1、中华人民共和国国家标准GB 15193. 8-94 小鼠辜丸染色体畸变试验Chromosome aberration test in mice testicle cells 1 主题内容与适用范围本标准规定了小鼠率丸染色体畸变试验的基本技术要求。本标准适用于检测环境有害物质对整体哺乳动物擎丸生殖细胞染色体的损伤。2 引用标准GB 15193. 6 骨髓细胞染色体畸变试验3 原理不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过DNA复制期，故在前细线期处理。第1214d采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效应。4 仪器和试剂全部试剂除注明外，
2、均为分析纯，试验用水为蒸馆水。4. 1 实验室常用设备。4. 2 1%拧橡酸三纳（分析纯）：取1g拧稼酸三销，加蒸馆水至100mL。4. 3 60%冰乙酸（分析纯）：取60mL冰乙酸，加蒸馆水至100mL。均宜新鲜配制。5 实验步骤5. 1 动物选用健康成年雄性小鼠，体重2530g，每组5只5.2 剂量分组设阴性（溶剂）对照组，阳性对照组及三个受试物剂量组。阳性物可用丝裂霉素C(l.5 2 mg屿，腹腔注射，一次）或环磷酸胶（40mg峙，腹腔注射，每天一次，连续5d）。阳性对照组在同一个实验室同一品系动物仅做一次即可，如调换操作人员，应重新再做。受试物的三个剂量组可根据急性经口LD50，选用可
3、使受试动物出现轻度中毒症状、体重略有下降、不引起动物死亡的剂量为高剂量，以其1/2、1/4L050为中、低剂量。5. 3给受试物方式灌胃给予受试物，每天一次，连续5d. 5.4 受试物配制一般用蒸馆水作溶剂，如受试物不溶于水，可用食油、医用淀粉、竣甲基纤维素配成悬浮液。5. 5 取样时间中华人民共和国卫生部199408-10批准1994-08-10实施567 GB 15193. 8-94 各组均于第一次给予受试物后的第1214d将受试动物处死制片。5. 6操作5. 6. 1 动物处死前6d腹腔注射秋水仙素46mg/kg体重（按0.1 0. 2 mL/10 g体重给受试物）。秋水仙素宜当天新鲜配
4、制。5. 6. 2 以颈椎脱臼法处死小鼠，取出两侧辜丸，去净脂肪，于低渗液中洗去毛和血污，放入盛有适量1%拧核酸三销或0.4%氯化绑溶液的小平皿中。5. 6. 3 以眼科小慑子撕开被膜，轻轻地分离开曲细精管，室温下低渗，低渗时间视具体条件而定（一般为2040min为宜）。5.6.4 仔细吸尽低渗液，加固定液（甲醇s冰乙酸3 1)10 mL，固定20min0 5.6. 5 吸尽固定液，加60%冰乙酸I2mL，待大部分曲细精管软化完后，立即加入倍量的固定液，打匀、移入离心管，以1000 r/min离心10min。5. 6. 6 弃去大部分上清液，留下约0.5 1. o mL，充分打匀制成细胞混悬液
5、，将细胞混悬液均匀地滴于冰水玻片上。每个样本制片23张。空气干燥或微热烘干。5.6. 7 用1 lOGiemsa液（pH6.8）染色2040min。5. 7 畸变分析在低倍镜下按顺序寻找背景清晰、分散良好、染色体收缩适中的中期分裂相，然后在油镜下进行分析。染色体的结构畸变中，除了可见到裂隙、断片、微小体外（按照GB15193. 6执行），还要分析：5. 7. 1 相互易位相互易位涉及非同源染色体问末端断片的交换。它需要二次断裂和修复。有常染色体间的易位和性染色体与常染色体间的易位。常染色体易位时能产生环状的多价体，或链状多价体。如一次易位可形成环状四价体、链状四价体、三价体加上一个单价体（ci
6、 + I ) ；若二次、三次或四次易位，则可观察到六价体、八价体或十价体。性染色体与常染色体的易位，可以有X染色体或Y染色体与常染色体易位。在对照成年动物中自发易位率极低，低于0.01%。老年动物可稍有增加。5. 7.2 X-Y和常染色体的单价体s亦称早熟分离。对照动物XY单价体较常见，约有010%。因X和Y染色体是长臂的远端，非同源的片段相接。X、Y的分离常可引起不育。常染色体的单价体是由于不联会（同源片段间配对合子的缺失），或联会消失（由于交叉失败而分离）而造成，它们在对照组动物中较少见，因为交叉在双线期形成，正常配对的联合一直到中期I末。常发生于最小一对常染色体中。6 计算方法和结果评价实验组与阴性对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等分别按Kasten ha um和Bowman所述方法进行统计处理，如P小于0.05则可以认为有显著意义。附加说明：本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由浙江医科大学、北京市卫生防疫站负责起草。本标准主要起草人徐惟安、姚小曼、祝慧娟。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。568
