1、 ICS 65.120 CCS B 40 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 43542026 牛、羊饲料原料全消化道体外降解模拟 技术规程 Code of practice in vitro simulation of whole digestive tract degradation of feed material in cattle and sheep 2026-04-10 发布2026-05-10 实施内蒙古自治区市场监督管理局发 布 DB15/T 43542026 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注
2、意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古草业技术创新中心有限公司、鄂尔多斯市农牧技术推广中心。本文件主要起草人：闫素梅、张清月、赵艳丽、徐元庆、郭咏梅、郭晓宇、成海荣、史彬林、郑亚光、佟满满、刘锦涛、张尚雄、辛宇。DB15/T 43542026 1 牛、羊饲料原料全消化道体外降解模拟 技术规程 1 范围 本文件规定了牛、羊饲料原料全消化道体外降解模拟技术的样品采集与制备、试剂与耗材、仪器设备的要求。本文件适用于企业、养殖场（户
3、以及相关的教学科研单位。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法 GB/T 6435 饲料中水分的测定 GB/T 14699 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 GB/T 20806 饲料中中性洗涤纤维（NDF）的测定 GB/T 40835 畜禽饲料安全评价 反刍动物饲料瘤胃降解率测定 牛饲养试验技术规程 NY/T 34 奶牛饲养标准 NY/T 815 肉牛饲养
4、标准 NY/T 816 肉羊营养需要量 NY/T 1459 饲料中酸性洗涤纤维的测定 NY/T 2129 饲草产品抽样技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。单项组合效应值 single-factor associative effect indicator，SFAEI 两种或多种饲料原料底物组合发酵时，相对于单一饲料原料底物发酵，对某一特定指标（如营养物质降解率）产生的协同、叠加或拮抗效应。即：各发酵时间点组合后（试验组）的某特定指标与组合前（对照组）某特定指标差值之和，与组合后（试验组）某特定指标各培养时间点之和的比值。多项组合效应值 multiple-factors ass
5、ociative effect indicator，MFAEI DB15/T 43542026 2 不同组合（或处理）体外降解模拟各指标SFAEI之和，以计算多种饲料原料共同组合时产生的协同或拮抗效应，从而量化多种饲料原料的混合效果。4 样本的采集和制备 按照GB/T 14699的规定采样，青贮饲料按照NY/T 2129的规定采样。按照GB/T 20195的规定制备试样。5 耗材与试剂 耗材 5.1.1 尼龙袋 按照GB/T 40835规定的方法制作尼龙袋，规格建议为12 cm8 cm。5.1.2 厌氧发酵罐 厌氧发酵罐（以下简称发酵罐）为玻璃材质，能密闭，体积建议为2 L。内置分隔板，保证尼
6、龙袋平铺于分隔板两侧。发酵罐盖应配备单向排气阀，以保持厌氧环境。发酵罐能置于体外模拟培养装置中，并以转速1 rpm2 rpm旋转。试剂 5.2.1 体外瘤胃降解缓冲液（Kansas 缓冲液）Kansas缓冲液包括溶液A和溶液B，配制方法见附录A中表A.1。5.2.2 体外胃液 体外胃液配制方法见附录A中表A.2。5.2.3 体外小肠液 体外小肠液配制方法见附录A中表A.3。6 仪器与设备 分析天平 分析天平精确度应为0.0001 g。胃管式瘤胃液采样器 由不锈钢带孔的弹体、内部为乳胶管的不锈钢弹簧蛇管（长度为1.5 m3.0 m，直径1.0 cm2.0 cm）、大号注射器（100 mL500
7、mL）或小型真空泵及抽滤采样瓶（250 mL1000 mL）构成。体外降解模拟培养装置 DB15/T 43542026 3 装置应包括可控温恒温箱、旋转架、固定支撑及温控系统。控温范围满足25 45，控温精度0.1。应满足2000 mL发酵罐在倾斜一定角度（7090）时转速为1 rpm，以模拟消化器官的蠕动。干燥箱 温度调节范围40 120，精度0.5。恒温水浴锅 温度调节范围25 45，精度0.5。7 瘤胃液供体动物饲粮 按照NY/T 34、NY/T 815或NY/T 816的规定配制饲粮。8 体外降解模拟技术 体外瘤胃模拟降解 8.1.1 称样与尼龙袋装样 对于精饲料样品每个尼龙袋装4 g
8、5 g，粗饲料样品装2 g3 g，精确至0.0001 g。每个培养时间至少3个平行，并设置1个空白尼龙袋作为空白对照。8.1.2 缓冲液与体外降解模拟培养装置预温 每个发酵罐中加入Kansas缓冲液，调节pH值至6.8。将装有缓冲溶液的发酵罐置于39 恒温水浴锅中预温，全程通入CO2气体至饱和；同时预温体外模拟培养装置，使其温度达到39 并平衡至少30 min。8.1.3 瘤胃液采集与制备 经瘤胃瘘管或使用胃管式瘤胃液采样器采集。采集的瘤胃液快速转入充满CO2的保温容器中。混合均匀后经4层纱布过滤，同时通入CO2气体，备用。8.1.4 加入瘤胃液和尼龙袋 向预温好的发酵罐中一边通入CO2气体，
9、一边加入400 mL瘤胃液，再通入CO2气体30 s，迅速盖紧，将瘤胃液与缓冲液按1:4的体积比混合摇匀。之后，通入CO2气体的同时放入尼龙袋，再通入CO2气体30 s，迅速盖紧、摇匀。8.1.5 培养温度与转速 将发酵罐置于预温好的体外降解模拟培养装置中，装置内温度应保持在39，转速1 rpm。8.1.6 培养时间 精饲料原料不超过24 h，培养时间点不少于4个；粗饲料原料不超过48 h，培养时间点不少于5个。8.1.7 尼龙袋冲洗与烘干 DB15/T 43542026 4 培养完成后，冰浴终止发酵，迅速取出尼龙袋,并立即用大量自来水清洗，在冲洗过程中可用手轻轻挤压，直至水澄清为止。将冲洗干
10、净的含有降解残渣的尼龙袋于干燥箱中65 烘干至恒重。8.1.8 营养物质含量测定 样本（培养底物）与降解残渣中的水分测定按照GB/T 6435方法执行，计算干物质含量；粗蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维的含量测定分别按照GB/T 6432、GB/T 20806和NY/T 1459方法执行。8.1.9 体外瘤胃营养物质降解率计算 体外瘤胃营养物质降解率按照公式（1）计算。培养 t 小时体外瘤胃营养物质降解率（%）=100(00)00 (1)式中：W0降解前（0时间点）培养底物重量，单位为克（g）；A0降解前（0时间点）培养底物中某营养物质含量，单位为百分比（%）；Wt经体外培养t小时降解后的残
11、渣重量，单位为克（g）；Bt体外培养t小时的降解残渣中某营养物质含量，单位为百分比（%）。体外胃模拟降解 将8.1.6体外瘤胃培养结束后的含有降解残渣的尼龙袋，置于盛有2000 mL体外模拟胃液的发酵罐中，用体外降解模拟培养装置进行培养，温度39，转速1 rpm2 rpm，培养1 h。冲洗与烘干方法同8.1.7。体外小肠模拟降解 将8.2取出的尼龙袋置于盛有2000 mL体外模拟小肠液的发酵罐中，发酵温度39，转速1 rpm2 rpm，用体外降解模拟培养装置继续培养24 h。冲洗与烘干方法同8.1.7。体外瘤胃-胃-小肠营养物质降解率的计算 体外瘤胃-胃-小肠营养物质降解率按照公式（2）计算。
12、体外瘤胃 胃 小肠营养物质降解率(%)=100(00)00 (2)式中：W0降解前（0时间点）底物重量，单位为克（g）；A0降解前（0时间点）培养底物中某营养物质含量，单位为百分比（%）；W 经体外瘤胃-胃-小肠发酵降解后的残渣重量，单位为克（g）；C 体外瘤胃-胃-小肠降解残渣中某营养物质含量，单位为百分比（%）。单项组合效应值 SFAEI 和多项组合效应值 MFAEI 计算 依据体外瘤胃营养物质降解率（干物质降解率、中性洗涤纤维降解率、酸性洗涤纤维降解率、粗蛋白质降解率）分别计算每项指标相应的SFAEI，并对SFAEI进行求和，计算MFAEI。SFAEI和MFAEI的计算公式如公式（3）、
13、公式（4）：=(,)=1=1,(3)DB15/T 43542026 5 式中：n培养时间点的个数；i各培养时间点（i=1,2,3,n）；Ae,i组合后（试验组）各单一指标第i个培养时间点的值；Ac,i组合前（对照组）各单一指标第i个培养时间点的值。=1 (4)式中：i瘤胃特定指标的个数（i=1,2,3,n）；SFAEIi第i个单一瘤胃特定指标的SFAEI。DB15/T 43542026 6 A A 附录A （资料性）全消化道体外降解模拟技术所使用的各类缓冲液的配制方法 A.1 体外瘤胃缓冲液配制方法见表 A.1。表A.1 Kansas 缓冲液配制方法 溶液名称 试剂名称 剂量 蒸馏水定容体积
14、溶液A 磷酸二氢钾 10 g 1000 mL 七水合硫酸镁 0.5 g 氯化钠 0.5 g 二水合氯化钙 0.1 g 尿素 0.5 g 溶液B 碳酸钠 15 g 1000 mL 九水合硫化钠 1 g Kansas缓冲液 使用时，将溶液A和溶液B以1:5的体积比混合均匀。A.2 体外胃液配制方法见表 A.2。表A.2 溶液名称 试剂名称 剂量 蒸馏水定容体积 体外胃液 浓盐酸 0.9 mL 1000 mL 胃蛋白酶 1 g A.3 体外小肠液配制方法见表 A.3。表A.3 体外小肠液配制方法 溶液名称 试剂名称 剂量 蒸馏水定容体积 溶液 A 磷酸氢二钠 9.47 g 1000 mL 溶液 B 磷酸二氢钾 9.08 g 1000 mL 磷酸盐缓冲液 溶液 A 915 mL 1000 mL 磷酸盐缓冲液 溶液 B 85 mL 体外小肠液 胰酶 3 g 1000 mL 0.5%氯霉素溶液 1 mL 磷酸盐缓冲液 999 mL
