1、第五节 菌种的衰退、复壮和保藏,一、菌种的衰退及其防治 1、衰退：是指由于自发突变的结果，而使某种原有一系列生物学性状发生量变或质变的现象。 如原有形态性状变得不典型了，生长速度变慢，代谢产物生产能力下降，致病菌对宿主侵染力的下降，对外界不良条件包括低温、高温或噬菌体侵染等抵抗能力的下降等。,2、衰退的防止（1）控制传代次数 （2）创造良好的培养条件 （3）利用不易衰退的细胞传代 （4）采用有效的菌种保藏方法,二、菌种的复壮1、复壮的定义： 狭义复壮：指的是在菌种已在发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型性状，生产性能等指标，从已衰退的群体中筛迁出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有的性
2、状的相应措施。 广义的复壮：是一项积极的措施，即在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，主经常有意识地采服纯种分离和生产性状的测定工作，以期众中选择到自发的正变个体。,2、复壮的方法1）纯种分离 通过纯种分离,可把退化菌种细胞群体中一部分仍保持原有典型性状的单细胞分离出来,经扩大培养,就可恢复原菌株的典型性状。常用的分离纯化的方法有平板稀释法、单细胞或单孢子分离法等。,2）通过寄主体进行复壮 -对于寄生性的退化菌株,可回接到相应寄主体上,以恢复或 提高其寄 生性能。例如,根瘤菌属经人工移接,结瘤固氮能力减退,将其回接到相应豆科寄主植物上,令 其侵染结瘤,再从根瘤中分离出根瘤菌,其结瘤固氮性能就可
3、恢复甚至提高。,3）淘汰已衰退的个体 -例如对“5406”放线菌的分生孢子,采用-10-30处理57天,其死亡率达80%,在抗低温的存活个体中,留下了未退化的健壮个体。,三、菌种的保藏 1、菌种保藏的原理首先要挑选典型菌种的优良纯种,最好采用它们的休 眠体(如分生孢子、芽孢等);其次,创造一个最有利休眠的环境条件,如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂等。,2、菌种保藏方法1）斜面菌种低温保藏法-利用低温对微生物生命活动有抑制作用的原理进行保藏。把斜面菌种、固体穿刺培养物或菌悬液等,直接放入45冰箱中。保藏时间一般不超过3个月,到时必须进行移接传代,再放回冰箱。,2）砂土管保藏法-将
4、干燥砂粒与细土混合后灭菌制成砂土管,然后接种保藏 。若把砂土管放在低温或抽气后密封,效果更佳。此法适用于产孢子及芽孢菌种的保藏。保藏期110年 3）石蜡油封藏法-向培养好的菌种斜面上,加入灭菌石蜡油,高出斜面1cm,然后蜡封管口,放入冰箱。该法既可防止培养基水分蒸发,又能使菌种与空气隔绝。保藏期12年,4）真空冷冻干燥法-是目前较理想的一种方法。在低于-15下,快速将细胞冻结, 并保持细胞完整,然后在真空中使水分升华致干。在此环境中,微生物的生长和代谢都暂时停止,不易发生变异,故可长时间保存,一般为510年,最多可达15年之久。此法兼备了低温、干燥及缺氧几方面条件,使微生物可以保存较长时间,但
5、手续较麻烦,需要一定的设备。,3、菌种保藏中心 我国由于1979年7月成立了中国微生物菌种保藏管理委员会(CCCCM), -普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC)-中科院微生物所,北京(AS),真菌、细菌;中科院武汉病毒研究所,武汉(AS-IV),病毒。 -农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)-中国农业科学院土壤肥料研究所,北京(ISF)。 -工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)-轻工业部, -工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)-轻工业部食品发酵工业科学研究所, 南京(ID),真菌;卫生部药品生物制品检定所,北京(NICPBP),细菌；中国医学科学院病毒研究所,北京(IV),病毒。http:/www.china-cicc.org/ -抗菌素菌种保藏管理中心(CACC)-中国医学科学院抗菌素研究所北京(IA)；四川抗菌素工业研究所,成都(SIA),新抗菌素菌种;华北制药厂抗菌素研究所,石家庄(IANP),生产用抗菌素菌种。 -兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC)农业部兽医药品监察所,北京(CIVBP) 。,美国的“美国典型菌种收藏所”(ATCC)，保藏方式主要采用冷冻干燥和液氮超低温冻结法。,
