1、ICS 11.220 B 41 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3053 2018 口蹄疫病毒 O 型抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法 The Rapid Detection Methods for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus Type O Lanthanide Fluorescence Immunochromatographic Assay 2018 - 10 - 30 发布 2018 - 11 - 30 实施 辽宁省 市场监督管理局 发布 DB21/T 3053 2018 I 目 次 前言 . II 1 范围
2、 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 原理 . 1 4 仪器与试剂 . 1 4.1 仪器 . 1 4.2 试剂 . 1 5 样品采集与处理 . 2 5.1 样品的采集 . 2 5.2 样品的处理 . 2 5.3 样品的贮存 . 2 6 检测方法 . 2 6.1 样品稀释 . 2 6.2 加样 . 2 6.3 检测 . 2 6.4 有效性判定 . 2 7 结果判定 . 2 附录 A（规范性附录） 样品稀释液的配置 . 4 DB21/T 3053 2018 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1给出的规则起草。 本标准由辽宁省畜牧兽医局提出。 本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。 本标准起草单位
3、：辽宁省动物医学研究院、 辽宁省动物疫病预防控制中心。 本标准主要起草人：顾贵波、杨本勇、申贯男、李井春、关淼、王宏燕、王竹、杨国丽 。 DB21/T 3053 2018 1 口蹄疫病毒 O 型抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法 1 范围 本标准规定了以镧系荧光免疫层析法检测牛、羊、猪血清中的口蹄疫病毒 O型抗体的检测方法。 本标准适用于牛、羊、猪血清中口蹄疫病毒 O型抗体水平的快速检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分
4、析实验室用水规格和试验方法 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 原理 采用免疫夹心 法 和镧系荧光免疫层析法相结合技术，检测动物血清样本中的口蹄疫病毒 O型抗体。 将镧系纳米荧光微球作荧光示踪物标记口蹄疫病毒 O型重组抗原，血清样本抗体与镧系纳米荧光微球标 记的口蹄疫病毒 O型重组抗原接触形成复合物后，继续与硝酸纤维素膜上检测线包被的口蹄疫病毒 O型重 组抗原发生 反应，形成抗原 -抗体 -荧光微球标记抗原免疫复合物，最后 用荧光检测仪读取检测卡上的荧 光信号。 4 仪器与试剂 4.1 仪器 4.1.1 镧系荧光 检测仪：激发波长为 400 nm 20 nm，检测波长为
5、 615 nm 10 nm。 4.1.2 单道可调移液器： 10 L 100 L， 0.5 L 10 L。 4.1.3 分析天平：感量 0.0001 g。 4.1.4 离心机。 4.1.5 冰箱： 2 8 ， -20 。 4.2 试剂 4.2.1 样品稀释液：见附录 A。 4.2.2 口蹄疫病毒 O 型抗体荧光免疫试剂卡：镧系荧光微球标记的口蹄疫病毒 O 型重组抗原和鸡 IgY 埋置在标记物垫内；硝酸纤维膜上的测试线（ T）和参考线（ C）分别包被口蹄疫病毒 O 型重组抗原和羊 DB21/T 3053 2018 2 抗鸡 IgY 的 IgG。（见图 1） 图 1 口蹄疫病毒 O 型抗体镧系荧光
6、免疫层析卡示意图 5 样品采集与处理 5.1 样品的采集 应按照 NY/T 541中的规定进行，并做好安全防护。按常规方法用干燥、洁净的离心管或适当容器采 集 3 mL 5 mL血液。 5.2 样品的处理 血液样本用离心机 3000 r/min离心 3 min，分离血清，血清量不少于 500 L。 5.3 样品的贮存 血清样本在 2 8 冷藏可保存 24 h， 如需长期保存应置 -20 或 -80 。 6 检测方法 6.1 样品稀释 将待检血清样本用样品稀释液进行 50 倍稀释。 6.2 加样 将 镧系荧光免疫层析卡 置于干净平坦的台面上，用移液器吸取已稀释好的待检样本垂直滴加 80 L 于加
7、样孔内 。 6.3 检测 避光层析 15 min 20 min， 30 min 内用镧系荧光检测仪检测，读取效价。 6.4 有效性判定 控制线（ C线）检测到荧光信号，实验结果有效。 7 结果判定 DB21/T 3053 2018 3 效价 128 时，判为阳性；效价 64 时，判为阴性；效价在 64 128 之间时，判为可疑 。 _ DB21/T 3053 2018 4 A A 附 录 A （规范性附录） 样品稀释液的配置 A.1 称取 Na2HPO412H2O 4.02 g A.2 称取 NaH2PO42H2O 0.66 g A.3 称取 NAN3 1.5 g A.4 称取硫酸葡聚糖（ MW:40000） 1.5 g A.5 量取 Tween-201 L 3.75 mL A.6 800 mL双蒸水放入 1 L烧杯。 A.7 A.1、 A.2、 A.3同时放入 A.6烧杯中搅拌溶化。 A.8 A.4 加入 A.7烧杯中混匀。 A.9 A.5 加入 A.8烧杯中混匀。 A.10 用双蒸水将 A.9烧杯溶液定容至 1 L。 A.11 混匀后分装，置 4 备用。 _ _
