1、ICS65.150CCS B 5121辽宁省地方标准DB21/T 43982026四角蛤蜊 种质Mactra veneriformis germplasm2026-01-07 发布2026-02-07 实施辽宁省市场监督管理局发 布DB21/T 43982026I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：辽宁省海洋水产科学研究院、盘锦光合蟹业有限公司。本文件主要起草人：刘项峰、王庆志、滕炜鸣、谢玺、于佐安、李大成
2、李华琳、王朔、白永安、赵艳红。本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。归口单位联系方式：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024-23447862。文件起草单位通讯地址：辽宁省海洋水产科学研究院（大连市沙河口区黑石礁街50号），联系电话：0411-84671027。DB21/T 439820261四角蛤蜊 种质1范围本文件给出了四角蛤蜊Mactra veneriformis的名称与分类、主要形态特征、繁殖生物学特征、细胞遗传学特性、分子遗传学特性、检测方法和判定规则
3、本文件适用于四角蛤蜊的种质检测与鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检测 第二部分：抽样方法。GB/T 32757贝类染色体组型分析3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4名称与分类4.1学名四角蛤蜊Mactra veneriformis(Reeve,1853)。4.2分类地位隶属于软体动物门（Mollusca）、双壳纲（Bivalvia）、帘蛤目（Veneroida）、蛤蜊科（M
4、actridae）、蛤蜊属（Mactra）。5主要形态特征5.1外部形态贝壳坚厚，略成四角形；两壳极膨胀；壳顶突出，位于背缘中央略靠前方，尖端向前弯；小月面及楯面极明显，呈心形；外韧带细薄，不明显；贝壳具外皮，顶部白色，幼小个体呈淡紫色，近腹缘为黄褐色，腹面边缘常有1条很窄的边缘。生长线明显粗大，形成凹凸不平的同心环纹；贝壳2片，左右对称；贝壳内面白色，铰合部宽大，左壳具一个分叉的主齿，右壳具有2个排列成“八”字形的主齿；内韧带发达，呈三角形，位于壳顶后方斜三角形韧带槽内。四角蛤蜊的外部形态见图1。DB21/T 439820262图 1四角蛤蜊外部形态5.2内部构造由左右外膜附着壳内面包围整个
5、肉体形成外套腔，套膜分边缘、中央两部分；边缘部分肌肉发达较肥厚、中央部分薄而透明。外套膜在后端腹侧着，形成两个水管，水管短而粗，两个水管紧靠，出水管较入水管细而短，位于入水管背面；两水管的末端具有触手。体中部稍后方左右两侧有两个鳃瓣，鳃前方左右各有两片唇瓣、唇瓣之间为口。外套腔偏前方有一略呈扁形的内脏块，其腹面为呈斧刀状的足。心脏位于壳顶下方，内脏块背侧偏后，呈梭形带透明状。5.3可数性状5.3.1贝壳 2 片，左右对称。5.3.2外套膜 2 片，左右两叶。5.3.3鳃瓣左右各 2 片。5.3.4左壳具主齿 1 枚，右壳具主齿 2 枚。5.3.5内韧带 1 条。6繁殖生物学特性6.1性成熟年龄
6、与性腺特征雌雄异体，雌雄性腺肉眼观察无区别；首次性成熟年龄为1龄，成熟季节，雌、雄性生殖腺均为乳白色。6.2性比雌雄性比约为1:1.08，雄性多于雌性。6.3繁殖期周年2次繁殖期。DB21/T 4398202636.4产卵量1龄2龄四角蛤蜊第一次产卵量为1.3106 粒1.8109 粒。6.5精卵特征沉性卵，卵径为70 m80 m。精子分为头部、中段和尾部三部分。7细胞遗传学特性7.1染色体数二倍体体细胞染色体数：2n=38.7.2核型公式染色体组核型公式：14M+14SM+10ST/T,NF=66。8分子遗传学特性8.1线粒体 CO基因序列片段（658 bp，GeneBank 序列号：MN3
7、17133）1 aactctttat tttgtttttt cttattgagc tggtttagtt gggactgctt ttagttctat61 tattcgttta gaattggctg ttcctggtga aagattgctt gatggtcagc tctataattt121 ggttgtgaca gcacatgctt tagttataat ttttttttta gtaataccta taatgatggg181 aggttttgga aactggttag ttcctttaat actaaaagtt cctgatatga gttttcctcg241 tataaacaat attagt
8、tttt gacttcttcc tgtgtctatg ttactgttat tcgcttcagc301 ttatgttgaa agaggggcag gaactgggtg aactatttat cctcctttat ctagccatat361 aggtcatcct gggcctgcta tggattatgt tattttttct cttcatgttg gtggtctctc421 ttcaatttta gcttctatta atttttttac tactttcttg agaatgcgtt tgaaggtgat481 gtctttatat cgtgtcccat tattcgtatg gtgtattg
9、ct gttactaggt ttttattaat541 agtagctatg cctgttttag ctggtgctct tacgatatta cttactgatc gtaattttaa601 tacttctttt tttgacccaa atggaatggg tgacactatt ttatttgttc atttgttt8.2线粒体 16s rRNA 基因序列片段（306 bp，GeneBank 序列号：MN317133）1 gcaataaatt gtcctttaat tggggaaatg aatgaagggg ttgacgaggg ggaagctgtc61 tttttaatat agtccga
10、agt tttcttttat gtgaaaagac ttagatttta caataagaag121 agaagacccc ggcgagcttg ttaaggttta ataacgttta ttaattattg atttttgttg181 gggcaacgca aagggaaaaa aactcctttg tattaaataa ggatccactc agagtgaatc241 aagcaaaagc taccgtgggg ataacagcgc aattttttca gagagttcat atcgaagaga301 aagctt9检测方法9.1抽样DB21/T 439820264参照GB/T 186
11、54.2的规定执行。9.2主要形态构造检测9.2.1外部形态光线充足时，肉眼观察。9.2.2可量性状壳高和壳长按照定义描述用游标卡尺测量。9.2.3内部构造光线充足时，解剖后用解剖镜或肉眼观察。9.3细胞遗传学检测9.3.1抽样参照GB/T 18654.2的规定执行。9.3.2染色体和核型9.3.2.1染色体标本制备参照GB/T 32757的规定执行。9.3.2.2核型分析观察100个左右的分散良好的中期分裂相，记数确定二倍体数。从中挑选10个分散良好、形态清晰的中期分裂相进行显微摄影、放大、测量，按GB/T 32757的分类标准对染色体分类。9.4分子遗传学检测9.4.1DNA 提取取斧足肌
12、肉30 mg，剪碎至糜状，DNA提取试剂盒或常规酚-氯仿方法提取总DNA,灭菌双蒸水溶解备用。9.4.2引物序列CO：LCO1490：5-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3，HCO2198：5-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3；16S rRNA：16S3L：5-TGAGCGTGCTAAGGTAGC-3，16S4H：5-AGCCAACATCGAGGTCGC-3。9.4.3PCR 反应体系DNA模板50 ng100 ng、10Buffer（500 mmol/L KCl；100 mmol/L Tris-HCl，pH 8.3；15 mmol/LMgCl2）5
13、 L、上下游引物（10 mol/L）各1 L、Taq 酶（5 U/L）0.5 L，dNTP 混合液（10 mmol/L）8 L、超纯水定容至50 L。9.4.4PCR 反应程序DB21/T 4398202659.4.4.1CO 基因 PCR 反应程序反应条件为：94 预变性5 min；94 变性30 s，45 退火40 s，72 延伸1 min，循环35 次；72 延伸10 min。每组PCR均设阴性对照来检测是否污染。9.4.4.216S rRNA 基因 PCR 反应程序反应条件为：94 预变性5 min；94 变性30 s，50 退火30 s，72 延伸40 s，循环35次；72 延伸5 min。每组PCR均设阴性对照来检测是否污染。9.4.5测序产物直接测序，为了保证序列的准确性，对所有样品应进行双向测序并进行人工校对。计算Kimura两参数模型（Kimura 2-parameter,K2P）。10判定规则检测结果符合本标准第5章、第7章要求，且CO和16S rRNA基因序列测序结果与第八章比对结果相似度98%（K2P遗传距离2%），判定为该物种。如果有一项不符合的可以复检，复检符合的，判定为该物种。
