEM) : g) Transitions for confirmati Table A. 1 T Target Q1 analyte 们n/z489.58 vardenafil 489.5 489.5 475.3 sildenafil 475.3 475.3 390.4 tadalafil 390.4 390.4 L一a Quantitation ion pai
22、r. fo /习151. 与2._J. firma而扫而quantif-一一-一一一-主飞DPIV 1 J20lJO飞1.22.0J 1如J11110rOO 58.0 110 口。/ 311. 4 v 11口。/ 手;J 2函:-3-70.o. 135.1 70.00 169.1 70.00 see table A. 1. P, CE CE/V CXP/V 60.00 13.口。85.00 13.00 55.0口19.00 42.85 17.00 85.00 10.00 41.70 23.0日18.50 17.00 31.40 23.00 50.00 13.00 1) Nmercal stat
23、ement:the reference mass parameters in Annex A are accomplished bV API4 000 LC/MS/MS. the equipment and its ty阳involvedin the standard method is only for reference and not related to ancomlercial aim , and the analysts are encouraged to use equipments of different corporation or different type 13 SN
24、/T 1951-2007 14 Annex B ( informative) Extracted ion current chromatograms for a mixture of vardenafil, sildenafil and tadalafil standard 皿7.489.5/151. 1 1. &5 , 10.51 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 11mm m,z 475. 3/100. 1 5110l69 ldmnl 0.0 23456789101fm 1 l1213141516171819 m 0.0 m/z 3
25、90. 4/268. 3 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 , 13 14 15 16 17 18 19 ,/m;n Figure B. l-Extracted ion current chromatograms for a mixture of vardenafil , sildenafil and tadalafil standard 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准迸出口保健食品中伐地那非、西地那非、他这那非的检测方法液相色i营-质i曹/质谱法SN/T 1951-2007 晤中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码100045网址电话，6852394668517548 中目标准出版社秦皇岛印刷厂印刷句岳开丰880XI2301/l6 印张l.25 字数29干字2007年11月第一版2007年11月第一次印刷印数1-2000 书号，155066 2-18233 定价12.00元
