1、临床常见细菌鉴定的思路,检验科 张诗海,细菌鉴定的指南,一、培养特性1、温度2、气体3、营养要求4、PH5、湿度,细菌鉴定的指南,二、生长特性1、生长速度2、菌落特征3、液体培养基的生长特性 三、细菌的形态与染色 四、生理及生化特性 五、血清学诊断 六、致病性试验：动物接种,细菌的分类及鉴定步骤,细菌的分类单位 由高到低 分7个层次，界 门 纲 目 科 属 种有的种还分血清型（如沙门菌及志贺菌等）和生物型（如流感、副流感嗜血杆菌1-8生物型等）还有噬菌体分型（如伤寒沙门菌、铜绿等）。,细菌鉴定步骤,1、首先必须分离有单个菌落的纯培养 2、革兰氏染色，先确定是G-b，G+b，G+c，G-c 3、
2、如为G-b，G-c先做氧化酶试验，如为G+c或G+b先做触酶，根据结果，选择最少几项关键性鉴定试验。,G+c(动力、触酶、O/F),w/- F,+ O/-,+ F,+/- - F,微 球 菌,气 球 菌,链 球 菌,葡 萄 球 菌,革兰阳性球菌 之葡萄球菌,一、革兰阳性球菌，排列成葡萄状，触酶（+） ：首先做血浆凝固酶试验、甘露醇、尿素及对新生霉素的敏感性，如果确定不了，再加做麦芽糖、蔗糖、蕈糖、木糖、硝酸盐，同时结合菌落颜色和溶血情况。,几种常见葡萄球菌的鉴定,凝固酶 甘露醇 尿素 新生 金葡 + + - S 中间 + - - S 表皮 - - d S 腐生 - + + R 溶血 - d -
3、 S,革兰阳性球菌 之链球菌,二、革兰阳性球菌，排列成链状，触酶（-） ： 根据溶血情况，先做七叶苷 6.5%NaCl 肉汤。,溶血：1、 - - 沉淀生长，加做杆菌肽S为化脓性链球菌2、 - - 微混，加做CAMP+为B群链球菌（无乳链球菌）3、 - - 沉淀生长，加做杆菌肽R，为溶血性链球菌（非A、B）4、 + 沉淀生长，加做杆菌肽R，为咽峡链球菌（草链中的一种）,革兰阳性球菌之链球菌, 溶血：1、 -或+ - 沉淀生长，为草链2、 - - 混浊生长，加做胆汁溶菌试验+，菊糖+，Optochin S，为肺炎链球菌,不溶血或 溶血：1、 + - 混浊生长，为D群链球菌2、 + + 混浊生长，
4、为肠球菌,革兰阳性球菌,如D群链球菌和肠球菌要进一步鉴定：,D群链球菌乳糖+ -牛链 马肠链,肠球菌山梨醇 + -棉子糖 甘露醇+ - + -粪肠球 禽肠球 屎肠球 坚忍肠球,革兰阳性球菌之绿色气球菌,绿色气球菌是一种条件致病菌，它可引创面感染、败血症等。 绿色气球菌在血平板上生长灰色、光滑、有 溶血的菌落。革兰染色为G+C，排列呈四联状。 绿色气球菌生化反应试验 +% 试验 +% 试验 +%触酶* 0 麦芽糖 100 阿拉伯糖 48硝还* 0 蔗糖 100 棉子糖 19七叶苷 * 100 乳糖 90 木糖 106.5%NaCl * 100 果糖 100 山梨醇 0葡萄糖* 100 蕈糖 90
5、甘露醇* 86 水杨苷 76*为确诊试验,革兰阳性球菌之溶血孪生球菌,本菌染色多变，可以染成阴性，呈单个或成双、短链排列。血板上35度培养24h形成较大的菌落，呈水滴状，易融合生长，48h后菌落周围出现宽大的透明溶血环，有自溶现象，类似肺炎链球菌的菌落。肉汤培养中呈混浊生长，6.5%高盐肉汤中能生长。生化反应：触酶-，氧化酶-，分解葡萄糖、果糖；不分解乳、麦、菊、蔗、阿拉伯糖、甘露醇、卫矛醇；七叶苷-，靛基质-。对青、氯霉素敏感，对丁胺卡那耐药。,革兰阳性球菌之马红球菌,马红球菌是马、猪和牛的致病菌，近来发现本菌也可引起艾滋病、血液病和肾移植病人的肺部感染。,本菌为革兰阳性无动力杆菌，为多形态
6、，有时呈杆状，有时呈球状。在血平板上35 24-48h，可长出淡桔红色到粉红色的粘液样大菌落，不溶血。,生化反应：触酶+，氧化酶-，硝还+，靛基质-，枸盐-，明胶酶-，脲酶不定，不分解糖类，可形成类CAMP样反应。,G-c(触酶、氧化酶、 O/F),+ + o,脑膜炎奈瑟氏菌 淋病奈瑟氏菌 其他奈瑟菌,布兰汉菌属 金黄色奈瑟菌,革兰阴性双球菌,氧化酶+脑膜炎 卡他布 淋病双球菌 兰汉菌 奈瑟菌 葡萄糖 + - + 麦芽糖 + - - 硝还 - + - DNA酶 +,G-b(动力、氧化酶、触酶、O/F),- + + -,莫 拉 菌 属,+ + + -,- + + fw-,- + + -,+ +
7、+ 0/f,- + + f,+ + + F,- - + O/-,- - - F,+ + +,+ - + -,嗜 血 杆 菌,黄 色 杆 菌,莫 拉 菌 属,假 单 胞 菌,巴 斯 德 菌,弧 菌 属,不 动 杆 菌,产 碱 杆 菌,军 团 菌 属,弯 曲 杆 菌 属,邻 单 胞,气 单 胞,+ +/- - F,肠 杆 菌 科,革兰阴性杆菌之嗜血杆菌,嗜血杆菌为G-小杆菌，在巧克力平板上生长灰色、透明的小菌落，似露滴状，有时呈球杆菌，有时呈丝状，一般情况下在血平板上不生长。,氧化酶（弱+），在血平板和MH上同时做卫星试验，两种平板上均阳性，为副流杆菌嗜血杆菌，血平板上阳性、MH上阴性，为流感嗜血
8、杆菌。,注：杜克嗜血杆菌是软性下疳的病原菌，72h后才生长细小的菌落，阴道分泌物培养时要注意。,革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验,涂片为革兰阴性杆菌，做氧化酶试验。1、氧化酶- 做全套生化 克氏双糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、葡萄糖、甘露醇、IMViC、硝酸盐,革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验,致病性大肠埃希菌 克氏双糖、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、IMViC、山梨醇。,迁徙生长，可能为变形杆菌 克氏双糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、靛基质、麦芽糖。,灰凸的菌落，染色为典型的阴性球杆菌 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、丙二酸盐、42。,灰黄色菌落 可能为嗜麦
9、芽窄食假单胞菌 同氧化酶+ 生化试验。,革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验,2、氧化酶+全套生化 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、乙酰胺。可疑气单胞菌 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、赖氨酸、蔗糖、VP（25）。可疑弧菌 同气单胞菌生化试验，另加不同浓度的NaCl。,肠杆菌科,肠杆菌科为一大群革兰阴性杆菌，氧化酶阴性. 多数菌种为周毛菌，能运动，少数无鞭毛，不能运动。 绝大多数菌种在普通营养琼脂上生长良好。 发酵葡萄糖，还原硝酸盐。 临床常见的10多个菌属，30多个种。,肠杆菌科与其他科细菌的区别,试验 肠杆菌科 弧菌科 非发酵菌葡萄糖发
10、酵 F F O/- 氧化酶 - + +* 形态 杆状 弧形或杆状态 杆状 鞭毛 周毛或无 单毛 单毛、丛毛、 周毛或无* 不动杆菌和嗜麦芽窄食假单胞菌除外。,肠杆菌科的初步分类,肠杆菌科初步分类 菌属 苯丙氨酸 葡萄糖酸盐 埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 枸橼酸杆菌属 爱德华菌属 耶尔森菌属 克雷伯菌属 + 肠杆菌属 + 沙雷菌属 + 哈夫尼亚菌属 + 变形杆菌属 + 摩根菌属 + 普罗维登斯菌属 + ,苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性各菌属的鉴别,枸橼酸 爱德华 结肠 试验 埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 杆菌属 菌属 耶尔森菌 动力 +/- - + + + -* 硫化氢 - - +/- +/- + -
11、 靛基质 + -/+ - -/+ + -/+ 枸橼酸盐 - - +/- + - - 脲酶 - - - -/+ - +/- 赖氨酸 +/- - +/- - - +/-*25-30培养动力+,葡萄糖酸盐阳性各菌属的鉴别,试验 克雷伯菌属 肠杆菌属 沙雷菌属 哈夫尼亚菌属 动力 - + + + 山梨醇 + +/- + - DNase - - + - 明胶酶 - - + -,苯丙氨酸阳性各菌属的鉴别,试验 变形杆菌属 摩根菌属 普罗维登斯菌属 硫化氢 + - - 枸橼酸盐 +/- - +/- 鸟氨酸 +/- + -,大肠埃希菌与其他3种埃希菌的鉴别,黄色素 吲哚 乳糖 山梨醇 戊五醇 大肠埃希菌 -
12、+ + + - 弗格森埃希菌 - + - - + 赫曼尼埃希菌 + + d - - 伤口埃希菌 d - -/+ - -,志贺菌属的生化反应,试验 反应 试验 反应 葡萄糖产气 -* 吲哚 d 乳糖 -* 甲基红 + 蔗糖 - VP - 甘露醇 +/- 枸橼酸盐 - 卫矛醇 - 丙二酸盐 - 肌醇 - KCN - 水杨苷 - 明胶酶 - 硫化氢 - 赖氨酸 - 脲酶 - 动力 - *福氏6型某些生物型、鲍氏志贺菌13、14型可产生少量气体。 *宋内志贺菌可迟缓发酵乳糖,志贺菌属的血清反应,本菌属仅有菌体（O）抗原，而无鞭毛（H）抗原。某些菌株在新分离时，有表面（K）抗原，可阻止O抗原与相应诊断血
13、清发生凝集反应。K抗原不耐热，加热10060min即可破坏，而O抗原为多糖复合物，耐热，加热后不被破坏，仍可与特异性抗血清凝集。根据生化反应和O抗原之不同，可将志贺菌属分为四个血清群。A群 即痢疾志贺菌，均有K抗原，国内仅发现1、2型。B群 福氏志贺菌，C群 鲍氏志贺菌，D群 宋内志贺菌，仅1个血清型。,沙门菌属的生化反应,试验 反应 试验 反应 葡萄糖产气 +* 吲哚 - 乳糖 - 甲基红 + 蔗糖 - VP - 甘露醇 + 枸橼酸盐 +/- 麦芽糖 + 丙二酸盐 - 鼠李糖 + KCN - 水杨苷 - 明胶酶 - 硫化氢 +* 赖氨酸 +* 脲酶 - 动力 +* *伤寒沙门菌不产气 *鸡沙
14、门菌和雏沙门菌无动力 *甲型副伤寒沙门菌赖氨酸、硫化氢均为阴性。,枸橼酸杆菌属的鉴别,菌种 硫化氢 吲哚 侧金盏花醇 丙二酸盐 弗劳地枸橼杆菌 + - - -/+ 异型枸橼酸杆菌 - + + + 丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌 - + - -,爱德华菌属,爱德华菌属有3个菌种，只有迟缓爱德华菌有临床意义，可引起腹泻、伤口感染和败血症。生化特性是发酵葡萄糖产酸产气，不分解甘露醇、乳糖，产硫化氢，IMViC为+-。动力+，赖氨酸、鸟氨酸+，精氨酸-。,耶尔森菌属,耶尔森菌属包括11个菌种，其中最重要的为3个菌种。 3种耶尔森菌的生化鉴别 菌种 动力 VP 吲哚 脲酶 山梨醇 鸟氨酸 鼠疫耶尔森菌 25-
15、- - d - -35- - 假结核耶尔森菌 25d - - + - -35- - 小肠结肠炎耶尔森菌 25+ +/- d +/- + +35- -,7种克雷伯菌属种间的主要鉴别,菌种 吲哚 甲基红 VP 枸盐 丙二 鸟氨酸 42 4 肺炎克雷伯菌 - - + + + - + - 产酸克雷伯菌 + -/+ + + + - + - 臭鼻克雷伯菌 - + - -/+ - - + - 鼻硬结克雷伯菌 - + - - + - + - 解鸟氨酸克雷伯菌 + + +/- + + + + + 植生克雷伯菌 -/+ + + + + - + + 土生克雷伯菌 - d + d + -/+ - +,4种肠杆菌种间生
16、化反应鉴别,菌种 山梨醇 脲酶 赖氨酸 精氨酸 阴沟肠杆菌 + +/- - + 产气肠杆菌 + - + - 格高菲肠杆菌 - + + - 坂崎肠杆菌 - - - +,3种沙雷菌的生化鉴别,试验 粘质沙雷菌 液化沙雷菌 深红色沙雷菌 阿拉伯糖 - + + 棉子糖 - + + 木糖 - + + 乳糖 - - + 山梨醇 + + - 丙二酸盐 - - + 鸟氨酸 + + -,3种变形杆菌的鉴别,菌种 吲哚 麦芽糖 鸟氨酸脱羧酶 普通变形杆菌 + + - 奇异变形杆菌 - - + 潘氏变形杆菌 - + -,3种普罗威登斯菌的生化鉴别,菌种 脲酶 甘露醇 侧金盏花醇 鼠李糖 雷极普罗威登斯菌 + + +
17、 +/- 斯图普罗威登斯菌 -/+ - - - 产碱普罗威登斯菌 - - + -,摩根菌属,摩根菌属只有一个菌种，即摩根摩根菌，生化反应不活泼，发酵葡萄糖产酸，脲酶阳性，IMViC+-，苯丙、鸟氨酸+，赖氨酸、精氨酸-。,非发酵菌的初步鉴定,1、氧化酶试验 2、葡萄糖发酵试验 3、动力及鞭毛 4、色素 5、还原硝酸盐及产N2,几种非发酵菌与弧菌科菌的鉴别,血平板 氧化酶 克氏 葡糖 甘 动力 靛 枸 硝 七 乙 明胶 铜绿 灰绿，溶血 + -/- （O） - + - + + - + + 嗜麦芽 灰黄色 - -/- （O） - + - + +/- + - + 腐败 红棕色 + -/-H2S （O
18、） - + - - +/- - - + 恶臭 灰白色 + -/- （O） - + - +/- - - - - 荧光 灰色 + -/- （O） - + - + -/+ - - + 洋葱 黄色（多B R）（+)/- -/- （O） - + - +/- -/+ +/- +/- +/- 产碱 灰色，溶血 + -/- （O)/- - + - + -/+ - -/+ - 不动 灰白色 - -/- （O)/- - - - +/- - - - -/+ 莫拉 灰色 + -/- - - - - - +/- ND ND -/+ 黄杆菌 黄色 + -/- （F)/- - - (+)/- + -/+ +/- +/- 黄
19、单胞 黄色 + -/- （O)/- - + - (+)/- - +/- +/- 气单胞 暗灰绿，溶血 + -/+ F + + + -/+ + +/- ND + 邻单胞 灰白或灰色 + -/+ F - + + - + - ND -注：（O）：弱阳性； O：氧化型； F：发酵型； ND：无资料,非发酵菌之不动杆菌属,不动杆菌属菌为革兰阴性球杆菌，氧化酶-，触酶+，靛基质-，甘露醇- ，动力- ，硝还- 。,不动杆菌属6个种的生化特性 醋酸钙 鲍曼 溶血 琼氏 约翰逊 洛菲 生长于:44 - + - - - -41 - + - + - -37 + + + + - + 明胶 - - + - - - 溶
20、血 - - + - - - 枸橼酸盐 + + + +/- + - 丙二酸盐 + + - - -/+ - 葡萄糖 + + +/- - - - 木糖 - + +/- - - - 乳糖 + + - + + -,非发酵菌之黄杆菌属,黄杆菌属为革兰阴性杆菌，氧化酶+，触酶+，动力- ，菌落产黄色素。,临床常见黄杆菌的生化反应脑膜败血 芳香 短小 吲哚 +* - +* 硝酸盐还原 - - - ONPG + - - DNA水解 + + + 七叶苷水解 + - - 明胶酶 + + +尿素酶 - + -/+ 枸橼酸盐 - - -*:量很少，要用二甲苯提取后才能测出,弧菌科,氧化酶+，发酵葡萄糖。弧菌科3个菌属的
21、鉴别气单胞菌属 邻单胞菌属 弧菌属 甘露醇 + - +/- 鸟氨酸 - + +/- 精氨酸 +/- + +/- 嗜盐性 - - +/-,致病弧菌的生化特性,试 验 霍乱 拟态 副溶血 创伤 溶藻 河流 靛基质 + + + + +/- - V-P +/- - - - + - 西蒙枸橼酸盐 +/- +/- + + +/- + 葡萄糖产气 - - - - - - 蔗糖 + - - - + + 甘露醇 + + + +/- + + 阿拉伯糖 - - + - - + 水杨苷 - - - + - - 硝酸盐还原 + + + + + + 赖氨酸脱羧酶 + + + + + - 鸟氨酸脱羧酶 + + + + +/
22、- - 精氨酸双水解酶 - - - - - + 0g/L NaCl + + - - - - 30.0g/L NaCl + + + + + + 60.0g/L NaCl - - + +/- + + 100.0g/L NaCl - - - - + -,7种嗜温气单胞菌生化特性,亲水 豚鼠 温和 维隆 舒伯特 简达 易损 葡萄糖产气 + - + + - + + V-P(25) + - + + V + - 七叶苷/水杨素 + + - + - - - 甘露醇/靛基质 + + + + - - + 蔗糖 + + + + - - - 纤维二糖 - +/- +/- + - - + 精氨酸双水解酶 + + + -
23、 + + + 赖氨酸脱羧酶 + - + + + + + 鸟氨酸脱羧酶 - - - + - - -,G+b(动力、触酶、O/F),动力、触酶、O/F,动力 、溶血、菌落,丹毒死丝菌属 乳杆菌属 棒状杆菌属 李斯特菌属 库特菌属 罗氏菌属 奴卡菌属,芽孢,-,+,炭疽芽孢杆菌,革兰阳性杆菌之奴卡菌属,奴卡氏菌:革兰阳性杆状、球杆状，不同种类可产生不同的色素，如橙红、粉红、黄、黄绿、紫及其他颜色，有皱褶，颗粒状。抗酸染色呈弱阳性，主要是星形奴卡菌和巴西奴卡菌。,奴卡菌的生化特性,星形 巴西 豚鼠 明胶 - + - 50 8h + - + 七叶苷 - + + 枸橼酸 V + - 尿素 + + + 葡萄
24、糖 肌醇 - + +,革兰阳性杆菌之李斯特菌,本菌属有8个菌种，只有产单核细胞李斯特菌和伊万诺夫李斯特菌两种有致病性。本菌为兼性厌氧菌，对营养要求不高，能在4 生长是其特点，在血平板上35培养18-24h，能产生狭窄的 溶血环。菌落为灰白色，直径1-2mm，在肉汤中混浊生长。本菌为革兰阳性杆菌，通常成双排列，有鞭毛，在25 有动力，不产芽胞。,两种李斯特菌的鉴别,特性 产单核 伊万诺夫 CAMP（金葡） + - CAMP（马红球菌） - + 甘露醇 - - 鼠李糖 + - 木糖 - + 葡萄糖产酸 + + 甲基红 + ND VP + ND 七叶苷 + ND 动力 + ND 触酶 + ND,革兰
25、阳性杆菌之分枝杆菌,1、缓慢生长的分枝杆菌： 革兰阳性杆菌，抗酸染色阳性。 此类菌主要为结核分枝杆菌，只能在35-37 生长，在25 不能生长，普通琼脂不长，初代培养需3周以上才能生长菌落。 其他缓慢生长分枝杆菌，大多能在25 生长。 结核分枝杆菌确定试验：暗产色-、光产色-、耐热触酶-、硝酸盐+、吐温80水解-，尿素酶+。,革兰阳性杆菌之分枝杆菌,2、快速生长的分枝杆菌 革兰阳性杆菌，抗酸染色阳性。 25 、35 均生长，血平板、普通琼脂均生长， 初代1周以内生长。 主要为偶发分枝杆菌和龟分枝杆菌，龟分枝杆菌又分龟亚种和脓肿亚种。,常见几种快速生长分枝杆菌的鉴定,偶发 龟亚种 脓肿亚种 45生长 - - - 暗产色 - - - 光产色 - - - 麦康凯琼脂（28） + + + 硝酸盐 + d - 铁吸收试验（28） + - - 5%NaCl 肉汤（28） + - + 阿拉伯糖 - - - 卫矛醇 - - - 枸橼酸盐（28） - + - 甘露醇（28） - - -,谢谢！,
