1、ICS 67 X 04 DB13 河北省 地方标准 DB 13/T 5189.7 2020 天然植物提取物中危害成分检测 第 7 部分：天然番茄红中苯并 芘的测定 2020 - 06 - 28 发布 2020 - 07 - 28 实施 河北省市场监督管理局 发布 DB13/T 5189.7 2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 DB13/T 5189天然植物提取物中危害成分的测定共分 12个部分： 第 1 部分： 亚硝酸盐的测定； 第 2 部分： 二氧化硫的测定； 第 3 部分： 正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇 5 种有机溶剂残留的测定； 第 4 部
2、分：辣椒提取物中砷、铅、镉、铬、汞的测定； 第 5 部分：万寿菊提取物中对氧基苯胺的测定； 第 6 部分：万寿菊提取物中乙氧基喹啉的测定； 第 7 部分：天然番茄红中苯并 芘的测定； 第 8 部分：辣椒提取物中苏丹红的测定； 第 9 部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定； 第 10 部分：辣椒红中赭曲霉毒素 A 的测定； 第 11 部分：叶黄素中苯的测定； 第 12 部分：甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定。 本部分为 DB13/T 5189的 第 7部分。 本标准由河北省市场监督管理局提出并归口。 本标准起草单位：晨光生物科技集团股份有限公司、河北省食品检验研究院、石家庄海关技术中 心、清河食品
3、药品检验所。 本标准主要起草人：连运河、杨清山、史国华、吉桂珍、程远欣、艾连峰、张凤霞。 DB13/T 5189.7 2020 1 天然植物提取物中危害成分检测 第 7 部分：天然番茄红中苯并 芘的测定 1 范围 本部分规定了天然番茄红中苯并 芘的高效液相色谱 -荧光检测器测定方法。 本部分适用于天然番茄红中苯并 芘的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件 的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 。 3 原理 试样经溶剂 提取 、凝胶渗
4、透色谱净化后，用反相高效液相色谱分离，荧光检测器检测，根据色谱 峰的保留时间定性，外标法定量。 4 试剂或材料 警告：苯并 芘是一种已知的强致癌物质， 测定时应特别注意安全防护 。 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的 一 级水。 4.1 试剂 4.1.1 环己烷（ C6H12）。 4.1.2 乙酸乙酯（ C4H8O2）。 4.1.3 乙腈（ C2H3N）：色谱纯。 4.2 试剂配制 环己烷 乙酸乙酯： 1+1（体积比）：量取 500 mL环己烷与 500 mL乙酸乙酯混合均匀。 4.3 标准品 苯并 芘：（ C20H12， CAS: 50-32-8）：纯度
5、99 %，或具有标准物质证书。 4.4 标准溶液配制 DB13/T 5189.7 2020 2 4.4.1 苯并 芘标准储备溶液（ 1.0 mg/L）：称取苯并 芘标准物质适量（精确值 0.01 mg）， 用乙腈稀释至浓度为 1.0 mg/L， 4 避光保存，有效期 1 年。 4.4.2 苯并 芘标准工作溶液（ 10.0 g/L）：取苯并 芘准储备溶液（ 1.0 mg/L） 1.00 mL， 用乙腈定容至 100 mL， 4 避光保存，有效期 1 个月。 4.4.3 标准使用溶液配制：准确量取标准储备液（ 1.0 mg/L） 0.1 mL、 0.5 mL、 1 mL、 2 mL、 5 mL 至
6、 100 mL 容量瓶中，用乙腈定容至刻度，充分摇匀，得到浓度为 1 g/L、 5 g/L、 10 g/L、 20 g/L、 50 g/mL 的系列标准使用液，现配现用。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪：配有荧光检测器。 5.2 凝胶渗透色谱净化系统（ GPC）。 5.3 分析天平：感量为 0.1 mg 和 0.01 mg。 5.4 涡旋混匀器。 5.5 超声波清洗器。 5.6 离心机。 5.7 旋转蒸发仪。 6 试验步骤 6.1 提取 称取样品 0.1 g（精确至 0.1 mg）于 50 mL离心管中，加入环己烷 乙酸乙酯混合溶液 25 mL，混匀， 超声 提取 10 min后，离心
7、 5 min， 转速 5 000 r/min。 上清液过 0.45 m有机滤膜后作待净化液。 6.2 净化 取待净化液于 GPC样品管中，进行 GPC净化，进样量 5 mL，收集洗脱液，于 40 下旋转蒸发至干。 残渣用 2 mL乙腈超声溶解，过 0.45 m有机滤膜，供液相色谱检测 。 凝胶渗透色谱净化参考条件： a) 凝胶渗透色谱净化系统； b) 凝胶柱规格 400 mm*25 mm（内径）； c) 色谱柱填料 Bio-Beads S-X3（ 38 75 m）， 30 g； d) 流动相：环己烷 乙酸乙酯： 1+1（体积比）； e) 流速： 5 mL / min； f) 收集时间： 17
8、27 min（具体时间以实际标样为准）。 6.3 测定 6.3.1 色谱参考条件 色谱参考条件如下： DB13/T 5189.7 2020 3 a) 色谱柱： C18， 250 mm4.6 mm， 5 m，或 性能 相当者； b) 流动相：乙腈 水 ： 88+ 12（体积比 ） ， 等度洗脱； c) 柱温： 40 C； d) 激发波长： 384 nm， 发射波长： 406 nm； e) 流速： 1.0 mL / min； f) 进样量： 10 L。 6.3.2 测定 分别检测标准使用溶液和制备的样品液， 以保留时间定性 ， 外标法定量 ，色谱图见附录 A。 6.3.3 空白试验 除不加试样外，
9、均按上述测定条件和步骤进行。 7 试验结果 试样中苯并 芘含量按式（ 1）计算 。 s s A c VX Am （ 1） 式中： X 试样中苯并 芘的含量，单位为微克每千克 （ g/kg） ； A 样液中苯并 芘的色谱峰面积； sc 标准工作 溶 液中苯并 芘的浓度，单位为 微 克每升 （ g/L） ； V 样 品的 最终 稀释提交，单位为毫升（ mL） ； sA 标准工作 溶 液中苯并 芘的色谱峰面积； m 试样质量，单位为克 （ g） 。 计算结果需扣除空白值， 计算结果以重复性条件下获得的两次独 立测定结果的算术平均值表示， 保留三位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测
10、试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。 9 检出限和定量限 检出限为 10.0 g/kg，定量限为 35.0 g/kg。 DB13/T 5189.7 2020 4 A A 附 录 A （资料性附录） 高效液相色谱图 苯并 芘 标准溶液色谱图，如图 A.1所示。 数据文件名 : s t d - 甜味 2 . l c d 样品 I D : s t d 0 .0 2 .5 5 .0 7 .5 1 0 . 0 1 2 . 5 1 5 . 0 1 7 . 5 2 0 . 0 2 2 . 5 m i n 0 50 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 mV 检测器 A E x :3 8
11、4 n m ,E m :4 0 6 n m 图 A.1 苯并 芘 标准溶液色谱图 样品中的 苯并 芘 检测色谱图，如图 A.2所示。 数据文件名 : Y L 3 - 0 1 3 3 - 1 8 0 6 2 8 C. l c d 样品 I D: s t d 0 1 1 0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0 . 0 1 2 . 5 1 5 . 0 1 7 . 5 2 0 . 0 2 2 . 5 m i n 0 25 50 75 1 0 0 1 2 5 1 5 0 1 7 5 mV 检测器 A Ex : 3 8 4 n m , E m : 4 0 6 n m 图 A.2 样品中的 苯并 芘 色谱图 _ 苯并 芘 苯并 芘
