1、ICS 65020B 04中华人民 ，-H、-禾I口，、n 国国家标准农业部953号公告一1212007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫棉花第1部分：对靶标害虫的抗虫性Evaluation of environmental impact of genetically modifiedplants and itS derived productsInsect-resistant cottonPart 1：Evaluation of insect pest resistance20071218发布 20080301实施中华人民共和国农业部发布刖 舌农业部953号公告一1212007本标准由中华人
2、民共和国农业部提出。本标准全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。本标准附录A为资料性附录。本标准起草单位：农业部科技发展中心、中国农业科学院棉花研究所、中国农业科学院植物保护研究所。本标准主要起草人：崔金杰、沈平、吴孔明、雒瑶瑜、张永军、厉建萌、马艳、陈海燕、王春义。本标准为首次发布。农业部953号公告一1212007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫棉花第1部分：对靶标害虫的抗虫性1范围本标准规定了转基因抗虫棉对靶标害虫棉铃虫抗性的检测方法。本标准适用于转基因抗虫棉对靶标害虫棉铃虫抗性、抗性的稳定性与纯合度的室内生物测定和抗虫效率的田间检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标
3、准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其后所有的修改单(但不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 4407。l经济作物种子棉花3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3 1生物测定bioassay在室内利用人工接虫的方法评价转基因抗虫棉花的组织器官对靶标害虫的抗性效果。3 2抗性稳定性resistance stability转基因抗虫棉在苗期、蕾期、花铃期对靶标害虫的抗虫性差异。33抗性纯合度resistance homogeneity苗期、蕾期、花铃期
4、转基因抗虫棉品种的不同棉花植株对靶标害虫抗性的一致性。34幼虫死亡率larval mortalily靶标害虫幼虫取食转基因抗虫棉花后死亡幼虫数占供试幼虫总数的百分率。4要求4 1供试棉铃虫室内生物测定用人工饲料饲养的1 d龄棉铃虫幼虫。田问抗性效率检测试验的棉铃虫为自然发生种群。4 2试验品种转基因抗虫棉品种、对应的非转基因棉花品种、感虫对照品种和当地主栽转基因抗虫棉品种。上述棉花种子质量达到GB 44071中对种子质量要求。4 3资料记录1农业部953号公告一12 120074 3 1试验地名称与位置记录试验地的名称、试验的具体地点、经纬度或全球地理定位系统(GPS)地标。绘制小区示意图。4
5、3 2土壤资料记录土壤类型、土壤肥力、排灌情况和土壤覆盖物等内容。描述试验地近三年种植情况。4 33试验地周围生态类型4331自然生态类型记录与农业生态类型地区的距离及周边植被情况。4 3 3 2农业生态类型记录试验地周围的主要栽培作物及其他植被情况，以及当地棉花田常见病、虫、草害的名称及危害情况。4 3 4气象资料记录试验期间试验地降雨(降雨类型，日降雨量以毫米mm表示)和温度(日平均温度、最高和最低温度、积温，以摄氏度表示)的资料。记录影响整个试验期间试验结果的恶劣气候因素，例如严重或长期的干旱、暴雨、冰雹等。4 4试验地安全控制措施4 4 1隔离措施试验地四周有100 m以上非棉花为隔离
6、带。若试验区周边有棉花制种田，隔离距离为200 m以上。4 4 2试验过程的安全管理试验地设专人监管。试验过程中如发生试验材料被盗、被毁等意外事故，应立即报告当地行政主管部门和当地公安部门，依法处理。4 4 3试验后的材料处理需要收获的转基因抗虫棉花材料应单收、单脱、单藏，由专人运输和保管。试验结束后，除需要保留的材料外，剩余转基因试验材料一律焚毁。4 4 4试验结束后试验地的监管保留试验地边界标记。当年和第二年内不再种植转基因抗虫棉花，由专人负责监管，及时拔除并销毁转基因抗虫棉花白生苗。5试验方法5 1试验设计随机区组设计，三次重复，小区面积不小于100 m2，常规耕作管理，靶标害虫发生期不
7、应喷施杀虫剂。52播种按当地春棉或夏棉(短季棉)常规播种时期、播种方式和播种量进行播种。5 3调查记录5 3 1 对靶标害虫的抗虫性生物测定531 1取样方法在靶标害虫二、三、四代发生盛期，分别从转基因抗虫品种田、感虫对照品种田和当地主栽转基因抗虫棉品种田采集顶部展开的第三片棉叶，每处理每小区随机采集20片。5 3 1 2操作在大试管(35 mmXl20 ram)中加入20 mm的琼脂培养基，将叶片(保留叶柄)插入培养基中保鲜，每试管放一张叶片，每张叶片接棉铃虫1 d龄幼虫5头。接虫后用脱脂棉塞紧管口，以防棉铃虫逃逸；2农业部953号公告一12 12007放于25。C28的养虫室或培养箱中饲养
8、。5 3 1 3结果记录接虫后第5 d检查幼虫取食状况和幼虫死亡状况。记录幼虫死亡虫数和活虫数，目测幼虫取食状况，幼虫取食状况级别按附录表AI、A2执行。幼虫死亡率按公式(1)计算：x一署100(1)式中：x幼虫死亡率，单位为；n死虫数，单位为头；A接虫数，单位为头。校正死亡率按公式(2)计算：x一半二笋100(2) 11 0式中：x。 幼虫校正死亡率，单位为；xI处理死亡率，单位为；x。对照死亡率，单位为。5 3 1 4结果分析判定转基因抗虫棉的抗虫性。转基因抗虫棉抗虫性级别判定标准按附录A执行。5 3 2对靶标害虫抗性的稳定性与纯合度生物测定5 321取样方法对靶标害虫抗性的稳定性生物测定
9、：分别于棉花生长的苗期、蕾期、花铃期从转基因抗虫品种田、对应的非转基因棉花品种田和当地主栽转基因抗虫棉品种田采集棉花的上部倒数第三片展开叶，每处理每小区随机采集20张叶片。对靶标害虫抗性的纯合度生物测定：分别于棉花生长的苗期、蕾期、花铃期从转基因抗虫品种田、对应的非转基因棉花品种田和当地主栽转基因抗虫棉品种田采集棉花的上部叶片，每处理每小区随机选择20株棉株，每株采3张叶片。532 2操作见本部分5312。5 3 2 3结果记录接虫后第5 d检查幼虫死亡状况。记录幼虫死亡虫数和活虫数。幼虫死亡率和校正死亡率的计算公式同5313中(1)和(2)。计算每处理每小区20张叶片对靶标害虫抗性的校正死亡
10、率平均值，用于对靶标害虫抗性稳定性的统计分析。计算每处理每小区每株3张叶片对靶标害虫抗性的校正死亡率平均值，然后计算20株棉株对靶标害虫抗性的校正死亡率平均值(y)和标准差(s)。计算变异系数CV，用于对靶标害虫抗性纯合度的统计分析。变异系数按公式(3)计算：CV一(sy)100(3)5 32 4结果分析比较转基因抗虫棉苗期、蕾期和花铃期对靶标害虫抗性的校正死亡率差异，并比较转基因抗虫棉和当地主栽抗虫棉品种相同时期对靶标害虫抗性的校正死亡率差异，分析转基因抗虫棉对靶标害虫的抗R农业部953号公告一12 12007性稳定性。比较转基因抗虫棉苗期、蕾期和花铃期对靶标害虫抗性的变异系数，并比较转基因
11、抗虫棉和当地主栽抗虫棉品种相同时期对靶标害虫抗性的变异系数，分析转基因抗虫棉对靶标害虫的抗性纯合度。533对靶标害虫抗虫效率田间检测5331调查方法在第二、三、四代靶标害虫(棉铃虫)发生盛期，分别调查1次转基因抗虫棉品种田、对应的非转基因棉花品种田、当地主栽转基因抗虫棉品种田靶标害虫的残虫数量和蕾铃危害情况。采用对角线5点取样法，每个小区调查5个样点，每个样点顺序连续调查10株棉花。5 3 32结果记录记录靶标害虫的幼虫数量和龄期、棉株顶尖被害株数、每株棉花蕾铃被害数和蕾铃总数。5333结果分析对试验数据进行统计，计算不同处理棉田靶标害虫的百株幼虫数量、顶尖被害率、蕾铃被害率，比较转基因抗虫棉
12、品种田和对应的非转基因棉花品种田、当地主栽转基因抗虫棉品种田上述指标的差异，分析转基因抗虫棉品种对靶标害虫的抗性效率。附录AI资料性附录】农业部953号公告一1212007表A 1 转基因抗虫棉抗虫性评定标准抗性级别 幼虫校正死亡率Y() 叶片受害级别高抗(1级) Y90 1抗(2级) 90Y60 2中抗(3级) 60Y40 3低抗(4级) 40-f 4感(5级) 同感虫对照品种 5表A 2棉铃虫幼虫取食转基因抗虫棉叶片状况目测分级标准叶片受害级别 取食状况描述1 受害呈针头状不连片2 受害呈小片，但不超过叶面积的253 被害成片，超过叶面积的25，但不超过叶面积的504 被害成片，超过叶面积的505 叶片被大量取食，被害同感虫对照品种
