1、1专题 15 基因工程和细胞工程1在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因( kan)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。如图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答下列问题：(1)A过程需要的酶有_和_。(2)要把重组质粒导入土壤农杆菌，首先必须用_处理土壤农杆菌，使土壤农杆菌转变为_态；然后将_在缓冲液中混合培养完成转化过程。(3)含有重组质粒的土壤农杆菌侵染离体棉花叶片组织后，将离体棉花叶片组织培养成再生植株要经过C_和 E_。如果要确保再生植株中含有抗虫基因，可在 C过程的培养基中加入_。(4)目的基因能否在棉花植株体内维持和表达其遗传特性的关键是_。这
2、需要通过检测才能知道，检测采用的方法是_。2抗凝血酶蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。下列是生产这两种酶的相关思路，请回答下列问题： (1)图 1为通过培育转基因奶牛获得抗凝血酶蛋白的流程。图中过程 a指的是利用_法将目的基因导入受精卵，受体细胞不选用体细胞的理由是_。在胚胎移植前，需进行_，目的是确定要培育的个体能产奶。可采用_法来鉴定牛奶中是否含有抗凝血酶蛋白。(2)从牛胃液中分离得到的凝乳酶以其催化能力强而被广泛应用，研究人员运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中。从牛胃细胞中提取 mRNA，再通过_形成 cDNA。以此
3、cDNA为模板通过 PCR扩增目的基因，有时需要在引物的 5端设计_(填“限制酶” 、 “DNA连接酶”或“RNA 聚合酶”)识别序列，以便构建重组DNA分子。为提高重组 DNA分子的比例，在构建重组 DNA分子(如图 2所示)时最好选用_作限制酶。2经研究发现，如果将该凝乳酶的第 20位和 24位氨基酸变为半胱氨酸，则其催化能力将提高 2倍。现已知通过蛋白质工程可生产高效凝乳酶，请写出有关制备步骤：_ _。答案：(1)显微注射 动物体细胞的全能性一般不能表现 性别鉴定 抗原抗体杂交(2)逆转录 限制酶 BamH 和 Pst 找到相对应的脱氧核苷酸序列定向改造凝乳酶基因将改造后的凝乳酶基因导入
4、受体细胞等(答案合理即可)3.如图所示为动物细胞培养过程中，动物细胞增殖情况的变化曲线(图中 B、D 两点表示经筛选后继续培养)，请据图回答下面的问题：(1)OA段的培养称为_培养，AB 段可能发生了_现象，需要用_酶处理，以使组织细胞分散开来。3(2)动物细胞培养和植物组织培养过程中，就细胞增殖、分化来说，动植物细胞都要进行_，不同的是植物细胞还要进行_。(3)为制备单克隆抗体，需将_注射到小鼠体内，以此获取_细胞，同时可选取图中_点的细胞与该细胞融合形成杂交细胞，所选取细胞的细胞膜上的_比正常细胞显著减少。为筛选出能够产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，可用_培养基达到目的。答案：(1)原代 接触
5、抑制 胰蛋白(2)增殖(或分裂) 脱分化和再分化(3)抗原 浆 D 糖蛋白 选择4我们日常吃的大米中铁含量极低，科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高 60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。下面为培育转基因水稻过程示意图，请回答：(1)在上述工程中，铁结合蛋白基因称为_，获取该基因后常用_技术进行扩增。(2)构建重组 Ti质粒时，通常要用同种限制酶分别切割_和_。将重组 Ti质粒转入农杆菌时，可以用_处理农杆菌，使重组 Ti质粒易于导入。(3)将含有重组 Ti质粒的农杆菌与水稻愈伤组织共同培养时，通过培养基 2的筛选培养，可以获得_；培养基 3与培养基 2的区别是_。(4)
6、检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻_。解析：本题中培育转基因水稻的目的是获得铁含量比普通大米高的大米，因此目的基因为铁结合蛋白基因，要大量获得此基因一般采用 PCR技术进行扩增。若构建重组质粒则要用同种限制酶切割含目的基因的 DNA片段和质粒。将外植体培养成试管苗的过程要用到不同的培养基，各培养基最明显的差别在于所添加激 素的比例不同。答案：(1)目的基因 PCR (2)含目的基因的 DNA片段 质粒 CaCl 2 (3)含有重组质粒的愈伤组织 生长素和细胞分裂素的浓度比例 (4)种子中铁含量5为探究 SHH基因与角化囊肿发生的相关性，科研人员利用 SHH基因的非模板链转录合
7、成的 RNA作为探针，进行分子杂交实验，以检测 SHH基因在角化囊肿中的表达情况。其基本流程如下图( Amp表示氨苄青霉素抗性基因； LacZ基因被 SHH基因插入后不表达)。4请回答：(1)重组载体中 SHH基因转录合成 RNA探针时，_(填“需要”或“不需要”)启动子。(2)步骤中，用 Ca2 处理大肠杆菌，使之成为_细胞，然后导入重组载体。实验中，用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌，未导入质粒的细菌将会死亡，原因是这些细菌不含有_基因。(3)能表达 LacZ基因的大肠杆菌在 含有 IPTG和 Xgal的培养基上会形成蓝色菌落，易于识别。根据上述原理可以初步判断_(填“蓝色”或“白色”)
8、菌落中的大肠杆菌为重组菌。(4)将制备的探针加入角化囊肿切片中，探针将与_形成杂交带，进而判断 SHH基因的转录情况。答案：(1)需要 (2)感受态 Amp(或氨苄青霉素抗性或抗性) (3)白色 (4) SHH转录的 mRNA(只写 mRNA不对)6马铃薯是种植广泛的农作物，病毒侵染后导致产量大幅下降，培育脱毒的马铃薯品种是提高产量的有效方法。请分析并回答。(1)马铃薯茎尖病毒极少甚至无病毒，因此可将马铃薯茎尖接种在培养基中，经过人工培养获得脱毒苗。培养基中添加_(填激素名称)，诱导离体细胞经过_和_完成组织培养过程，从而形成脱毒苗。为监控脱毒苗的质量，可采用_的方法检测病毒的蛋白质。(2)研
9、究人员研究了茎尖外植体大小对幼苗的成苗率和脱毒率的影响，实验结果如图。实验结果表明，茎尖越小，_，因此马铃薯脱毒培养中茎尖外植体的适宜大小为_mm。解析：(1)离体的植物组织必须在植物激素的作用下才能经脱分化形成愈伤组织，然后经再分化形成具有5根、茎、叶的植物体。检测病毒的蛋白质要用抗原抗体杂交法。(2)据图可知，茎尖越小，脱毒率越高，成苗率越低，当茎尖大小为 0.27 mm时脱毒率和成苗率相对都较高。答案：(1)生长素和细胞分裂素 脱分化 再分化 抗原抗体杂交(2)脱毒率越高，成苗率越低 0.277如图是植物体细胞杂交过程示意图，如果 A、B 植物均为二倍体，据图回答下列问题：(1)图中所示
10、过程的原理有：_。(2)图中的过程是_。(3)植物体细胞融合成功的标志是_，其产生与细胞内_(细胞器)有关。(4)和过程分别是_和_过程。该杂交植株有_个染色体组。(5)该技术的最显著优势是：_。答案：(1)细胞膜具有一定的流动性、植物细胞具有全能性(缺一不可) (2)(去壁)制备原生质体 (3)形成新的细胞壁 高尔基体 (4)脱分化 再分化 四 (5)克服远缘杂交不亲和的障碍8如图是科学家利用小鼠成纤维细胞获得单克隆抗体的示意图。请据图回答：6(1)获取转录因子基因需要的工具酶是_，因成纤维细胞较小，过程将目的基因导入小鼠成纤维细胞时常用的载体是_。(2)过程称为_，在此过程中，成纤维细胞在
11、转录因子基因的作用下，转化为 iPS胚性细胞，在体外培养条件下，iPS 胚性细胞能不断进行_。(3)过程为动物细胞融合，此过程常用_、灭活的病毒、电刺激等诱导细胞融合，融合后的 Y细胞具有_的特性。(4)对杂种细胞 Y进行_和_后，才能筛选出能产生特异性抗体的杂种细胞。答案：(1)限制酶 动物病毒(2)动物细胞培养 细胞增殖(细胞分裂)(3)聚乙二醇(PEG) 既能大量增殖，又能产生单一抗体(4)克隆化培养 (抗原)抗体检测9研究人员利用生物工程技术，探究猪 bmp15基因在不同组织细胞中的特异性表达。该工程技术基本流程如下图(EGFP 基因控制合成增强型绿色荧光蛋白；过程表示表达载体 2成功
12、导入各组织细胞)。请回答：(1)过程中，需利用_限制酶处理表达载体 1。(2)过程中，常采用_技术将表达载体 2成功导入受体细胞。(3)在实验结果的基础上，提取上述猪肌肉细胞的_(填“mRNA”或“DNA”)，利用标记的_作探针，进行分子杂交，可进一步探究猪 bmp15基因特异性表达的原因。(4)据实验结果推测，猪 bmp15基因在_细胞特异性表达。答案：(1) Xho和 Hind (2)显微注射(3)mRNA EGFP 基因(4)猪卵巢10如图表示构建转入了人抗 体基因的小鼠生产人源性单克隆抗体的流程。请据图回答下列问题：(1)图示过程涉及的生物技术有_、_、_。7(2)构建的基因表达载体除
13、含有人抗体基因、标记基因外，还应具有_。(3)向转基因小鼠注射特定的抗原后，从小鼠的_中提取 B淋巴细胞；过程通常用_诱导。(4)细胞 X是_，体外培养细胞 X所用的培养液必须添加_等天然成分，培养过程中会产生接触抑制吗？_。答案：(1)转基因技术 动物细胞培养 动物细胞融合(其他合理答案亦可) (2)启动子、终止子 (3)脾脏 聚乙二醇或灭活的病毒 (4)杂交瘤细胞 血浆或血清 不会11阅读如下资料：资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠” ；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。资料乙：T 4溶菌酶在温度较高时易失去活性。科学家对编码 T4溶菌酶的基因
14、进行了改造，使其表达的 T4溶菌酶第 3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第 97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了 T4溶菌酶的耐热性。资料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家将兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎可在不同个体的体内发育。回答下列问题：(1)资料 甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用_法。构建基因表达载体常用的工具酶是_和_。在培育有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是_。(2)资料乙属于_工程的范畴，该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对_进行改造，或
15、制造一种_的技术。在该实例中，引起 T4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的_ _序列发生了改变。(3)资料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到_种的、生理状态相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。在资料丙的实例中，兔甲称为_体，兔乙称为_体。答案：(1)显微注射 限制性核酸内切酶(限制酶) DNA 连接酶 农杆菌可感染植物，将目的基因 转移到受8体细胞中 (2)蛋白质 现有的蛋白质 新蛋白质 氨基酸 (3)同 供 受12埃博拉病毒(EBOV)是一种能引起人类和灵长类动物发生埃博拉出血热(EBHF)的烈性病毒，利用相应的生物学技术制备出抗 EBOV的单克
16、隆 抗体，可快速检测 EBOV。请回答下列问题： (1)方法一：给小鼠注射纯化的 EBOV蛋白，一段时间后，从小鼠的_中获取浆细胞，将获得的浆细胞与小鼠的_细胞融合，再经过至少_次筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞。(2)方法二：科学家从细胞中分离出无限增殖基因(prG)，可将 prG基因导入能产生抗 EBOV抗体的小鼠浆细胞中，导入 prG基因的浆细胞具有_的特点。(3)以上两种方法获得的杂交瘤细胞或带有 prG基因的浆细胞，可在_的环境、营养充足、适宜的_和一定的气体环境等条件下进行体外培养，以便源源不断的产生抗 EBOV的单克隆抗体。(4)方法二中，若用 PCR扩增方法获取目的基因，
17、则需要用到_酶，该方法能够成功获取目的基因的前提是_，以便合成引物。答案：(1)脾脏 骨髓瘤 两 (2)既能无限增殖，又能产生抗 EBOV的(特异性或专一性或所需的)抗体 (3)无菌、无毒 温度和 pH (4)耐高温的 DNA聚合(或“ Taq酶”) 要有一段已知目的基因的核苷酸序列13良种猪繁殖成功率较低，该现象与早期胚胎细胞的异常凋亡有关。Bc12 基因是细胞凋亡抑制基因，用 PCR技术可检测出该基因的转录水平，进而了解该基因与不同胚胎时期细胞凋亡的关系。克隆猪的培育及该基因转录水平检测流程如下图，图中 a、b、c、d 分别代表流程中某过程。请回答：(1)图中重组细胞的细胞核来自_细胞。a
18、 过程采用的技术手段称作_技术。(2)b过程所用的培养液与植物组织的培养基从成分上主要区别是前者必须含有_；c 过程表示_。(3)d过程需要_酶的催化。从基因组数据库中查询 Bc12 mRNA的核苷酸序列，以便根据这一序列设计合成 2种_用于 PCR扩增，除此以外在 PCR反应体系中还应包含的主要成分有扩增缓冲液、水、4种脱氧核苷酸、模板 DNA以及_，PCR 扩增过程第一轮循环的模板是_。(4)若 cDNA经 PCR技术 n次扩增后检测出其中 Bc12cDNA 的分子数为 m，则总 mRNA中 Bc12mRNA 的分子数为_，从而说明不同胚胎时期 Bc12 基因的转录水平及其与细胞凋亡的关系
19、。9答案：(1)良种猪的体细胞 体细胞核移植 (2)动物(猪)血清 胚胎移植 (3)逆转录 引物 TaqDNA聚合酶(热稳定 DNA聚合酶) Bc12cDNA (4)m2n14根据下面植物体细胞杂交技术流程图，回答相关问题：(1)运用传统有性杂交(即用番茄、马铃薯杂交)自然状态下不能得到杂种植株，原因是_。(2)在利用杂种细胞培育杂种植株的过程中，依据的原理是_，其中过程称为_，植物体细胞融合完成的标志是_。(3)已知番茄、马铃薯分别为四倍体、二倍体，则“番茄马铃薯”属于_倍体植株 。(4)已知柴油树种子含有的柴油是植物细胞的代谢产物，可用植物组织培养来实现柴油的工业化生产。若利用此技术，将柴
20、油树细 胞培养到_阶段即可(填字母编号)。(5)若培育抗虫棉，将抗虫 基因通过适当的途径导入棉花受精卵，然后进行组织培养，该过程相当于_(填字母编号)。(6)人工种子是由发育到_过程(填字母编号)的结构包裹上人工种皮制备的。解析：(1)番茄和马铃薯属于两个物种，存在生殖隔离，不能通过有性杂交产生后代。(2)在利用杂种细胞培育杂种植株的过程中，依据的原理是细胞的全能性，其中过程称为原生质体融合，植物体细胞融合完成的标志是产生新的细胞壁。(3)由于番茄、马铃薯分别为四倍体、二倍体，因此“番茄马铃薯”属异源六倍体。(4)柴油是植物细胞的代谢产物，将柴油树细胞培养到愈伤组织阶段即可提取，愈伤组织阶段为
21、图中的 e阶段。(5)若培育抗虫棉，将抗虫基因通过适当的途径导入棉花受精卵，然后进行组织培养，包括脱分化和再分化两个阶段，即图中的。(6)人工种子是用胚状体包上人工种皮制成的。答案：(1)不同物种的植物存在生殖隔离 (2) 细胞的全能性 原生质体融合 产生新的细胞壁 (3 )六 (4)e (5) (6)f1015下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。(1)在获取抗体之前，需 要向健康人体注射特定抗原(如乙 肝疫苗)，并且每隔一周重复注射一次。免疫细胞 A在人体主要介导(参与)_免疫。 (2)过程和得到的 Y细胞称为_。得到的单克隆抗体最主要的优点是_。(3)过程需要_酶，过程则需要特定的
22、限制性核酸内切酶和 DNA连接酶。(4)抗体 1与抗体 2的氨基酸排列顺序相同，两者的空间结构是否相同？_为什么？_。(5)如果想用棉花产生该种抗体，则过程的受体细胞通常选用_，经过筛选后再侵染棉花体细胞，转化成功后通过_技术获得能产抗体的转基因棉花植株。答案：(1)体液 (2)杂交瘤细胞 特异性强、灵敏度高、并可能大量制备 (3)逆转录 (4)不同 抗体 2形成过程没有经过内质网和高尔基体的加工，抗体 1形成过程经过内质网和高尔基体的加工 (5)农杆菌 植物组织培养16叶绿体转基因技术是将外源基因整合到叶绿体基因组中，该技术能有效改良植物的品质。请回答下列问题：(1)转基因技术的核心步骤是_
23、，完成该步骤所需要的酶有_。(2)将植物体细胞处理得到原生质体，再通过_或_法，将目的基因导入原生质体，使原生质体再生细胞壁之后，通过_技术培养可得到相应的转基因幼苗。(3)来自原核生物中有重要价值的外源基因，无需改造和修饰就可在叶绿体中高效表达，据此分析，原因是_。(4)对大多数高等植物而言，与传统的细胞核转基因相比，叶绿体转基因更稳定，其遗传方式_(填“遵循”或“不遵循”)孟德尔分离定律，不会随_(填“花粉”或“卵细胞”)传给后代，从而保11持了_(填“父本”或“母本”)的遗传特性。答案：(1)构建基因表达载体 限制酶和 DNA连接酶(2)农杆菌转化法 基因枪 植物组织培养(3)叶绿体 D
24、NA与原核生物 DNA结构类似(4)不遵循 花粉 母本17将外源生长激素基因导入绵羊体内，转基因绵羊的生长速度比一般绵羊提高 30%，体型增大 50%。回答下列问题：(1)外源生长激素基因除可以从基因组文库中获取外，还可通过以下途径合成：利用从供体动物的_细胞中提取的 mRNA，在_酶催化下合成；二是通过分析生长激素_的序列推测基因的结构，进而人工合成。这两种途径合成的生长激素基因_(填“是”或“否”)一定相同，原因是_。(2)外源生长激素基因导入绵羊体内并成功表达，其核心步骤是_。(3)转基因绵羊胚胎的早期培养时添加血清的原因是_。为让移植胚胎容易成活，应对受体绵羊进行_处理。解析：(1)生
25、长激素是垂体合成分泌的，故只有在垂体细胞中才能提取到生长激素基因转录形成的 mRNA，再在逆转录酶的催化作用下合成生长激素基因。也可以通过分析生长激素的氨基酸序列，推测出其对应mRNA中的碱基序列，进而推测出生长激素基因中的 碱基序列，最后人工化学合成。因为决定氨基酸的密码子具有简并性，因而这两种方法合成的生长激素基因结构不一定相同。(2)基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建。(3)因为血清中含有细胞分裂、分化所必需的生长因子，早期胚胎进行培养时添加血清或血浆可促进胚胎细胞的分裂和分化。为让供体胚胎容易成活，需用一定的激素对受体进行同期发情处理。答案：(1)垂体 逆转录 氨基酸 否 一种氨基
26、酸可能不止由一种密码子决定(密码子的简并性)(答案合理即可)(2)基因表达载体的构建(3)血清中含有细胞分裂、分化所必需的生长因子(答案合理即可) 同期发情18科学家将鱼的抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。回答下列相关问题：(1)在该过程中，研究人员首先获取目的基因，并采用_技术对目的基因进行扩增，该技术需要的条件是：引物、酶、原料和_。(2)为了在番茄中获得抗冻蛋白必须将抗冻蛋白基因连接在质粒中的_之后。12(3)研究人员通常采用_法将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄细胞内，通常采用_技术，在分子水平检测目的基因是否翻译成了相应的蛋白质。(4)抗冻番茄的获得要经过脱分化和再分化过程，通
27、过脱分化过程形成_组织，该组织在再分化过程中细胞分裂的方式是_。答案：(1)PCR 模板 (2)启动子(3)农杆菌转化 抗原抗体杂交(4)愈伤 有丝分裂19为增加油菜种子的含油量，科研人员将酶 D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。(1)研究人员采用 PCR技术获取酶 D基因和转运肽基因，该技术是利用_的原理，使相应基因呈指数增加。所含三种限制酶( Xba、 Cla、 Sac)的切点如图所示，则用_和_处理两个基因后，可得到酶 D基因和转运肽基因的融合基因。(2)将上述融合基因插入上图所示 Ti质粒的_中，构建基因表达载体并导入农杆菌中。为了获得含融合基因
28、的单菌落，应进行的操作是_。随后再利用液体培养基将该单菌落菌株振荡培养，可以得到用于转化的侵染液。(3)剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间的目的是_，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，提取上述转基因油菜的 mRNA，在逆转录酶的作用下获得 cDNA，再依据_的 DNA片段设计引物进行扩增，对扩增结果进行检测，可判断融合基因是否完成_。最后采用抗原抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。解析：(1)采用 PCR技术扩增目的基因，利用的是 DNA双链复制的原理。转运肽基因、酶 D基因具有相同的酶切位点 Cla，故用 Cla和 DNA连接酶处理两个基因后可得到两基因相连的融合基因。(2
29、)利用农杆菌转化法导入目的基因，需要将目的基因插入农杆菌 Ti质粒的 TDNA中，所以构建基因表达载体需要将上述的融合基因插入 Ti质粒的 TDNA中。重组 Ti质粒上有四环素抗性基因，所以筛选含有融合基因的单菌落需要将获得的农杆菌接种在含有四环素的固体培养基上培养，再利用液体培养基将筛选得到的单菌落13菌株振荡培养，可以得到用于转化的侵染液。(3)受体细胞是植物细胞时通常采用农杆菌转化法，故需剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞。若融合基因完成转录，则提取转基因油菜的 mRNA，再逆转录获得 cDNA，cDNA 可以在融合基因的引物作用下进行扩增，故可通过检测
30、扩增结果判断融合基因是否完成转录。答案：(1)DNA 双链复制 Cla DNA 连接酶(2)TDNA 将获得的农杆菌接种在含四环素的固体培养基上培养(3)利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 融合基因 转录20如图是植物细胞杂交过程示意图，请据图回答： (1)植物体细胞杂交的第步是去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体。目前此步骤最常用的方法是酶解法，也就是在温和的条件下用_等分解植物的细胞壁。(2)人工诱导过程原生质体融合的物理方法是：利用_(至少写出两种)等促使原生质体融合；化学方法是用_等试剂作为诱导剂诱导融合。动物细胞融合与植物原生质体融合的诱导方法类似，动物细胞的融合还常用到_作为诱导剂。(
31、3)表示融合后的原生质体再生细胞壁，新细胞壁的产生与细胞内_(细胞器)有密切关系。(4)图中过程表示_，过程表示_，由杂种细胞培育成杂种植株所依据的原理是_。(5)植物体细胞杂交在育种工作中具有广泛的应用价值，其突出的优点是 _。答案：(1)纤维素酶、果胶酶(2)离心、振动、电激 聚乙二醇 灭活的病毒(3)高尔基体(4)脱分化 再分化 植物细胞的全能性(5)克服远缘杂交不亲和的障碍21如图是某实验室做的通过动物纤维母细胞等获得单克隆抗体的实验研究。据图回答相关问题：14(1)过程实施前需将诱导基因与_相连接构建_，在导入小鼠成纤维细胞时一般采用_法导入，此步骤中用到的工具酶有_ _。(2)过程
32、的实质是_。甲细胞是_细胞，乙细胞是_细胞。(3)过程一般用_诱导，丙细胞的特点是_。答案：(1)载体 基因表达载体 显微注射 限制酶、DNA 连接酶(2)基因的选择性表达 骨髓瘤 B(淋巴)(3)灭活的病毒(或聚乙二醇) 既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体22克隆猪成功率较低，与早期胚胎细胞异常凋亡有关。 Bcl2 基因是细胞凋亡抑制基因，用 PCR技术可以检测该基因转录水平，进而了解该基因与不同胚胎时期细胞凋亡的关系。克隆猪的培育及该基因转录水平检测流程如图。请回答：(1)图中重组细胞的细胞核来自_细胞，早期胚胎移入受体子宫继续发育，经桑椹胚、囊胚和_胚最终发育为克隆猪。(2)在 PCR过程中可检测出 cDNA中 Bcl2 cDNA的分子数，进而计算总 mRNA中 Bcl2 mRNA的分子数，从而反映出 Bcl2 基因的转录水平。图中 X表示_过程。在 PCR过程中利用_技术可检测出 cDNA中 Bcl2 cDNA的分子数。(3)该过程所涉及的现代生物技术有早期胚胎培养、胚胎移植、_和_。(4)目前使用的供体细胞一般都选择传代 10代以内的细胞，原因为_。15答案：(1)体 原肠(2)反转录 DNA 分子杂交(3)动物细胞培养 核移植技术(4)传代 10代以内的细胞保持正常的二倍体核型
