1、 ICS 11.220 B 41 DB51 四川省地方标准 DB51/T 14192012 大熊猫须癣毛癣菌病检疫技术规范 2012 - 03 - 30 发布 2012 - 05 - 01 实施四川省质量技术监督局 发布DB51/T 14192012 I 目 次 前 言 . II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 形态与生物学特性 1 5 临床诊断 2 6 实验室诊断 2 7 结果判定 3 附录A（资料性附录） 沙堡弱氏葡萄糖琼脂培养基 4 附录B（资料性附录） 试剂和染液配制 5参考文献 . 6 DB51/T 14192012 II 前 言 本标准由四川出入境检验
2、检疫局提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准发布。 本标准起草单位：四川出入境检验检疫局、四川农业大学、中国保护大熊猫研究中心。 本标准主要起草人：余华、杨光友、严玉宝、张和民、李德生、陈世界、王承东、胡娟、崔鹏博、周岷江。DB51/T 14192012 1 大熊猫须癣毛癣菌病检疫技术规范 1 范围 本标准规定了大熊猫须癣毛癣菌病的诊断与检疫方法。 本标准适用于大熊猫须癣毛癣菌病的常规诊断与检疫。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T
3、541 动物疫病实验室检验采样方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 大熊猫须癣毛癣菌病 Trichophy tosis for Giant panda 指须癣毛癣菌（Trichophyton mentagrophytes ）侵入大熊猫皮肤、黏膜及其附属物（毛发、爪等），并引起的一种感染性疾病。患病动物是本病的传染源，主要因接触而传染，也可经污染的用具或以饲养管理人员为媒介等间接经皮肤接触而传染，一年四季均可发生，但以潮湿的春、秋两季较多见。 4 形态与生物学特性 4.1 分型 须癣癣菌（T.mentagrophytes )又称石膏样毛癣菌。该菌在葡萄糖蛋白胨琼脂上， 28C培养，生
4、长迅速。根据菌落形态，可分为羊毛状或绒毛状型、粉末状或颗粒状型2种类型。 4.2 特性 4.2.1 羊毛状或绒毛状型 白色羊毛状菌丝充满斜面，绒毛状菌丝短而整齐，整个菌落只占斜面的1/31/2。培养基背面颜色为淡黄或棕黄色。镜检只见较细的，分隔菌丝和卵圆形小分生孢子，小分生孢子有时集聚成葡萄状，偶见球拍状菌丝和结节状菌丝，无螺旋菌丝和大分生孢子。 4.2.2 粉末状或颗粒状型 菌落表面为粉末状，色黄，充满斜面，培养基背面为棕黄或棕红色，镜检可见多种菌丝，如螺旋菌丝、球拍状菌丝、结节状菌丝等。小分生孢子呈球状，常聚成葡萄状。可见棒状大分生孢子，28个细胞，大小为40 60 m59 m，外壁薄而光
5、滑。 DB51/T 14192012 2 5 临床诊断 成年及幼年大熊猫均可感染须癣癣菌。与其它外寄生虫混合感染时，兼有相应症状。单独感染大熊猫时病初可见患部（四肢、背臀部、耳、腹部等处）小片状脱毛，皮肤发红，粗糙；有鳞屑痂皮，鳞屑呈浅灰色至褐色；患部出现灰褐色痂皮损害。随着病程延长，脱毛面积加大，结有厚的鳞屑痂皮，去痂皮后基底渗血，患处被毛失去光泽，不易折。 6 实验室诊断 6.1 直接涂片染色镜检法 6.1.1 试剂配制 10%KOH溶液配制见B.1 ；乳酸酚棉蓝染色液配制见B.2 。 6.1.2 镜检方法 按照NY/T 541“样品的采集”有关章节要求，刮取每只疑似患病动物患处的鳞屑、痂
6、皮、粘有渗出液的被毛适量，将所取标本直接置于玻片上，滴加1 0%KOH溶液2滴，使之透明软化后再滴加乳酸酚棉蓝染色液1滴，加盖玻片，在光镜下检查。观察到菌丝片段，即可初步判定有皮肤真菌感染。 6.2 病原菌分离 6.2.1 斜面培养法 ，又称大培养。 6.2.1.1 材料 沙堡弱氏葡萄糖琼脂培养基，制备见附录 A；待检标本；75% 酒精；接种针；温箱。 6.2.1.2 方法 6.2.1.2.1 将待检标本（如皮屑、甲屑或脱落的毛）用 75%酒精浸泡数分钟，以杀死表面细菌，然后用灭菌生理盐水充分洗涤。 6.2.1.2.2 按无菌操作法，用接种针将标本接种在含青霉素、链霉素的沙堡弱氏葡萄糖琼脂斜面
7、培养基上。 6.2.1.2.3 试管口用硫酸纸包好扎紧棉塞口，放置于 22温箱培养。 6.2.1.2.4 第 1 周观察 2 次，第 2 周隔日观察 1 次，3 周内不长出菌落，再重复做一次，若仍无菌落生长，可报告阴性。须癣癣菌在培养基上菌落由白色短羽状变为粉末状，淡黄色，表面光滑，有 35个同心圆，愈向外愈薄，菌落中心有纽扣状突起。随培养日期的延长，突起的表面产生短绒毛气生菌丝。 6.2.2 培养物的镜检 DB51/T 14192012 3 镜检培养物，可见有许多卵圆形的小分生孢子及不同直径，呈螺旋状、球拍状或破梳状的菌丝；或镜检时见较细的，分隔菌丝和卵圆形小分生孢子，小分生孢子有时集聚成葡
8、萄状，偶见球拍菌丝和结节菌丝，无螺旋菌丝和大分生孢子。 7 结果判定 临床症状符合5，即可初步诊断为须癣癣菌病。在培养基上菌落的生长特性、菌落形态及镜检菌丝和孢子的形态特征符合6.2.1.2.4和6.2.2即可判定为须癣癣菌病。 DB51/T 14192012 4 AA 附 录 A （资料性附录） 沙堡弱氏葡萄糖琼脂培养基 英文名称：SDB ；Sabourauds Broth；Sabouraud Dextrose Broth 其他名称：沙堡氏4%葡萄糖琼脂肉汤；萨布氏葡萄糖琼脂肉汤 用途：用于真菌检测 配方： （ g/L） 蛋白胨 10.0 葡萄糖 40.0 琼脂 20.0 pH值5.6 0.
9、2 25 原理： 蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；琼脂是培养基的凝固剂。 用法： 称取本品 70.0 g,加热搅拌溶解于 1000 mL 蒸馏水中，116高压灭菌 20 分钟，不要过分加热。 质量控制： 在 25 28培养4896小时。 质控菌株 菌株编号 生长情况 其它特征 黑曲霉菌 CMCC（F ）98003 良好 白色菌落 酵母菌 ATCC18790 良好 白色菌落 白色念珠菌 CMCC （F ）98001 良好 白色菌落 DB51/T 14192012 5 BB 附 录 B （资料性附录） 试剂和染液配制 B.1 10%KOH溶液 取 KOH 10 g，加蒸馏水溶解定容至100
10、mL ，即可。 B.2 乳酸酚棉蓝染色液 配方： 石碳酸 20 g 乳酸 20 mL 甘油 40 mL 棉蓝 0.05g 蒸馏水 20 mL 将棉蓝溶于蒸馏水中，再加入其它成分，微加热使其溶解，冷却后用。 DB51/T 14192012 6 参 考 文 献 1 赵长城， 訾士鲁， 李福宝. 兔皮肤真菌病的流行病学和诊断. 动物医学进展， 2005， 27（1） ： 104-107. 2 雷培琪，尹才渊，李正昌，等. Wistar大白鼠石膏样毛癣菌病的实验观察. 中国人兽共患病杂志，1994， 10（5）：44-45. 3 周永华，杨凤翔，朱朝君，等. 大熊猫幼仔皮肤病的病原及防治研究. 重庆医
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