1、ICS 07. 100 c 53 中华人民共和国国家标准GB 15193. 8-2003 代替GB15193. 8 1994 小鼠辜丸染色体畸变试验Mice testicle cells chromosome aberration test 2003-09-24发布2004-05-01实施中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会发布59 GB 15193.8-2003 60 前本标准全文强制。百旨在司本标准代替GB15193. 8 1994小鼠辜丸染色体畸变试验。本标准与GB15193. 8 1994相比主要修改如下g在“范围”中增加了受试物的具体内容食品生产、加工、保藏、运输和销售过程所
2、涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素，检验对象包括食品添加剂（含营养强化剂）、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等；并增加不适用范围：一一在“剂量分组”中z高剂量组的设计方法增加一条“急性毒性试验给予受试物最大剂量（最大使用浓度和最大灌胃容量）动物无死亡而求不出L050时，高剂量组则按以下顺序za) 10 g/kg 体重；b) 人的可能摄入量的100倍，或c)一次最大灌胃剂量进行设计”，并增加阳性对照和阴性对照的设计方法；在“操作步骤”中2将秋水仙素的给予时间从“处死前6d”改为“处死前6
3、h！；括号内“按0.1 0. 2 mL/10 g体重给受试物”改为“注射体积.o.1 mL/10 g体重0.2 mL/10 g体重”。自本标准实施之日起，GB15193. 8一1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位z浙江医科大学、北京市卫生防疫站。本标准主要起草人徐惟安、姚小曼、朱慧娟。本标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。GB 15193.8-2003 小鼠辜丸染色体畸变试验1 范围丰标准规定了小鼠事丸染色体畸变试验的基本技术要求。丰标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理阿章对整体哺乳动物辜丸生
4、殖细胞染色体的损伤，检验对象包括食品添加剂（吉营养强化剂人食品新资摞及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等。本标准不适用于有证据茬明受试物或其代谢产物不能达到靶组织剖情况2 束语和定义下列术语和定义适用于丰标准，2. 1 牵丸染色体畸变chromo皿mea函errationin testicle cells 辈丸染色体数目相结构异常，包括裂隙、断片、易位、微小体、常染色体单价体、性染色体单价体3原理不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过DNA复制期，故在前细线期
5、处理第12天14天来样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效庇。4 仪器与试剂全部试剂除注明外，均JJ分析纯试验用水为蒸锢水a4. 1 实验室常用设备组4. 2 l%拧橡酸三倒（分析纯）取Ig拧橡酸三俐，加燕馆水至100mL。4. 3 60 %冰乙酸（分析纯h取60ml，冰乙酸，加蒸恼水至100mL .均宜新鲜配制。5 实验动物选用健康成年雄性小鼠体重25g30 g嘈每组至少5只E动物购买后于试验前适应环挠3天5大。6 剂量及分组受试物应设三个剂量组，最高剂量组原则上为动物出现严重中毒表现和或个别动物出现死亡的剂量，般可取I/2 LD，低剂量组应不表现出毒性，分别取l/4LDw和1/
6、8LD，作为中、jJj;JlJ量。急性毒性试验给予受试物最大剂量（最大使用浓度和最大灌胃容量）动物无死亡而求-1出LD;o时，高剂量组则按以下顺序时10 g/kg体重，bl人的可能摄入量的100倍4或c)一次最大灌胃剂量进行设计，再下设中、低剂量组。同时另设搭剂对照组和阳性对照组。每组至少5只存活动物。所选用的阳性物在体内应能引起精细胞染色体结构畸变。可采用不同于受试物的给于途径次给61 CB 15193.8-2003 予阳性物。可采用丝裂霉素（.（1. 5 mg/kg 2 mg/kg.腹腔注射，一次）或环磷酸胶（40 mg吨，腹腔注射，每天一次，连续5太人阴性x.J照组应给予溶剂或介质，方式
7、与受试物组相同。如果有资料表明所使用的溶剂或介质无致突变作用，可不做未处理对照否则应另设未处理对照。7 操作步黯7. 1 受试物配制般用蒸馆水作溶剂，如受试物不溶于水，可用食用油、医用淀粉、楼甲基纤维素等配成乳浊液或悬浊液受试物应于灌胃前新鲜配制，除非有资抖表明以溶液（或悬浊液、乳浊液等）保存具有稳定性7. 2 实验动物的处理灌胃给予受试物，每犬次连续5天。各组均于第次给予受试物后的第12天14天将受试动物处死制片。动物处死前6h腹腔注射秋水仙素4mg/kg体重6mg/kg体重（注射体积0. I mL/10 g体重o.2 mL/10 g体重）。秋水仙素宜当天新鲜配制。用颈椎脱臼法处死小鼠7.
8、3 标本制备7. 3. 1 取材取出两侧事丸，去净脂肪，于低渗液中洗去毛和血污，放人盛有适最1%拧橡酸三销或0.4%氯化怦溶液的小平皿中。7. 3. 2 制片7.3.2.1 低渗以眼科慑撕开被膜，轻轻地分离曲细精管，室温下低渗，低渗时间视具体条件而定a7.3.2.2 罔定仔细吸尽低掺液，)JO固定液（币酶冰Z酸31)10 mL同定。第次不超过15min, 倒掉固定液后，再加人新的固定液固定20min以上。7.3.2.3 离心：吸尽固定液加60%冰乙酸ImL 2 mL，待大部分曲细精管软化完后立即加入倍量的固定液，打匀、移人离中管，以l000 r/min离心10mi罚。7.3.2.4 滴片弃去大
9、部分上清挫，留下约。51nL 1. 0 ml，充分打匀制成细胞混忌液将细胞混悬液均匀地滴于冰水玻H上。每个样本制得2张3张。空气干燥或微热烘r.7 3 2 5 染色用1 10 Giemsa液（pH6.的染色20min 40 min。7. 4 阅片7. 4. 1 阅片要求在低倍镜下按顺序寻找背景清晰、分散良好、染色体收缩适中的巾期分裂相，然后在油镜下进行分析。7. 4. 2 观察项目染色体的结构畸变中，除了口I见到裂隙、断片、微小体外（按照GB15193. 6执行）。此外，还要分析相互易位、XY和常染色体的单价体。相互易位相可易位涉及非同i1!染色体间末峭断片的交换。它需要二次断裂和修复。有常染
10、色体阳l的易位和性染色体与常染色体间的易位司常染色体易位时能产生环状的多价体，或链状多价体。如次易位可形成环状四价体、链状囚价体、三价体加上一个单价体Cclll+Tl1若二次、三次或四次易位则可观察到六价体、八价体或十价体。性染色体的易位，可以有X染色体或Y染色体与常染色体易位B在对照成年动物中白发易位率极低，低于0.01 %。老年动物可稍有增加。x Y和常染色体的单价体s亦称早熟分离E对照动物XY单价体较常见，约有010% .国X和Y染色体是长臂的远端，非同沥的片段相接。X、Y的分离常可引起不育。常染色体的单价体是由于不联会（同源片段间配对台子的缺失），或联会消失（由于交叉失败而分离）而造成，它们在对照组动物中较少见，因为交叉在双线期形成，正常配对的联合一直到中期I;f:。常发生于最小对常染色体中。62 GB 15193.8-2003 8 敢据处理实验组与阴性对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等分别按Kastenbaum和Bowman所述方法进行统计处理，如PO.05则可以认为有显著意义。63
