1、第十章 巴比妥及苯并二氮杂卓类镇痛催眠药物的分析,一、巴比妥类药物的结构与性质,结构,5,5-取代的巴比妥类药物,性质,物理性质,1. 白色结晶或结晶性粉未，具有固定的熔点。,2. 游离巴比妥类药物微溶或极微溶于水，易溶于乙醇及有机溶剂；其钠盐则易溶于水，而不溶于有机溶剂。,化学性质,巴比妥类药物分子结构中都有1,3-二酰亚胺基团，能发生酮式和烯醇式的互变异构，在水溶液中可以发生二级电离。因此，本类药物的水溶液显弱酸性（pKa为7.3-8.4），可与强碱形成水溶性的盐类。,1. 弱酸性,与强碱的成盐反应：,2. 水解反应,（1） 与银盐的反应,3、与重金属离子的反应,（2）与铜盐的反应,有色配
2、位化合物,（3）与钴盐的反应,反应条件：无水; 所用试剂均应不含水分碱性：异丙胺,（4）与汞盐的反应,巴比妥类药物+汞盐白色可溶于氨试液）,4、 与香草醛（vanillin）的反应,紫色-蓝色,乙醇,5、 紫外吸收光谱特征,H2SO4溶液(0.05mol/L) pH9.9缓冲溶液 NaOH溶液(0.1mol/L) (pH 13),巴比妥类药物的紫外吸收光谱,A,nm,硫喷妥的紫外吸收光谱 HCl 溶液 (0.1mol/L) NaOH 溶液 (0.1mol/L),巴比妥类药物的紫外吸收光谱特征和其电离的程度有关 5,5-取代的巴比妥类药物在pH=2的酸性溶液中，因不电离，几乎无明显的紫外吸收。在
3、pH=10的碱性溶液中，发生一级电离于240 nm处有最大吸收。在pH=13的强碱性溶液中，发生二级电离，最大吸收红移至255 nm处。 硫代巴比妥类药物在酸性或碱性溶液中，均有较明显的紫外吸收。,7、显微结晶特征,药物本身的晶形 巴比妥：长方形； 苯巴比妥：球形花瓣状 反应产物的晶形 巴比妥铜吡啶试液 十字形紫色结晶 苯巴比妥铜吡啶试液 细小不规则或似菱形的浅紫色结晶,6、薄层色谱行为特征对照品对照鉴别,（1）与银盐的反应；（2）铜盐反应,二、鉴别试验,（一）、丙二酰脲类反应,（二）、特殊取代基及元素的反应,1. 硫元素的反应,司可巴比妥可使溴试液或碘试液褪色,2. 不饱和烃取代基的反应,
4、与溴试液或碘试液的反应, 与KMnO4的反应,可还原紫色的KMnO4为棕色的MnO2, 与NaNO2H2SO4反应,苯巴比妥与甲醛H2SO4反应生成玫瑰红色,苯巴比妥与NaNO2H2SO4反应生成橙黄色橙红色, 与甲醛H2SO4反应,硝化反应,3.芳香取代基的反应,（三）、特征熔点行为,巴比妥类的钠盐酸 游离巴比妥类药物 过滤 洗涤 干燥 测熔点,苯巴比妥钠的鉴别,取本品约0.5 g，加水5 ml溶解后，加稍过量稀盐酸，即析出白色结晶性沉淀，滤过；沉淀用水洗净，在105干燥后，依法测定，熔点为174-178。,（四）、吸收光谱特性红外分光光度法,三、特殊杂质检查,（一）、苯巴比妥的特殊杂质检查
5、酸度乙醇溶液的澄清度中性或碱性物质有关物质 （二）、司可巴比妥钠的特殊杂质检查溶液的澄清度中性或碱性物质,终点指示：电位法指示（Ag电极为指示电极，饱和甘汞电极为参比电极）；自身指示,（一）、银量法,原理 ：适当碱性溶液中，药物与银离子定量反应，可采用银量法进行本类药物及其制剂的含量测定，反应摩尔比（11）。,溶剂系统：甲醇+3%无水碳酸钠,四、含量测定,苯巴比妥：取本品约0.2 g，精密称定，加甲醇40 ml使溶解，再加新制的3无水碳酸钠溶液15 m1，照电位滴定法，用硝酸银滴定液（0.1 mol/L）滴定。每1 ml 硝酸银滴定液（0.1 mo1/L）相当于23.22 mg的C12H12N
6、2O3。,测定方法与计算,原料药：直接滴定法,注意事项,（1）无水碳酸钠应新鲜配制 （2）AgNO3滴定液应新鲜配制 （3）银电极使用前应进行处理,原理：凡取代基中含有双键的巴比妥类药物，其不饱和键可与溴定量地发生加成反应，故可采用溴量法进行测定。如司可巴比妥钠及其胶囊的测定,二、溴量法,I22Na2S2O32NaINa2S4O6,KBrO35KBr6HCl3Br26KCl3H2O,Br22KI2KBrI2,司可巴比妥钠：取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水10m1，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L）25ml，再加盐酸5m1，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15m
7、in后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10m1，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。,测定方法与计算,原料药：剩余滴定法,注意事项,（1）操作中要防止溴和碘的逸失 （2）平行条件进行空白试验可减少溴和碘逸失带来的误差。,1.在水醇混合溶剂中的滴定法弱酸性 pKa7.38.4,异戊巴比妥,水醇,溶解,麝香草酚酞,NaOH,淡蓝色,（三）、酸碱滴定法,此法终点判断较困难,取本品约0.5 g，精密称定，加乙醇20 m1溶
8、解后，加麝香草酚酞指示液6滴，用氢氧化钠滴定液（0.1 mo1/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每l ml氢氧化钠滴定液（0.1 mol/L）相当于22.63 mg的C11H18N2O3。,异戊巴比妥的含量测定,溶 剂：二甲基甲酰胺滴定剂：甲醇钠（钾）指示剂：麝香草酚蓝,3、 非水溶液滴定法,2、在胶束水溶液中进行的滴定法,溶 剂：表面活性剂-溴化十六烷基三甲基苄胺水溶液滴定剂：氢氧化钠滴定液指示剂：麝香草酚肽,(四)、紫外分光光度法,1. 直接紫外分光光度法,本法是将样品溶解后，根据溶液的pH值选用其相应的max处进行直接测定。,单组分定量方法：,取装量差异项下的内容物，混合均匀
9、，精密称取适量（约相当于硫喷妥钠0.25g），置500ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液；另取硫喷妥对照品，精密称定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5g的溶液。照分光光度法，在304nm的波长处分别测定A，根据每支的平均装量计算。每1mg硫喷妥相当于1.091mg的C11H17N2NaO2S。,如注射用硫喷妥钠的含量测定,2. 经提取分离后的紫外分光光度法根据巴比妥类药物具有弱酸性，在氯仿等有机溶剂中易溶，而其钠盐在水中易溶的特点，本法可消除干扰物质对巴比妥类药物测定的影响。取钠盐加水溶解，加酸酸化，用
10、氯仿提取后再加碱反提。排除辅料或杂质的干扰。,测定方法-取两份相等的供试溶液，分别制成两种不同的化学环境（如在其一中加酸、碱或缓冲液改变溶液的pH，或在其一中加能与供试品发生某种化学反应的试剂），然后将两者分别稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一份置参比池中，于适当波长处，测其吸收度的差值（A值）。,3. 多组分混合物不经分离的定量方法 计算分光光度法差示分光光度法（A法）,必要条件,（1）供试品在不同的化学环境中以不同的分子形式存在，它们的吸收光谱有显著的差异。（2）干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变。,供试品在两种不同的化学环境中分别以x、y 表示，干扰物用 z 表示,3.
11、 定量依据,即，吸收度差值（A）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，即干扰组分的干扰被消除。,可用对照法或标准曲线法定量,保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰。,特点,应用,（1）于波长240 nm处，测定pH10和pH2两种溶液的吸收度之差,（2）于波长260 nm处，测定pH10和强碱溶液的吸收度之差,（五）、高效液相色谱,HPLC法同时测定人血清中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的浓度,色谱条件：色谱柱 AgilentZORBAX SB- C18柱( 250 4.6mm ,5m) , 流动相为甲醇水乙腈(454510 ） 流速1.0ml/min,
12、柱温30, 检测波长254nm。 血样处理：取内标溶液100L，60水浴氮气吹干，加200L待测血清, 加提取液（氯仿：乙酸乙醋=50：50）2ml, 旋涡混合5min, 以4000转/分离心10min, 用吸管吸取上层水层, 弃去。用移液管移取有机相置带盖尖底塑料离心管中, 于60水浴中氮气吹干, 用流动相200L溶解, 取20L进样测定,方法验证：标准曲线与线性、精密度（RSD 3%) 、方法回收率、提取回收率（大于87%）、稳定性等均符合中国药典的要求,第二节 苯并二氮杂卓类药物的分析,药物结构：,硝西泮,阿普唑仑,药物性质,1. 苯并二氮杂卓母核 弱碱性2. 结构中的环一般比较稳定，但
13、在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物。3.不同pH条件下离子状态不同，UV不同,1. 沉淀反应 氯氮卓 橙红色沉淀阿普唑仑 盐酸氟西泮 KBiI4 也生成橙红色沉淀氯硝西泮 放置后，沉淀颜色变深，,二、鉴别试验,阿普唑仑 + 遇硅钨酸 白色沉淀，药典中用于鉴别。,(一)化学鉴别试验,2. 硫酸-荧光反应 本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，显 不同颜色的荧光。例如：,地西泮 黄绿色 黄色氯氮卓 黄色 紫色艾司唑仑 + H2SO4 亮绿色 + 稀硫酸 天蓝色硝西泮 淡蓝色 蓝绿色奥沙西泮 淡黄绿色,4. 含卤素,（二）特征基团反应,2.水解后呈芳伯胺反应,1.氯化物的鉴别试验,
14、（三）紫外特征吸收和红外吸收光谱 （四）色谱法TLC法 酸水解产物的TLC法,三、特殊杂质与检查氯氮卓中有关物质的检查：HPLC法三唑仑中有关物质的气相色谱检查,四、含量测定（一）非水溶液滴定法,1.非水碱量法,2.非水酸量法,供试品不需提取分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。1.奥沙西泮原料的测定 在229nm，采用标准对照法测定。2.硝西泮片、氯氮卓片等的测定：,(二）紫外分光光度法,(三）高效液相色谱法,六高效液相色谱法：加扫尾剂法：以十八烷基硅烷（ODS）键合的硅胶为固定相，在流动相中加入扫尾剂，以抑制或掩蔽固定相表面的游离硅醇基的活性。最常用的扫尾剂是三乙胺（TEA）。离子对HPLC 法,
