1、ICS 65120B 46 圆雪中华人民共和国国家标准GBT 22 1 4620082008-06-27发布饲料中洛克沙胂的测定高效液相色谱法Determination of roxarsone in animal feedsHigh performance liquid chromatography2008-10-01实施丰瞀燃鬻瓣訾糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会捉19刖 昌GBT 221462008本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归E1。本标准负责起草单位：中国农业大学、农业部饲料效价与安全监督检验测试中心(北京)。本标准主要起草人：张丽英、王金荣
2、、杨文军、王宗义。饲料中洛克沙胂的测定高效液相色谱法GBT 2214620081范围本标准规定了用高效液相色谱法测定饲料中洛克沙胂的含量。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中洛克沙肿的测定。本标准定量限为5 mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 1992，neq ISO 3696
3、：1987)GBT 146991饲料采样3原理用磷酸氢二钾溶液作为提取液，用复合阴离子交换柱萃取柱净化后，经反相C，。柱分离，采用紫外检测器检测，根据洛克沙胂的色谱峰保留时间进行定性，以外标法进行定量分析。4试剂和溶液除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯。水为符合GBT 6682二级用水规定。41甲醇：色谱纯。42磷酸氢二钾溶液(20 gL)：称取20 g磷酸氢二钾(KzHPO。)用水溶解，并定容至l 000 mL。43硫酸铜溶液(100 gL)：称取10 g硫酸铜(CuSO。5Hzo)用水溶解，并定容至100 mL。44 固相萃取小柱淋洗液与洗脱液441淋洗液1：680 gL乙酸钠一甲醇溶
4、液。称取680 g乙酸钠(NazCzH。Oz3Hzo)于烧杯中，加入800 mL水溶解，用lo乙酸调pH至7，加入53 mL甲醇，定容至1 000 mL，4贮存。442淋洗液2：无水甲醇。443洗脱液：5甲酸甲醇溶液，吸取5 mL甲酸，用无水甲醇定容至100mL。45流动相451 A液：含01甲酸的698 gL磷酸二氢钾溶液，称取698 g磷酸二氢钾(KHzPO,)于烧杯中，用水溶解，加入1 mL甲酸溶液，并定容至1 000 mL。452 B液：无水甲醇。46洛克沙胂标准溶液461标准贮备液：准确称取洛克沙胂标准品(含量99)500mg，置于1 000mL棕色容量瓶中，用磷酸氢二钾溶液(42)
5、超声溶解，配制成500-gmL标准贮备液，贮于4冰箱中。462标准工作液：吸取标准贮备液(461)02、04、06、08、10mL分别至50mL棕色容量瓶中，并用磷酸氢二钾溶液(42)稀释至刻度，摇匀。其浓度分别为20、40、60、80、100 t-gmL的标准工作液。1GBT 22 1 4620085仪器、设备51分析天平：感量为0000 1 g。52离心机：转速能达3 000 rmin4 000 rrain。53固相萃取(SPE)装置。54恒温水浴和氮吹仪。55涡旋混合器。56复合阴离子固相萃取小柱。57高效液相仪(配有紫外检测器)。58超声波仪。6试样制备按照GBT 146991规定方法
6、采样，采取样品量至少500 g，以四分法缩减至200 g，粉碎过孔径045 mm目筛，充分混匀，装瓶，备用。7分析步骤71试样溶液的准备711提取准确称取适量试样(配合饲料5 g，浓缩饲料2 g，添加剂预混合饲料1 g，准确至o000 1 g)于50 mL离心管中，加磷酸氢二钾溶液(42)40 mL，盖好管盖，充分振摇后，在60超声水浴上提取30 min，然后于离心机以4 000 rrain离心10 rain。上清液倒人100 mI。棕色容量瓶中，残渣再分别用上述提取剂30 mL、20 mL重复提取2次，每次15 min，离心后合并上清液于100 mL棕色容量瓶中，然后加硫酸铜溶液(43)2
7、mL，并用磷酸氢二钾溶液(42)稀释至刻度，摇匀，过滤，滤液待用。浓缩饲料和添加剂预混合饲料的滤液需分别做2倍和5倍稀释。712净化将固相萃取柱(56)固定于SPE系统(53)上，依次用10mL甲醇和1，0mL水活化、平衡SPE小柱(56)。吸取711得到的样品提取滤液1mL加到SPE小柱上，控制过柱流速不超过10mLmin，然后依次用乙酸钠一甲醇溶液(441)和无水甲醇溶液(442)各淋洗一次，最后用10 mL洗脱液(44，3)洗脱，洗脱速度不超过10 mLmin。洗脱液于65水浴中以氮气吹干，准确加入10 mL磷酸氢二钾溶液(42)充分溶解混匀，并转移到样品瓶中，盖好，待用。72色谱条件7
8、21 色谱柱：具有c，。填料的柱子(粒径为3 pm)，内径39 mm，柱长150 mm。722流动相：A液(451)+B液(452)一95+5(体积比)，以10 mLmin流速洗脱。723进样体积；20 gL。724检测器；紫外检测器(或二极管矩阵检测器)，检测波长266 nm。73定量方法按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。向色谱柱中注入洛克沙胂标准工作液(462)及试样溶液(712)，得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。8结果计算与表述81试样中洛克沙胂含量(”)以质量分数计，数值以毫克每千克(mgkg)表示，按照式(1)计算。w一卫KGBT 221462008式中：P一根据标准曲线计算的上机试样溶液中洛克沙胂含量，单位为微克每毫升(pgmL)m试样质量，单位为克(g)；K稀释倍数。82测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。9重复性同一实验室同一操作人员使用同一台仪器完成的两个平行测定的相对偏差不大于10。
