1、AKTA Purifier使用,一、仪器使用注意事项,AKTA purifier,流路图,Inlet,Pump,压力感应器,混合器,在线滤器,进样阀,色谱柱,紫外检测器,电导检测器,PH计,收集器,使用环境,对操作环境的要求： 室内温度：440度 相对湿度：1090 输入电压：100240VAC 功率：400AV900AV 重量：40KG-70KG 注意事项： 1、主机要有良好的接地；计算机和主机不要用同一电源 2、当把主机置于远端控制时，com线不要长于15m,仪器使用（1）,准备工作： 1、Buffer、超纯水、20%乙醇，0.45um或0.22um滤膜过滤、除气。 2、样品15000rp
2、m离心10min，除颗粒、除气。,仪器使用（2）,以分子筛为例： 1、清空废液缸。 2、准备好收集管。 3、开机：先开主机，后开电脑，避免连接错误。 4、将入口崩头A轻轻放入超纯水中，注意A和B不要搞反。如有需要此时可更换定量环。 5、检查泵后润洗液是否充足，泵后管路是否充满，允许有少量气泡。 6、对A泵两个泵头进行抽气，各10ml。 7、打开程序，低流速运行5分钟，然后运行Pumpwash，观察压力是否正常 8、使用Inject模式冲洗10ml，待紫外平稳即可装柱,仪器使用（3）,装柱：在有流速和设置保护压力的情况下装柱，约0.3ml/min，从上到下，打开柱子上端后，使液体充满上端，避免进
3、入气泡，然后将上端拧成半紧状态。然后打开下端，再将上端拧紧。120ml柱子可直接观测接口管路一段时间，看是否有气泡 装好后检查紫外检测线，以及出口处出液情况。 注意：在管路连好后，稍微将连接处管路向外拔一下，如果很容易拔出说明没连好。,仪器使用（4）,柱子连好后观察压力情况，刚接上一般压力比正常压力稍低，属正常现象。 即使压力不超过报警压力，也不要将流速提高到正常流速以上。Superdex75 10/300GL 24ml 流速0.6ml/minHighload16/60 superdex75 120ml 流速1ml/min 20%乙醇流速减半。,仪器使用（5）,进样： 1、用注射器洗进样环，特
4、别是入口处容易残留上次进样样品，需要特别注意。 2、进样时保证进样阀处于load位置。 3、注射器吸取样品时，尽量避免气泡，少量微小气泡关系不大。 4、进样体积大于定量环体积，否则容易进气泡。,仪器使用（6）,使用完毕： 1、系统保存于20%乙醇 2、倒掉废液 3、擦干所有积水 4、仪器配件归位,维护每天：,系统（System）： 检查系统是否渗漏. 如果数天不使用仪器，须用水将系统冲洗干净， 并将层析柱和pH计拆下，之后用20%乙醇清洗系 统，并用20的乙醇保存所有的流路。 系统泵（Pump P-900）: 检查系统泵是否渗漏，如果发现泵头发生渗漏，或是流量不准确，则需更换泵头密封圈。更换缓
5、冲液时，需排尽泵头里的残存气泡，否则会影响流速的准确性。,维护每周,缓冲液筛网（Inlet filters）： 检查筛网是否很脏，如有必要须更换. 在线滤器（On-line filter）： 清洗滤器，如有必要须更换滤膜，否则会形成 很高的在线压力，损坏层析柱。泵冲洗液（Pump rinsing solution）： 更换泵后冲洗液（20%乙醇）。如果冲洗液瓶中液体量增加，说明泵头密封圈渗漏，须更换,维护每三个月,紫外监测仪（Monitor UV-900）： 检测光源强度（应大于20）及使用时间（大于4000hr）、光栅翻转时间（大于2000hr）保护光纤，防止折断或扭弯，否则无法采集数据或数
6、据不准 在不做柱层析时，注意关掉光源，尽量延长灯的使用寿命和减少光栅的机械磨省。,10ml系统,100ml系统,维护每六个月,Monitor UV-900 清洗UV流通池，如果样品很脏则须更频繁的清洗.Monitor pH/C-900 检查和校正pH计 （pH计在不使用时必须保存在下述溶液中： 1:1 mixture of pH 4 buffer and 2 M KNO3或pH4.0的饱和KCl溶液中）Mixer M-925 检查混合仪及接头是否松动,维护每年,Valve INV-907, IV-908 and PV-908 检查阀是否渗漏，如果渗漏则需更换阀头,维护每两年 Mixer M-9
7、25 更换混合池,系统清洗（Cleaning the system）,每天工作结束后(At the end of the day) 如果系统仍将使用之前一天的相同缓冲液，则可以用10的使用流速，用缓冲液冲洗泵 如果将在第二天更换缓冲液，则需用水用PumpWash功能将泵冲洗干净几天停用仪器（Leaving for a few days） 先用水PumpWash冲洗之后，再用20%的乙醇将系统冲洗干净，包括所有的进口管路和出口管路都用20的乙醇保存好,每月清洗（Monthly cleaning） 必须每月按时清洗系统或在遇到问题时清洗系统（如色普峰出现重影）： 用1M NaOH ，执行Syste
8、mWash指令. 之后立即用水将NaOH冲洗干净.,系统移动（Moving the system）,移动系统时小心谨慎，拆下外围的部件和管道，并防止剧烈震动，,小心！（WARNING!）,在更换部件时必须关掉所有的电源.如果有水或缓冲液渗入到仪器内部带电部位，须立即关掉电源，并求助于维修工程师,P900柱塞泵 初次使用或停用一段时间后再次使用时，首先以较低的流速运行，逐渐增加流速。切记不要开机后即高速运行,需要注意的问题,1、废液溢出 注意：每次用完倾倒废液，使用之前看下废液缸，没倒的话，清空并提醒上一位同学。 2、不充20%乙醇 注意：2天不用必须充20%乙醇，当天必须充上水，切忌保存在Bu
9、ffer里 3、使用频率过高，时间过长。 注意：尽量节约蛋白使用，减少仪器使用次数。使用时尽量节约时间，平衡时不需要走整个柱体积，进样后也一样。合理安排时间，尽量不要出现因为有事而长时间的空走。 4、用大柱子进行分析 注意：大柱子用于制备，小柱子进行分析。 5、开机使用pumpwash 注意：为避免对泵造成损伤，开机运行后不要立即使用pumpwash，应先用低流速走几分钟。保证抽过泵头后，可省略pumpwash。 6、注意平衡时关闭紫外灯。 7、压力偏高时请不要降低流速继续使用，考虑更换滤器和通知管理员冲洗柱子。 8、所有配件和说明书使用完后必须归位。,二、层析原理,三、Unicorn 使用,
