1、1考点 84 动物细胞融合与单克隆抗体 1动物细胞融合（1）原理：细胞膜的流动性。（2）融合方法：聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。（3）意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能，也为制造单克隆抗体开辟了新途径。2单克隆抗体（1）制备过程（2）优点：特异性强、灵敏度高，可大量制备。（3）用途：作为诊断试剂；用于治疗疾病和运载药物。考向 单克隆抗体的制备过程分析1下图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。有关叙述错误的是A是从已免疫的小鼠脾脏中获得的 B 淋巴细胞B过程体现了细胞膜的流动性2C所示细胞因高度分化而失去了分裂能力D是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群【参考答案】C
2、解题技巧制备单克隆抗体过程中两次筛选的方法及目的项目 第一次筛选 第二次筛选筛选原因诱导融合后得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择性培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞筛选方法用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞(“BB”细胞、 “瘤瘤”细胞)都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞(“B 瘤”细胞)能生长用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群筛选目的得到杂交瘤细胞 得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞2单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高、可以大量
3、制备，已被广泛应用于疾病的诊断和治疗。用 H7N9 病毒制备单克隆抗体的流程如下图所示：3（1）过程常用的方法是_。（2）向小鼠体内注射抗原蛋白，使小鼠产生_免疫。从小鼠体内分离的细胞是_，细胞应具有的特点是_。（3）体外培养细胞，首先应保证其处于_的环境中，其次需要提供充足的营养和适宜的温度。培养箱充入二氧化碳的作用是_。（4）对于转基因成功的细胞还要进行克隆化培养和_检测。（5）若要预防 H7N9 禽流感，可用图中的_作为疫苗。【答案】（1）显微注射技术 （2）体液(只答特异性不可) B 淋巴细胞(浆细胞或已免疫的 B 淋巴细胞) 既能无限增殖，又能产生特异性抗体 （3）无菌、无毒(缺一不
4、可) 维持培养液的 pH （4）(专一)抗体（5）抗原蛋白1下列有关单克隆抗体制备及其应用的叙述，不正确的是A制备单克隆抗体运用的技术有动物细胞融合和动物细胞培养B给小鼠注射抗原，是为了获得能产生相应抗体的 B 细胞C需要从杂交瘤细胞中筛选出能产生特定抗体的细胞D利用生物导弹治疗癌症就是利用了单克隆抗体清除癌细胞2利用细胞工程的方法，以 SARS 病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。下列相关叙述正确的是4A用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体B体外培养单个浆细胞可以获得大量针对 SARS 病毒的单克隆抗体C将等量浆细胞和骨髄瘤细胞混合，经 PEG 诱导融合后的细胞
5、均为杂交瘤细胞D利用该单克隆抗体可诊断出 SARS 病毒的感染者3通过细胞工程生产单克降抗体时，通常要经过三次筛选：选出能产生抗体的 B 淋巴细胞在特定培养基中筛选杂交瘤细胞选出能产生特定抗体并能大量增殖的细胞群。这三个过程的先后顺序是A BC D4某研究者利用细胞工程制备抗 A 的单克隆抗体。先用抗原(A)分别免疫 3 只同种小白兔(X、Y 和 Z)，每只小白兔免疫 5 次，每次免疫一周后测定各小白兔血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，制备 B 淋巴细胞时，免疫小鼠的血清抗体效价需达到 16 000 以上，结果如图所示。下列有关叙述错误的是A将抗原 A 注入小白兔体内的
6、目的是获得已免疫的 B 淋巴细胞B最适合用于制备 B 淋巴细胞的是第五次免疫后的 Y 小白兔C骨髓瘤细胞与 B 淋巴细胞的融合必须使用灭活的病毒进行促融D融合细胞需经两次筛选才可获得只分泌抗 A 抗体的杂交瘤细胞5关于下面制备单克隆抗体过程示意图的叙述，不正确的是A表示已免疫的 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞均是从小鼠的脾脏中提取的B促进细胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介导C中的筛选是通过抗原抗体反应进行的5D可以无限增殖6下图是单克隆抗体制备流程的示意图。下列有关叙述正确的是A从小鼠脾脏中获得细胞主要参与细胞免疫B过程利用细胞膜选择透过性原理C细胞同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性D是经筛选培养
7、获得的能分泌特异性抗体的细胞群7甘草酸是中药甘草中的主要活性成分。为了快速检测甘草酸，科研人员利用细胞工程技术制备了抗甘草酸的单克隆抗体，其基本操作过程如下图。相关叙述正确的是A过程注射相应抗原后应立即从小鼠脾脏中提取细胞甲B过程诱导细胞融合，利用了细胞膜的选择透过性C过程、的筛选方法相同，细胞丙、丁遗传物质相同D过程无论在体内还是体外进行，细胞丁都可大量增殖8人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG 单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗 HCG 单克隆抗体制备流程示意图。相关叙述正确的是6A过程所用的促融方法与植物体细胞杂交完全相同B过程以抗 HC
8、G 单克隆抗体为抗原进行检测C应给小鼠多次注射 HCG，以获得较多的记忆细胞D过程需要添加抗生素等物质，以防止病毒污染9如下图所示，请据图回答下面的问题。（1）淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能“融合”在一起，说细胞膜具有_特点。此过程中，常用的生物诱导剂为_，该杂交细胞的特点是_。（2）杂交瘤细胞的体外培养与植物组织培养的培养基成分有何主要不同？_。（3）单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原(病原体或癌变细胞等)并与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为“生物导弹”，这是利用了_。（4）在单克隆抗体制备过程中，应用了细胞工程中的_和_两大技术。7102013 年 4 月 1
9、6 日国家卫生和计划生育委员会公布，全国共报告人感染 H7N9 禽流感确诊病例 77 例，其中 16 人已死亡，禽流感再度备受关注。医学界正在致力于研究预防H7N9 禽流感病毒的疫苗和单克隆抗体。科学家决定采用基因敲除术将小鼠的 Ig 基因敲除，代之以人的 Ig 基因，然后用 H7N9 病毒去免疫小鼠，再经杂交瘤技术即可产生大量完全人源化抗体。如图是某科研机构的实验方案。请回答：（1）此处基因敲除技术的受体细胞不是小鼠的受精卵，而是小鼠的_细胞，经技术处理后的该细胞，再重新植入小鼠脾脏中增殖。（2）小鼠 B 淋巴细胞用 B 表示，小鼠骨髓瘤细胞用 A 表示，在培养液中，用灭活的动物病毒作促融剂
10、，培养液中共有_种类型的融合细胞（只考虑两两融合）（3）第一次筛选是选出_型的细胞（用字母组合表示），筛选具体方法是在培养基中加入某种物质，抑制骨髓瘤细胞 DNA 的复制，而 B 细胞 DNA复制虽不受影响，但增殖能力很有限，只有杂交瘤细胞可以借助 B 细胞 DNA 复制的途径，继续增殖。此种培养基称为_培养基。（4）将能产生抗 H7N9 病毒的杂交瘤细胞在动物培养液中进行培养，其培养液与植物组织培养的 MS 培养基相比，特有成分是_。（5）利用上述技术生产的单克隆抗体可制作成诊断盒，用于准确、快速诊断 H7N9 禽流感病毒的感染者，这种诊断运用了_杂交技术。（6）有人设想，能否利用经 H7N
11、9 病毒免疫后的小鼠效应 T 细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，大量生产单克隆干扰素，用于 H7N9 禽流感患者的有效治疗。你觉得该方法_（填“可行”或“不可行”），因为_。811（2018江苏卷）如图为细胞融合的示意图，下列叙述正确的是A若 a 细胞和 b 细胞是植物细胞，需先去分化再诱导融合Ba 细胞和 b 细胞之间的融合需要促融处理后才能实现Cc 细胞的形成与 a、b 细胞膜的流动性都有关Dc 细胞将同时表达 a 细胞和 b 细胞中的所有基因12（2017江苏卷）牛雄性胚胎中存在特异性H-Y 抗原，可在牛早期胚胎培养液中添加H-Y 单克隆抗体，筛选胚胎进行移植，以利用乳腺生物反应
12、器进行生物制药。下列相关叙述正确的是AH-Y 单克隆抗体由骨髓瘤细胞分泌B应选用原肠胚做雌雄鉴别C鉴别后的雄性胚胎可直接做胚胎移植D用H-Y 抗原免疫母牛可获得相应抗体1【答案】D92【答案】D【解析】单克隆抗体是由单个的杂交瘤细胞经过增殖而形成的遗传信息相同的大量细胞产生的化学性质单一、特异性强的抗体，所以用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，产生的血清抗体不属于单克隆抗体，A 错误；浆细胞不能增殖，体外培养单个浆细胞不能获得大量针对 SARS 病毒的单克隆抗体，B 错误；将等量浆细胞和骨髄瘤细胞混合，经 PEG 诱导融合后的细胞中，只有浆细胞和骨髄瘤细胞融合后形成的细胞才属于杂交瘤细胞，C
13、 错误；利用该单克隆抗体能够与抗原特异性结合的原理，可诊断出 SARS 病毒的感染者，D 正确。3【答案】B4【答案】C【解析】制备抗 A 的单克隆抗体，必须先获得能产生抗 A 的 B 淋巴细胞，则需要将抗原A 注入小白兔体内从而获得已免疫的 B 淋巴细胞，A 正确。由于第五次免疫后 Y 小白兔的血清抗体的效价最高，因此最适合用于制备 B 淋巴细胞，B 正确。骨髓瘤细胞与 B 淋巴细胞的融合可以采用物理法（离心、电激）、化学法（聚乙二醇）或灭活的病毒进行促融，C 错误。融合细胞需经两次筛选才可获得只分泌抗 A 抗体的杂交瘤细胞，第一次是筛选出杂交瘤细胞(用选择培养基)，第二次是进一步筛选出能产
14、生抗 A 抗体的杂交瘤10细胞，D 正确。5【答案】A 【解析】已免疫的 B 淋巴细胞可以从小鼠的脾脏中提取，也可以从血浆中提取，骨髓瘤细胞是从小鼠的骨髓中提取的。单克隆抗体是利用已免疫的 B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞得到的，融合方法可以用化学方法聚乙二醇，生物方法灭活的病毒等。如果要筛选能产生特定抗体的细胞群，可以通过检测抗原抗体反应，如果有反应说明产生了抗体。融合细胞具有双亲的特点，既能无限增殖又能产生单一抗体。6【答案】D【解析】是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应 B 细胞，参与体液免疫，A 错误；在动物细胞融合的过程中，利用细胞膜的流动性，B 错误；效应 B 细胞与骨髓瘤
15、细胞进行融合，只考虑两两融合会有三种结果：杂交瘤细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞、B 细胞自身融合细胞等，只有杂交瘤细胞既能无限增殖又能产生特异性抗体，C 错误；过程表示用抗体阳性检测，筛选出能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，D 正确。7【答案】D 【解析】过程注射相应抗原后应经过一段时间，使小鼠产生浆细胞，再从小鼠脾脏中提取细胞甲，A 项错误；过程诱导细胞融合，利用了细胞膜的流动性，B 项错误；过程筛选杂交瘤细胞，过程筛选能产生单一抗体的杂交瘤细胞，二者方法不同，C 项错误；过程无论在体内还是体外进行，细胞丁都可大量增殖，D 项正确。8【答案】B9（1）流动性 聚乙二醇(或灭活病毒) 具有无限增殖能
16、力，能产生特异性抗体（2）动物细胞培养用的是液体培养基，且其中含有动物血清（3）抗原与抗体之间结合的高度特异性（4）动物细胞融合 动物细胞培养【解析】（1）淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能“融合”在11一起，说明细胞膜具有一定的流动性；常用聚乙二醇或灭活病毒作为诱导剂，该杂交细胞的特点是具有无限增殖能力，能产生特异性抗体。（2）动物细胞培养用的是液体培养基，且其中含有动物血清；植物组织培养的培养基是固体培养基，而且含有生长素和细胞分裂素。（3）单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原并与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为“生物导弹”，这是利用了抗原与抗体之间结合的高度特异性
17、。（4）在单克隆抗体制备过程中，应用了细胞工程中的动物细胞融合和动物细胞培养两大技术。10【答案】（1）B 淋巴（2）3（3）AB 选择（4）动物血清或血浆（5）抗原抗体（6）不可行 骨髓瘤细胞是效应 T 细胞要攻击杀死的靶细胞，两者不可能融合成杂交瘤细胞【解析】（1）此处基因敲除技术的受体细胞不是小鼠的受精卵，而是小鼠的 B 淋巴细胞细胞，因为 B 淋巴细胞可以产生抗体。（2）在诱导细胞融合时，若考虑两两融合，则有 AA、BB 和 AB 三类细胞，而在制备单克隆抗体的制备过程中需要异种细胞核融合的细胞，所以需要选择培养基的筛选才能获得所需要的杂交瘤细胞，该细胞既能无限增殖又能产生专一抗体。（
18、3）第一次筛选是选出 AB 型的细胞（用字母组合表示），筛选具体方法是在培养基中加入某种物质，抑制骨髓瘤细胞 DNA 的复制，而 B 细胞DNA 复制虽不受影响，但增殖能力很有限，只有杂交瘤细胞可以借助 B 细胞 DNA 复制的途径，继续增殖。此种培养基称为选择培养基。（4）将能产生抗 H7N9 病毒的杂交瘤细胞在动物培养液中进行培养，其培养液与植物组织培养的 MS 培养基相比，特有成分是动物血清或血浆。（5）利用上述技术生产的单克隆抗体可制作成诊断盒，用于准确、快速诊断 H7N9 禽流感病毒的感染者，这种诊断运用了抗体抗原杂交技术。（6）由于骨髓瘤细胞是效应 T 细胞要攻击杀死的靶细胞，两者不可能融合成杂交瘤细胞，所以不能利用经 H7N9 病毒免疫后的小鼠效应 T 细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。11【答案】BC1212【答案】D【解析】单克隆抗体由杂交瘤细胞分泌，A 错误；做雌雄性别鉴别应选择囊胚期的滋养层细胞，B 错误；由于是利用乳腺生物反应器进行生物制药，则鉴别后的雌性胚胎可直接做胚胎移植，雄性胚胎没有意义，C 错误；H-Y 抗原免疫母牛，使其体内产生体液免疫，产生相应的浆细胞，获得相应抗体，D 正确。
